巨尾桉DH3229組培育苗技術(shù)的初步探究

摘 要：以嫩芽、莖尖為外植體，研究巨尾桉DH3229的組織培養(yǎng)及育苗技術(shù)。實驗證明，不同的激素組合對巨尾桉DH3229外植體的誘導(dǎo)、生根有不同的影響。最適合誘導(dǎo)的增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L，其誘導(dǎo)出來的植株生長最快速，分枝最多，植株最高；最適合的生根培養(yǎng)基為MS+NAA 1mg/L+6-BA 0.2mg/L，生根率達94%，主根粗壯，平均長3根根須。但是移植到基質(zhì)為黃土的培養(yǎng)杯中育苗時，成活率最高的培養(yǎng)基是MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 0.2mg/L，成活率達93%。

關(guān)鍵詞：巨尾桉；組培；生根；移栽

中圖分類號 文獻標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2013）15-26-03

Study on Tissue Culture and Genetic Improvement of Eucalyptus grandis×Eucalyptus urophylla DH3229

Lu Juan et al.

（Yulin Forestry Research Institute of Guangxi，Yulin 537501，China）

Abstract：The tender buds were used as explants to study the tissue culture and genetic improvement of Eucalyptus grandis×Eucalyptus urophylla DH3229 in the experiment.The results were as follws： The optimal subculture medium was MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L，in which the plants grew expeditiously and strongly.The optimal rooting medium for test-tube plants was MS+NAA 1mg/L+6-BA 0.2mg/L，in which the rooting rate reached 94% and per plant could produce 3 roots.But the best optimum medium for plant transplantation was MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 0.2mg/L，in which the transplanting survival rate of the plants reached 93%.

Key words：Eucalyptus grandis×Eucalyptus urophylla；Tissue culture；Rooting；Transplant

桉樹（Eucalyptus）為桃金娘科桉樹屬植物的總稱，共有945個種和變種，原產(chǎn)地為澳大利亞和印度尼西亞及其附近的島嶼[1]。桉樹是世界三大速生樹種之一，也是經(jīng)濟林和防護林的理想樹種，而且具有速生豐產(chǎn)、適應(yīng)性廣、抗性強、繁殖容易等特點而被全球廣泛引種[1-3]。巨尾桉（Eucalyptus grandis×Eucalyptus urophylla）優(yōu)株是以巨桉（E·grandis）為母本、尾葉桉（E·urophylla）為父本的雜交種[4]。巨尾桉具有生長迅速、樹干圓滿通直、輪伐期短的特點，是發(fā)展工業(yè)原料林的優(yōu)良闊葉樹種，其木材用途廣，是造紙、造船和膠合板等的主要原料，木材暢銷[5]。

筆者利用不同生長調(diào)節(jié)劑對巨尾桉DH3229外植體組織培養(yǎng)及育苗方面進行研究，研究結(jié)果為解決巨尾桉快速繁殖大量優(yōu)質(zhì)種苗具有一定的指導(dǎo)意義，并且為實現(xiàn)規(guī)模化育苗提供理論基礎(chǔ)，對于建立高效、優(yōu)質(zhì)的桉樹外植體組織培養(yǎng)系統(tǒng)等研究也有重要參考價值。

1 材料與方法

1.1 材料 在廣西玉林市林業(yè)科學(xué)研究所孤木沖的優(yōu)良巨尾桉DH3229品系中，選擇樹干筆直、樹冠高大、生長良好的植株作為母本，在根部距離地面約20～30cm處進行環(huán)割，約100d后，取長出的嫩芽嫩莖作為外植體。

1.2 方法

1.2.1 外植體的選取和消毒

1.2.1.1 外植體的選取 用剪刀把生長良好的巨尾桉DH3229的嫩芽、莖尖剪取下來，用干凈的塑料袋裝好，密封。然后用流動的自來水沖洗干凈，隨后放到裝有飽和洗衣粉液的三角瓶中，振蕩5～10min，再用流動的自來水沖洗干凈，約沖洗2h，置于超凈工作臺備用。

1.2.1.2 外植體的消毒 在超凈工作臺上，用滅過菌的剪刀把預(yù)處理的外植體（嫩芽、莖尖）剪成0.5～1.0cm的長度，用75%酒精消毒30s，然后放到裝有0.1%氯化汞的玻璃瓶中，消毒10min，期間不斷振動，以便外植體滅菌徹底。之后，用無菌水清洗5次，最后用無菌的濾紙吸干水分，待用。

把消毒過的外植體接種于初代培養(yǎng)基中。該培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，附加3.5g/L的瓊脂、蔗糖濃度為25g/L，然后用1mol HCl和1mol NaOH把培養(yǎng)基的pH調(diào)至5.8～6.2，隨后把培養(yǎng)基分裝到150mL的廣口瓶中，121℃滅菌25min。

