雞大腸桿菌的分離和鑒定及耐藥性監(jiān)測(cè)

[中圖分類號(hào)] S831 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1003-1650 （2013）05-0205-01

雞大腸桿菌病是由大腸桿菌引起的一種常見疾病。包括大腸桿菌性腹膜炎，輸卵管炎，滑膜炎，臍炎，氣囊炎，肉芽腫，炎和其他疾病，大腸桿菌到處是廣泛存在于自然環(huán)境中，因此，形成一個(gè)雞威脅整個(gè)過程，對(duì)家禽業(yè)的重大損失。大腸桿菌血清型，對(duì)當(dāng)?shù)亓餍芯旰筒煌逍?，同時(shí)，隨著抗生素的廣泛使用，并在強(qiáng)大腸桿菌的耐藥性，為臨床合理用藥，我們確定了滑縣境內(nèi)的大腸桿菌菌株，大型養(yǎng)雞場(chǎng)，并在此基礎(chǔ)上對(duì)藥物耐藥性的監(jiān)測(cè)。

一、材料

1.病料病禽的糞便或泄殖腔棉拭子，2009年10月采自滑縣某雞場(chǎng)

2.培養(yǎng)基

普通肉湯，普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂，試劑，生化反應(yīng)培養(yǎng)基等按《現(xiàn)代微生物培養(yǎng)基和試劑手冊(cè)》配制。伊紅美藍(lán)瓊脂（EMB），Mueller和hintion瓊脂（MH），北京陸橋商檢新技術(shù)公司生產(chǎn)， 批號(hào)分別為：005027，NCCLS（nationalcommittee laboratorystandards美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)）法規(guī)頒布的專用培養(yǎng)基。

3. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 18～22g昆明系小白鼠，購(gòu)于河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心

4.藥敏紙片

河南科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：091023， NCCLS規(guī)定的厚紙片，直徑6.25mm，分為10種：氨芐西林（AMP），哌拉西林（PIP），青霉素G（P G），卡那霉素（Kan），諾氟沙星（也不），完成了由湍流（TOB），頭孢哌酮（CFP），慶大霉素（GEN），氯霉素（CM P），阿米卡星（AKN）。

二、方法

1.菌株的分離與鑒定

1.1菌株的分離和培養(yǎng)方法：新鮮糞便或泄殖腔棉拭子，接種肉湯，37℃ 18～24 h劃線接種于EMB平板，經(jīng)過37℃ 18～24小時(shí)后可疑菌落，進(jìn)行革蘭染色鏡檢。上述培養(yǎng)特性和形態(tài)，染色反應(yīng)，與大腸桿菌菌株在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上純粹的增長(zhǎng)保持一致，生化鑒定。

1.2致病性試驗(yàn)

將上述生化反應(yīng)已鑒定為大腸桿菌的菌株接種于普通肉湯，用37℃ l8 h的肉湯培養(yǎng)物，分別腹腔接種18～22g的小白鼠，200ul/只，觀察存活情況。

2.耐藥監(jiān)測(cè)

分離后的大腸桿菌18株，采用Kriby-Bauer（K-B法）進(jìn)行耐藥性監(jiān)測(cè)方法，NCCLS紙片擴(kuò)散法和發(fā)布我的藥敏試驗(yàn)。菌株接到柵斜面上，37℃ 18小時(shí)，用生理鹽水沖洗草坪。細(xì)菌數(shù)量稀釋0.5麥斯威爾比濁管。對(duì)5x107-108 CFU/mL等效CFU/mL，MH10厘米直徑的培養(yǎng)皿瓊脂傾注了厚4毫米MH瓊脂平板，15雨用無菌棉簽蘸菌液濃度，管的內(nèi)壁將經(jīng)過3次是多余的菌液擠在瓊脂表面涂層。60每一個(gè)旋轉(zhuǎn)。最后，沿板邊涂抹一周。3～5分鐘后在室溫下干燥。無菌鑷子使用藥物的瓊脂盤中心表面，距離應(yīng)大于24毫米。從盤面邊緣板應(yīng)大于15 mill，35℃16～18小時(shí)

閱讀結(jié)果，記錄各紙片的抑菌圈直徑.

三、結(jié)果

1.菌株的分離與鑒定

大腸桿菌菌株L8分離，黑人在伊紅美藍(lán)瓊脂金屬光澤的菌落形成的革蘭氏陰性桿菌，兩端鈍，單或雙。該菌能發(fā)酵葡萄糖，乳糖，麥芽糖，甘露糖醇，蔗糖的酸氣，發(fā)酵幾株，酸或酸氣；MR陽性試驗(yàn)；V負(fù)P試驗(yàn)；生產(chǎn)吲哚；尿素酶試驗(yàn)陰性；硝酸鹽還原試驗(yàn)陽性；吲哚試驗(yàn)陽性；枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)陰性；糖鐵坡三酸，黃底黑現(xiàn)象，無氣。

2.致病性試驗(yàn)

18株大腸桿菌接種到小鼠l8-22 G。只有4在24小時(shí)內(nèi)死亡，其余的生活。

3.抑菌圈直徑的耐藥性監(jiān)測(cè)

結(jié)果見表l。

表1 耐藥性監(jiān)測(cè)抑菌圈直徑結(jié)果 mm

注：-無抑菌圈

4.按NCCLS法規(guī)判定的耐藥性

監(jiān)測(cè)試驗(yàn)

結(jié)果見表2。

表2 耐藥性監(jiān)測(cè)試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì) %

四、討論

1.的分離和鑒定，分離的18株大腸桿菌，4株致病性大腸桿菌，占22.22%。L株死于禽疾病，1株發(fā)病死亡，2株從健康的鳥。分布的農(nóng)場(chǎng)仍然致病性大腸桿菌。局部免疫性較高的鳥只有承運(yùn)人可以不表現(xiàn)癥狀，但是可以直接傳送到其他家的鳥，引起的死亡的發(fā)生率，應(yīng)注意及時(shí)消毒工作。

2.藥敏試驗(yàn)結(jié)果可以看出，大腸桿菌敏感率的主要藥物比哌拉西林，環(huán)丙沙星，慶大霉素，丁胺卡那霉素，妥布霉素，丁胺卡那霉素60%，頭孢哌酮藥物敏感率可以達(dá)到90%以上，為有效預(yù)防和控制大腸桿菌病有一定的參考價(jià)值。

3.種血清型的大腸桿菌？許多農(nóng)場(chǎng)，藥物是不一樣的。在耐藥監(jiān)測(cè)我們的氨芐青霉素的耐藥率為43.67%，卡那霉素的耐藥率為40%，氯霉素抗性是l3.33 %，這表明抗生素的長(zhǎng)期使用單一藥物耐藥的主要原因。因此，在臨床耐藥監(jiān)測(cè)應(yīng)定期進(jìn)行，選擇幾個(gè)敏感藥物交替使用，能收到較好的效果。