預(yù)處理對靜脈血抗環(huán)瓜氨酸肽抗體膠體金層析法檢測結(jié)果的影響

瞿國英（上海市濰坊社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，上海 200122）

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）患者外周血中存在的抗環(huán)瓜氨酸多肽（CCP）抗體已列入2009年美國風(fēng)濕病學(xué)會（ACR）和歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟（EULAR）提出的RA分類標(biāo)準(zhǔn)和評分系統(tǒng)中［1-2］?？笴CP抗體檢測方法主要包括酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、化學(xué)發(fā)光法（CIA）和膠體金免疫層析法（GICA）等。其中GICA檢測方法簡單、快速，可滿足抗CCP抗體即時檢驗(yàn)的需求［3］。但GICA檢測通常采用原倍血清標(biāo)本，檢測結(jié)果受實(shí)驗(yàn)條件和標(biāo)本處理的影響較大［4］。本文探討了不同采血管和標(biāo)本放置時間對血清抗CCP抗體GICA檢測結(jié)果的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本衛(wèi)生服務(wù)中心門診患者及體檢者178例，女95例、男83例，年齡18～76歲，平均43歲。

1.2 試劑 普通真空采血管和含促凝分離膠采血管（江蘇康健）；抗CCP抗體GICA及ELISA檢測試劑盒（上?？菩拢?。

1.3 方法 于肘正中靜脈采血12mL，分別注入3支普通真空采血管和2支含促凝分離膠采血管各3mL，普通真空采血管標(biāo)本室溫靜置2、4h后以全血標(biāo)本或以3 000r／min離心5 min后血清標(biāo)本，采用GICA法進(jìn)行抗CCP抗體檢測。同時以普通真空采血管3 000r／min離心5min血清標(biāo)本進(jìn)行ELISA檢測。所有檢測步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書要求操作。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；計數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α＝0.05，P＜0.05為比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 標(biāo)本靜置時間對檢測結(jié)果的影響 普通采血管標(biāo)本靜置2h后，全血GICA檢測抗CCP抗體陽性率為14.0%（25／178），25例GICA檢測陽性標(biāo)本，ELISA檢出陽性19例、陰性6例，153例GICA檢測陰性標(biāo)本ELISA檢測均為陰性，2種方法檢測結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。25例GICA檢測陽性全血標(biāo)本經(jīng)離心后的血清標(biāo)本GICA檢出陰性2例；靜置4h后，全血標(biāo)本檢出陰性陽性5例，陽性率為11.2%（20／178例），與靜置2h全血標(biāo)本檢測結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。靜置4h后，全血、血清標(biāo)本檢測陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 不同采血管對檢測結(jié)果的影響 分離膠采血管標(biāo)本靜置2h后，全血標(biāo)本及血清標(biāo)本血清標(biāo)本GICA檢測陽性率均為11.2%（20／178），與相同靜置時間、相同類型標(biāo)本檢測結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。靜置4h后普通采血管與分離膠采血管全血與血清標(biāo)本檢測結(jié)果比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。靜置2h后普通采血管血清標(biāo)本ELISA檢測陽性率為10.7%（19／178），與GICA法檢測結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同靜置時間及處理方式標(biāo)本抗CCP抗體檢測陽性率［%（n）］

3 討 論

GICA檢測具有操作簡單、耗時短、特異、靈敏、無需輔助試劑和儀器、結(jié)果可長期保存等特點(diǎn)，是目前較為常用的免疫學(xué)檢測技術(shù)之一，特別適用于社區(qū)醫(yī)院、野外作業(yè)，尤其適用于急診檢驗(yàn)和人群普查。

影響GICA檢測結(jié)果因素較多，試劑因素包括膠體金顆粒大小、膠體金標(biāo)記抗體量、包被抗原濃度和硝酸纖維素膜的質(zhì)量等，實(shí)驗(yàn)操作因素包括反應(yīng)溫度、判讀時間和加樣量等，除此之外，標(biāo)本預(yù)處理對于檢測結(jié)果的影響也較大［5］。本研究顯示，靜脈血標(biāo)本采集后靜置2h內(nèi)檢測，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果，其原因可能在于血液凝固不完全，存在大量纖維蛋白原，影響層析速度和均一性，抗原抗體出現(xiàn)非特異性結(jié)合而導(dǎo)致假陽性結(jié)果；在此時進(jìn)行高速離心，并不能改善結(jié)果。延長標(biāo)本靜置時間或使用含促凝分離膠采血管，可有效降低假陽性比例。本研究結(jié)果顯示，GICA和ELISA檢測結(jié)果符合率達(dá)99.4%。

抗CCP抗體GICA檢測試劑盒以其快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，已成為RA早期診斷的有力工具，并廣泛應(yīng)用于基層醫(yī)療單位［6］。在使用過程中，應(yīng)規(guī)范標(biāo)本預(yù)處理、實(shí)驗(yàn)操作和試劑儲存，避免因操作不當(dāng)引起的實(shí)驗(yàn)誤差。

［1］中華醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病學(xué)分會.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷及治療指南［J］.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2010，14（4）：265-270.

［2］唐福林.應(yīng)規(guī)范類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的診斷與治療［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，2004，84（12）：971-973.

［3］穆銀玉，吳巧萍，鄔露丹.膠體金檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體性能評價［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)生，2011，32（1）：84-85.

［4］叢玉隆，張海鵬，任珍群.血液學(xué)檢驗(yàn)分析前質(zhì)量控制的重要因素-標(biāo)本的采集及其控制［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，1998，21（1）：52-55.

［5］李永勤，楊瑞馥.以膜為固相載體的免疫膠體金快速試驗(yàn)［J］.微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展，2003，31（1）：74-78.

［6］張清，劉彧，徐滬濟(jì).類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎抗環(huán)瓜氨酸肽（CCP）抗體的快速篩查［D］.北京：全國第八屆中西醫(yī)結(jié)合風(fēng)濕病學(xué)術(shù)會議，2010.