接種后培養(yǎng)條件為溫度（28±2）℃，光照時間超過10h/d，培養(yǎng)7d，每天觀察記錄不同消毒處理的外植體污染率的情況。

1.2.2 不同激素配比對外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響 把滅菌后無污染的莖尖、嫩芽轉(zhuǎn)接種于表1中的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每種處理接種10瓶，每瓶20株，每7d觀察記錄其誘導(dǎo)情況。

表1 誘導(dǎo)培養(yǎng)基（mg/L）

[處理＼基礎(chǔ)培養(yǎng)基＼6-BA＼NAA＼A（ck）＼MS＼0＼0＼B＼MS＼0.5＼0＼C＼MS＼0.5＼0.2＼D＼MS＼1＼0＼E＼1/2 MS＼0.5＼0＼F＼1/2 MS＼0.5＼0.2＼G＼1/2 MS＼1＼0＼]

1.2.3 不同激素配比對外植體生根培養(yǎng)的影響 把相同條件下得到的生長大小等較一致的增殖苗，于無菌環(huán)境中，用滅過菌的剪刀剪取0.5cm長度的莖尖，直立向上接種到表2中的生根培養(yǎng)基中，每種處理接種10瓶，每瓶20株，每7d觀察記錄其生長情況及統(tǒng)計生根率情況。

表2 生根培養(yǎng)基（mg/L）

[處理＼基礎(chǔ)培養(yǎng)基＼NAA＼6-BA＼IAA＼A（ck）＼MS＼0＼0＼0＼B＼MS＼0.5＼0＼0＼C＼MS＼0.5＼0.2＼0＼D＼MS＼1＼0.2＼0＼E＼MS＼0＼0＼0.5＼F＼MS＼0.5＼0＼0.5＼G＼MS＼0.5＼0＼1＼H＼1/2 MS＼0.5＼0＼0＼I＼1/2 MS＼0.5＼0.2＼0＼J＼1/2 MS＼1＼0.2＼0＼K＼1/2 MS＼0＼0＼0.5＼L＼1/2 MS＼0.5＼0＼0.5＼M＼1/2 MS＼0.5＼0＼1＼]

1.2.4 培育條件 除了另外說明外，實驗所用的MS、1/2MS培養(yǎng)基均按常規(guī)方法配制，在培養(yǎng)基中附加3.5g/L的瓊脂、蔗糖濃度為25g/L，然后用1mol HCl和1mol NaOH把培養(yǎng)基的pH調(diào)至5.8～6.2，隨后把培養(yǎng)基分裝到150mL的廣口瓶中，121℃滅菌25min。自然冷卻后備用。接種后，培養(yǎng)溫度為（28±2）℃，先黑暗培養(yǎng)7d，然后在光強度為2 000～2 500lx下每天光照12～14h，培養(yǎng)30d。

1.2.5 煉苗與移栽 將生根植株置于自然條件下煉苗7d，用清水洗干凈根部的培養(yǎng)基，然后用1%高錳酸鉀浸泡7～10min后，移植到基質(zhì)為黃心土的塑料營養(yǎng)杯里，移植后立即澆水，然后遮蔭。3d后用72%的農(nóng)用鏈霉菌清液噴灑一次，待小苗長出新葉就開始施肥，30d記錄生長情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同激素配比對外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響 從表3中可以看出，不同的激素對巨尾桉DH3229外植體的誘導(dǎo)有不同的影響。當(dāng)6-BA為0.5mg/L、NAA為0.2mg/L時（即處理C），巨尾桉DH3229外植體生長最快速，而且分枝多，植株最高，但是莖部較細(xì)小，與其他處理比較，仍適合用來做增殖培養(yǎng)（圖1）。6-BA濃度過高，會讓外植體生長過快，使得葉子出現(xiàn)黃色；在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中缺少NAA則會使得外植體生長不穩(wěn)定，表現(xiàn)出植株的高度不均一。在相同的激素條件下，巨尾桉DH3229的外植體在1/2 MS培養(yǎng)基上的生長情況沒有在MS培養(yǎng)基上的好。

表3 不同激素配比對外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響

[處理＼30d的生長情況＼A（ck）＼外植體生長緩慢，分枝較少，植株矮小，莖部較細(xì)小，葉子青色 ＼B＼外植體生長較快，分枝較多，植株高度不均一，莖部較粗，葉子青色＼C＼外植體生長最快速，分枝最多，植株最高，莖部卻細(xì)小，葉子淺綠色＼D＼外植體生長快速，分枝較多，植株矮小，莖部粗，葉子出現(xiàn)黃色＼E＼外植體生長較為快速，分枝較多，植株較高，莖部粗，葉子淺綠色＼F＼外植體生長較快，分枝較少，莖部細(xì)小，葉子較大，呈青色＼G＼外植體生長快速，分枝較多，莖部較粗，葉子細(xì)小，出現(xiàn)白色的愈傷組織＼]

