茭白中農(nóng)藥殘留酶速測(cè)法假陽(yáng)性消除研究

[摘 要] 酶速測(cè)方法是基于不同有機(jī)磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶活性抑制程度不同而對(duì)農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)的方法。但茭白等樣本經(jīng)常出現(xiàn)檢測(cè)假陽(yáng)性問題。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)茭白在農(nóng)藥殘留酶速測(cè)中出現(xiàn)的假陽(yáng)性問題，對(duì)樣本前處理方法進(jìn)行改進(jìn)，以消除實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的假陽(yáng)性。研究了茭白樣本剪切長(zhǎng)度以及在加酶前對(duì)樣本提取液進(jìn)行加熱處理后的效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法在一定范圍內(nèi)可以消除茭白的假陽(yáng)性問題。

[關(guān)鍵詞] 酶速測(cè) 假陽(yáng)性 茭白

[中圖分類號(hào)] TS207.53 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1003-1650 （2013）06-0120-01

為了快速測(cè)定蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留，保障食品安全，農(nóng)藥殘留的酶速測(cè)技術(shù)得到了飛快發(fā)展，但此方法在測(cè)定某些特殊種類的蔬菜樣本時(shí)，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性，干擾測(cè)定結(jié)果，從而導(dǎo)致農(nóng)藥殘留數(shù)據(jù)可靠性降低，結(jié)果評(píng)價(jià)誤差增大，同時(shí)，對(duì)市場(chǎng)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)執(zhí)法帶來了很大困擾。用酶速測(cè)方法快速測(cè)定蔬菜中農(nóng)藥殘留時(shí)韭菜、茭白、蘿卜等樣品經(jīng)常出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。酶速測(cè)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶的活性有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥濃度呈正相關(guān)，用特制的分光光度計(jì)（農(nóng)殘速測(cè)儀）測(cè)定吸光值的變化，計(jì)算出抑制率，從而判斷出蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯的殘留情況。為了消除茭白中農(nóng)藥殘留測(cè)定假陽(yáng)性問題，本實(shí)驗(yàn)對(duì)酶速測(cè)法前處理環(huán)節(jié)進(jìn)行研究和改進(jìn)。

一、材料與方法

1.儀器與試劑

RP-410NM農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)儀北京瑞利分析儀器公司；電子天平（準(zhǔn)確度0.1g）上海精密科學(xué)儀器有限公司；恒溫水浴上海愛朗儀器有限公司；移液槍（2～50μl，1～5ml）；不銹鋼取樣器以及其他玻璃儀器。酶速測(cè)試劑（深圳兆赫實(shí)業(yè)有限公司）：pH8磷酸鹽緩沖液溶解；丁酰膽堿酯酶：用磷酸鹽緩沖液溶解，ΔA值控制在0.4～0.8之間；底物：碘代硫化丁酰膽堿（BTCI），用磷酸鹽緩沖液溶解；顯色劑：二硫代二硝基苯甲酸（DTNB），用磷酸鹽緩沖液溶解。

2.檢測(cè)過程

取2g切碎的茭白樣本，放入提取瓶?jī)?nèi)，加入20ml磷酸鹽緩沖液，2500r/min渦旋振蕩2min，倒出提取液，靜止3～5min；于小試管內(nèi)分別加入50μl酶液，3ml樣本提取液，50μl顯色劑，于37～38℃下放置30min后再分別加入50μl底物，倒入比色杯中，用酶速測(cè)儀進(jìn)行測(cè)定。

二、結(jié)果與分析

1.前處理?xiàng)l件優(yōu)化研究

1.1茭白樣品切碎長(zhǎng)度對(duì)抑制率的影響

將不含農(nóng)藥殘留的茭白樣品分別切成1.0cm和2.5cm長(zhǎng)，按1.2進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表1。

從表1中可以看出，樣品長(zhǎng)度為1.0cm時(shí)抑制率明顯的高于樣品長(zhǎng)度為2.5cm時(shí)的抑制率。由于中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 448-2001（蔬菜上有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法）中樣品切碎長(zhǎng)度要求為1～1.5cm，而且在實(shí)際測(cè)定中樣品長(zhǎng)度太長(zhǎng)不利于農(nóng)藥殘留測(cè)定，因此選擇樣品長(zhǎng)度1.0cm繼續(xù)進(jìn)行加熱與不加熱對(duì)抑制率影響的比較。

1.2樣品提取液不同溫度處理對(duì)抑制率的影響

選用茭白剪切長(zhǎng)度為1.0cm，按1.2在不同溫度下對(duì)樣品提取液加熱1min，測(cè)定其抑制率，結(jié)果見表2。

1.3在同一溫度下對(duì)樣品提取液加熱不同時(shí)間的抑制率在80℃對(duì)樣品提取液分別加熱1、2、3min后，測(cè)定其抑制率的變化，結(jié)果見表3。

從表2可以看出，加熱對(duì)抑制率的影響。隨著加熱溫度越高，抑制率降低，假陽(yáng)性影響減小。室溫下平均抑制率為50.8%，而加熱后抑制率顯著降低，90℃時(shí)平均抑制率僅為16.1%。由于80℃和90℃處理時(shí)抑制率相差不大。考慮到溫度太高可能會(huì)造成樣品中殘留農(nóng)藥的分解，因此選擇8 0℃進(jìn)行下一步研究。

從表3中可以看出，加熱溫度不變時(shí)，加熱時(shí)間對(duì)抑制率的影響不是很明顯，因此選擇加熱時(shí)間較短處理比較合理。本研究選擇加熱時(shí)間為1min。

通過以上研究確定農(nóng)藥殘留速測(cè)法優(yōu)化條件：樣品長(zhǎng)度1cm左右，加熱溫度80℃，加熱時(shí)間1min。

三、結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)研究了樣品剪切長(zhǎng)度、加熱處理對(duì)茭白在酶速測(cè)檢測(cè)中假陽(yáng)性消除效果。該方法表明，加熱處理可以在一定程度上消除酶速測(cè)中假陽(yáng)性影響，從而提高酶速測(cè)對(duì)茭白樣品中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

參考文獻(xiàn)

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