運(yùn)用高效液相色譜法分析苜蓿田除草劑殘留

摘 要：長(zhǎng)殘留除草劑大量應(yīng)用于苜蓿田，對(duì)于后茬作物的危害嚴(yán)重。試驗(yàn)運(yùn)用高效液相色譜法，分析肇東苜蓿田除草劑殘留，探討苜蓿除草劑殘留的篩查檢測(cè)技術(shù)，確立快速、有效的篩選方法，為正確評(píng)價(jià)長(zhǎng)殘留除草劑對(duì)苜蓿根系生長(zhǎng)環(huán)境的影響提供理論參考。

關(guān)鍵詞：肇東苜蓿；高效液相色譜法；除草劑殘留

中圖分類(lèi)號(hào) S54 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2013）15-95-02

Analysis of Herbicide Residues Using High-performance Liquid Chromatography（HPLC） in Alfalfa Field

Mu Dan et al.

（Jiamusi University，Jiamusi 154007，China）

Abstract：Long residue herbicides used in alfalfa field in great quantities are serious harm to subsequent crop. The test using high performance liquid chromatography（HPLC） analyzed Zhaodong alfalfa field herbicide residues，discussed screening tests technology of herbicide residue，and established a rapid，effective screening method. It should provide theoretical reference for correct evaluation of long herbicide residues effect on alfalfa root growth environment.

Key words：Medicago sativa L. cv. Zhaodong；High performance liquid chromatography；Herbicide residues

苜蓿是栽培面積最大的豆科牧草之一，我國(guó)苜蓿栽植面積達(dá)133.3萬(wàn)hm2。隨著苜蓿栽植面積的擴(kuò)大和產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程的加快，為了提高其質(zhì)量和產(chǎn)量，進(jìn)行苜蓿田雜草防除成為其日常養(yǎng)護(hù)管理的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。氯嘧磺隆、咪唑乙煙酸、異惡草酮是北方苜蓿田廣泛應(yīng)用的長(zhǎng)殘留性除草劑[1-3]。氯嘧磺隆以殺草譜廣、高度安全、防效顯著等特點(diǎn)，成為苜蓿田雜草防除的常用化學(xué)藥劑。但由于氯嘧磺隆在土壤中的長(zhǎng)殘留性，對(duì)后茬敏感作物毒害嚴(yán)重，影響苜蓿田的輪作換茬，對(duì)苜蓿田環(huán)境造成污染。本試驗(yàn)擬運(yùn)用高效液相色譜法，分析肇東苜蓿田除草劑巨能20%氯嘧磺隆WDG殘留，探討苜蓿除草劑殘留的篩查檢測(cè)技術(shù)，確立快速、有效的篩選方法，為正確評(píng)價(jià)長(zhǎng)殘留性除草劑對(duì)苜蓿根系生長(zhǎng)環(huán)境的影響程度提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 供試植物 肇東苜蓿（Medicago sativa L. cv. Zhaodong）是20世紀(jì)30年代由外省引種到黑龍江省肇東縣的紫花苜蓿，在當(dāng)?shù)卦耘囫Z化多年后定名肇東苜蓿[4-5]。肇東苜蓿植株多直立，花紫色，顏色深淺不一，葉片大小和葉形不整齊[6]。該品種抗寒性強(qiáng)，-33℃低溫下仍可露地越冬。

1.2 試劑與設(shè)備 試驗(yàn)試劑如下：甲醇、色譜純、雙蒸餾水、磷酸、磷酸二氫鉀、析純、巨能20%氯嘧磺隆WDG、氯嘧磺隆標(biāo)準(zhǔn)品等。巨能20%氯嘧磺隆WDG屬內(nèi)吸性傳導(dǎo)型除草劑，主要通過(guò)雜草根、芽吸收并迅速傳導(dǎo)，控制雜草的生長(zhǎng)。

試驗(yàn)設(shè)備如下：過(guò)濾器（濾膜孔徑為0.40μm）、微量進(jìn)樣器、色譜工作站（N3000雙通道色譜數(shù)據(jù)工作站）、超聲波清洗機(jī)、Prominence LC-20AB型高效液相色譜儀。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 提取方法 肇東苜蓿采集樣品粉碎標(biāo)準(zhǔn)為通過(guò)420μm網(wǎng)篩，稱(chēng)取肇東苜蓿采集粉碎樣品10g，加水20mL，加入丙酮100mL，均勻攪拌3min，采用涂布厚硅藻土1cm濾紙，過(guò)濾至減壓濃縮器中。濾紙上殘留物取出，再加入丙酮50mL，攪拌3min，過(guò)濾到減壓濃縮器中，濃縮（<40℃）至30mL。濃縮液移入300mL分液漏斗（預(yù)先加入100mL 10%氯化鈉溶液）中，洗滌（100mL乙酸乙酯）減壓濃縮器茄型瓶，將100mL乙酸乙酯洗液加入分液漏斗。振蕩器振蕩5min，靜置2min，將分液漏斗中乙酸乙酯層移入三角瓶中。再加入少量無(wú)水硫酸鈉，振蕩混勻，靜置15min，過(guò)濾到減壓濃縮器中。乙酸乙酯20mL洗滌三角瓶，再用此洗滌液洗滌濾紙上的殘留物，此過(guò)程重復(fù)2次，將洗滌液放入減壓濃縮器中，除去乙酸乙酯（<40℃）。