圖1 不同激素配比對外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響

2.2 不同激素配比對外植體生根培養(yǎng)的影響 從表4中可以看出處理D，即MS+NAA 1mg/L+6-BA 0.2mg/L對巨尾桉DH3229的生根最為有利。植株生長快速，莖部粗壯，主根粗大，其根須也較多（圖2）。同時表4也說明，不同的激素對巨尾桉DH3229外植體生根有不同的影響。NAA與6-BA配比對巨尾桉DH3229生根的作用比較明顯，而且主根比較粗壯，而NAA與IAA的配比對巨尾桉DH3229的生根影響則相對沒那么顯著。其根系總體比較細(xì)小。在相同激素配比下，MS培養(yǎng)基比1/2 MS培養(yǎng)基的生根作用更好。

表4 不同激素配比對外植體生根培養(yǎng)的影響

[處理＼培養(yǎng)數(shù)量

（株）＼生根數(shù)量

（株）＼生根率

（%）＼生根情況＼A（ck）＼200＼87＼43.5＼植株生長緩慢，植株最矮小，莖部較細(xì)小，生根率低，根系不發(fā)達，長的根須纖細(xì)，1株只有1個主根＼B＼200＼156＼78.0＼植株生長較快，植株較高，莖部較粗，生根率高，主根較大，平均有2條根須＼C＼200＼165＼82.5＼植株生長較慢，植株矮小，莖部較粗，主根纖細(xì)，絕大部分植株有2條根須， 長3條根須的極少＼D＼200＼188＼94.0＼植株生長最快速，莖部最粗，主根粗大，平均有3條根須＼E＼200＼149＼74.5＼植株生長快速，莖部較粗，主根短而大，平均有2條根須＼F＼200＼171＼85.5＼植株生長快速，莖部較粗，主根短小，平均有2條根須＼G＼200＼120＼60.0＼植株生長緩慢，莖部較細(xì)，主根短而極小，只有1條根須＼H＼200＼167＼83.5＼植株生長較快速，莖部細(xì)，主根長而粗小，長有3條根須＼I＼200＼108＼54.0＼植株生長緩慢，植株中等，莖部細(xì)小，主根極短而粗，平均有2條根須＼J＼200＼146＼73.0＼植株生長較快，莖部較粗，主根短而粗，平均有1條根須＼K＼200＼170＼85.0＼植株生長較快，莖部細(xì)小，主根較小，平均有2條根須＼L＼200＼136＼68.0＼植株生長緩慢，莖部細(xì)小，主根細(xì)小，平均有1條根須＼M＼200＼164＼82.0＼植株生長緩慢，莖部細(xì)小，主根較小，平均有3條根須＼]

圖2 不同激素配比對外植體生根培養(yǎng)的影響

2.3 生根苗移植成活率及生長情況 待生根苗長到一定程度，先在自然條件下馴化7d，然后移植到營養(yǎng)杯中，其成活率及生長情況如表5所示。

表5 生根苗移植的生長情況

[處理＼培育數(shù)量（株）＼成活數(shù)量（株）＼成活率（%）＼A（ck）＼85＼12＼14.12＼B＼156＼59＼37.82＼C＼165＼152＼93.00＼D＼187＼139＼74.33＼E＼148＼108＼72.97＼F＼169＼135＼79.88＼G＼120＼58＼48.33＼H＼165＼61＼36.97＼I＼104＼89＼85.58＼J＼140＼96＼68.57＼K＼170＼92＼54.12＼L＼131＼102＼77.86＼M＼163＼78＼47.85＼]

從表4、5可以看出，移栽后的成活率與生根率沒有明顯的正比關(guān)系。處理D，即培養(yǎng)基為MS+NAA 1mg/L+6-BA 0.2mg/L時，其生根率最高，主根粗，莖部粗壯，但是移植后的成活率沒有預(yù)期中高。處理C，即MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 0.2mg/L，其成活率達93%。

3 小結(jié)與討論

（1）最適合誘導(dǎo)巨尾桉DH3229外植體的增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L，其誘導(dǎo)出來的植株生長最快速，分枝最多，植株最高，莖部卻較為細(xì)小。（2）最適合的生根培養(yǎng)基為MS+NAA 1mg/L+6-BA 0.2mg/L，生根率達94%，主根粗壯，其上平均長有3根根須。（3）移植到基質(zhì)為黃土的培養(yǎng)杯中育苗時，成活率最高的培養(yǎng)基是MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 0.2mg/L，成活率達93%。這可能與巨尾桉DH3229的根質(zhì)量有關(guān)。有研究表明，桉樹的木質(zhì)化程度與根的質(zhì)量呈正比關(guān)系[6]。因此，巨尾桉DH3229的木質(zhì)化與移栽成活之間的關(guān)系還有待進一步的研究。

參考文獻

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（責(zé)編：徐世紅）