減壓濃縮器殘留物中加入正己烷50mL，移入200mL分液漏斗，加入正己烷飽和乙腈80mL，振蕩器振蕩5min，靜置2min，振蕩器振蕩后乙腈層移入200mL分液漏斗中。余下的正己烷層加入正己烷飽和乙腈50mL，混合均勻，靜置2min，分液漏斗中乙腈層移到減壓濃縮器中除去乙腈（<40℃），殘留物中加入2mL丙酮：甲醇（19∶1）混合溶液溶解。

1.3.2 凈化方法 液相色譜不銹鋼色譜管加入合成硅酸鎂（懸浮丙酮、甲醇混合溶液）5g，該色譜管上端加入無(wú)水硫酸鈉5g，液相色譜不銹鋼色譜管放出丙酮：甲醇（19∶1），溶至柱上端僅有少量丙酮：甲醇（19∶1）溶液。液相色譜不銹鋼色譜管加入高效液相色譜分析試驗(yàn)溶液，加入丙酮：甲醇（19∶1）溶液50mL，流出液棄掉。然后加入丙酮：甲醇（19∶1）溶液100mL，流出液收集到減壓濃縮器（<40℃）中，除去甲醇和丙酮。殘留物加入丙酮：正己烷（1∶1）溶液2mL溶解。500mg三甲胺基丙基甲硅烷基硅膠小柱加入丙酮：正己烷（1∶1）溶液20mL，流出液棄掉。500mg三甲胺基丙基甲硅烷基硅膠小柱加入丙酮：正己烷（1∶1）溶液15mL，流出液收集到減壓濃縮器中，除去正己烷和丙酮。余下殘留物加入乙腈：水（1∶1）溶液溶解，定容至1mL即為試驗(yàn)溶液。

1.3.3 測(cè)定方法 巨能20%氯嘧磺隆WDG試樣用色譜純（HPLC級(jí)試劑）甲醇溶解，以甲醇和蒸餾水（新蒸二次蒸餾水，溫度25℃真空脫氣）為流動(dòng)相，高效液相色譜儀Prominence LC-20AB使用C18為填料，對(duì)巨能20%氯嘧磺隆WDG試樣中的氯嘧磺隆進(jìn)行高效液相色譜分析測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色譜流動(dòng)相選擇 巨能20%氯嘧磺隆WDG分析時(shí)測(cè)得，流動(dòng)相：乙腈∶水∶磷酸=50∶50∶0.01（V/V）體積比，流速為1.0mL/min。巨能20%氯嘧磺隆WDG分析時(shí)間短，液相色譜出峰對(duì)稱(chēng)，保留時(shí)間適合，樣品加入磷酸促使巨能20%氯嘧磺隆WDG與雜質(zhì)分開(kāi)。

2.2 巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色譜檢測(cè)波長(zhǎng)選擇 巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色譜采用峰面積法或峰高法定量測(cè)定。采用相關(guān)方法確定所測(cè)主體是巨能20%氯嘧磺隆WDG；樣品純度高時(shí)，采用頂空色譜法測(cè)殘留溶劑；運(yùn)用離子色譜測(cè)定相關(guān)有機(jī)酸，巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色譜經(jīng)掃描在240nm有強(qiáng)吸收峰，液相色譜檢測(cè)波長(zhǎng)為240nm。

2.3 巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色譜檢測(cè)方法的線(xiàn)性相關(guān)性 巨能20%氯嘧磺隆WDG在液相色譜檢測(cè)波長(zhǎng)240nm處，移取巨能20%氯嘧磺隆WDG標(biāo)樣溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL，配制5個(gè)濃度巨能20%氯嘧磺隆WDG溶液稀釋至50mL，然后分別進(jìn)樣。獲得巨能20%氯嘧磺隆WDG線(xiàn)性方程為y=676.55x+3625.5，相關(guān)系數(shù)為r=0.999 6。

2.4 巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色譜檢測(cè)加樣標(biāo)回收率 稱(chēng)取巨能20%氯嘧磺隆WDG各樣品，加入定量標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定5個(gè)樣品加標(biāo)回收率（見(jiàn)表1）。由表1可知，巨能20%氯嘧磺隆WDG標(biāo)樣加入量在線(xiàn)性范圍內(nèi)，巨能20%氯嘧磺隆WDG標(biāo)樣與樣品加入量合理，說(shuō)明液相色譜檢測(cè)方法可行。

表1 巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色譜檢測(cè)加標(biāo)樣回收率

[編號(hào)＼加入量（mg）＼實(shí)測(cè)量（mg）＼回收率（%）＼1＼1.06＼1.04＼98.11＼2＼1.12＼1.15＼102.68＼3＼1.24＼1.23＼99.19＼4＼1.37＼1.38＼100.73＼5＼1.44＼1.43＼99.31＼]

2.5 巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色譜檢測(cè)方法精密度測(cè)定 巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色譜平行檢測(cè)5次，得平均值（X）為0.99；標(biāo)準(zhǔn)偏差（S）為0.065；變異系數(shù)（C·V/%）為6.4。巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色譜精密度測(cè)定結(jié)果在允許誤差范圍，該檢測(cè)方法得到的定量數(shù)據(jù)有效。

3 結(jié)論

肇東苜蓿田巨能20%氯嘧磺隆WDG殘留高效液相色譜分析試驗(yàn)方法有較高的準(zhǔn)確度和精密度，呈線(xiàn)性相關(guān)。該試驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)便、快速，是肇東苜蓿田巨能20%氯嘧磺隆WDG殘留的較為理想的分析方法。

參考文獻(xiàn)

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