三七總皂苷的β—環(huán)糊精包合物制備工藝

摘要：采用乙醇回流法提取三七總皂苷（PNS），并以其含量為指標(biāo)，運用正交設(shè)計的方法對三七總皂苷的β環(huán)糊精（？茁-CYD）包合物最佳制備工藝進行考察。結(jié)果表明，三七總皂苷的β-環(huán)糊精包合物最佳制備工藝為？茁-CYD與PNS質(zhì)量比（以下簡稱主客比）3∶1，？茁-CYD飽和水溶液pH 7.0，于水浴搖床中50 ℃下作用3 h。

關(guān)鍵詞：三七總皂苷（PNS）；制備工藝；β-環(huán)糊精（？茁-CYD）；包合物

中圖分類號：R944 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）22-5564-03

三七總皂苷（PNS）是五加科人參屬植物三七的有效活性成分，含有多種單體皂苷。具有擴張血管，降低心肌耗氧量，延長凝血時間，調(diào)節(jié)免疫等方面的藥理作用，臨床上主要用于心腦血管疾病的治療[1-4]。近年來隨著對其研究的不斷深入，又發(fā)現(xiàn)其有抑癌作用[5，6]，因此越來越受到人們的重視。由于PNS具有刺激性強、味道較苦、容易吸潮等特點，其臨床應(yīng)用受到一定的限制。β-環(huán)糊精（β-CYD）具有一個高0.79 nm、直徑為0.60～0.65 nm的非極性筒狀空腔，這種特殊的分子結(jié)構(gòu)賦予β-CYD可與其極性相似、分子大小與其空腔相匹配的不同類型的分子形成包合物[7]的特殊性質(zhì)，β-CYD不但能夠包合藥物中的有效成分，同時其作為藥物載體能夠除去藥物的異味，并提高其生物利用度[8]。以β-CYD對三七總皂苷進行包合，研究了PNS的β-CYD包合物制備工藝，以期為三七總皂苷的臨床應(yīng)用提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 TU-1800紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；BP211D電子天平（北京賽多利斯）；RE-3000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵（上海亞榮生化儀器廠）；TGL-16G型高速離心機（江蘇金壇中大儀器廠）；電熱恒熱水浴鍋HH. S1122（北京長安科學(xué)儀器廠）；KQ2200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；PH030恒溫干燥箱（上海實驗儀器廠）。

1.1.2 試劑 三七藥材（云南產(chǎn)）、D101大孔樹脂、β-環(huán)糊精購于泰州市醫(yī)藥公司；標(biāo)準(zhǔn)品人參皂苷Rg1購自貴州迪大科技/科翔生物科技有限責(zé)任公司。硅膠G，泰州市恒泰器化玻有限公司。5%香草醛溶液（500 mg香草醛溶于10 mL冰醋酸，新鮮配制），高氯酸，其他化學(xué)試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 三七總皂苷的制備 稱取三七1 kg，采用正交試驗優(yōu)化三七總皂苷提取工藝，選取最佳提取條件。按Sun等[9]所報道的方法，制備PNS。

1.2.2 含量測定

1）對照品溶液的制備。精確稱取在60 ℃減壓干燥至恒重的人參皂苷Rg1對照品2.48 mg于25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即為0.099 2 g/L的對照品溶液。

2）供試品溶液的制備。精確稱取包合物2.48 mg于25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即為0.099 2 g/L的供試品溶液。

3）檢測波長的確定。吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液，顯色，經(jīng)TU-1800紫外可見分光光度計在800～200 nm范圍內(nèi)掃描，選定最大吸收波長560 nm為測定波長。

4）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精確吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL的對照品溶液，分別置于10 mL具塞試管中，揮干溶劑，加入新配制的5%香草醛溶液0.2 mL，高氯酸0.8 mL，在60 ℃水浴中加熱15 min，立即置冷水中冷卻，加入冰醋酸5.0 mL搖勻，放置15 min，相應(yīng)試劑設(shè)置空白對照，在波長560 nm處測定吸光度A，以吸光度為橫坐標(biāo)，人參皂苷Rg1含量（mg/mL）為縱坐標(biāo)，得回歸方程為■=0.231 9 x-0.000 9， r=0.999 4。結(jié)果表明，人參皂苷Rg1為0.049 6～0.297 6 mg/mL時有良好線性關(guān)系[10]。

5）包合率的確定。根據(jù)上述方法分別計算包合物和包合前三七總皂苷的含量，取兩者的比值即為包合率。

1.2.3 包合方法的選擇 分別用下列兩種方法處理，最后以分別計算包合率選擇最佳的包合方法。超聲波法：將β-CYD配制成飽和水溶液，50 ℃下加入0.1 g三七總皂苷溶解后，立即用超聲波清洗機處理，抽濾，無水乙醇洗滌沉淀，干燥，計算包合率；過飽和溶液法：取β-CYD 0.3 g，加入3.0 mL去離子水，50 ℃溶解，加入0.1 g三七總皂苷，攪拌溶解，至水浴濃縮，冷藏過夜，抽濾，無水乙醇洗滌沉淀，干燥，計算包合率。結(jié)果表明，超聲波法優(yōu)于過飽和溶液法，故選用超聲波法進行試驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 包合時間對包合率的影響

取0.3 g β-CYD配制成飽和水溶液，50 ℃下加入0.1 g三七總皂苷溶解后立即用超聲波清洗機處理，在水浴搖床中分別包合1、3、5 h，取出抽濾，無水乙醇洗滌沉淀，干燥。由圖1可以看出，包合時間為3 h時包合率最高。

2.2 pH對包合率的影響

取0.3 g β-CYD配制成飽和水溶液，調(diào)節(jié)pH為3.8（用0.1 mol/L鹽酸調(diào)節(jié)）、7.0（用無離子水調(diào)節(jié)）和10.8（0.1 mol/L NaOH調(diào)節(jié)）3種條件下進行試驗，50 ℃下加入0.1 g三七總皂苷溶解后立即用超聲波清洗機處理，抽濾，無水乙醇洗滌沉淀，干燥。由圖2可以看出，在pH為7.0時包合率最高。

2.3 包合溫度對包合率的影響

取0.3 g β-CYD配制成飽和水溶液，分別在30、50、70 ℃下加入0.1 g三七總皂苷溶解后立即用超聲波清洗機處理，抽濾，無水乙醇洗滌沉淀，干燥。由圖3可以看出，溫度為50 ℃時包合率最高。

2.4 主客比的選擇

分別稱取0.1、0.2、0.3、0.4 g β-CYD，將β-CYD配制成飽和水溶液，50 ℃下加入0.1 g三七總皂苷溶解后立即用超聲波清洗機處理，抽濾，無水乙醇洗滌沉淀，干燥，比較各組的包合率來判斷最佳主客比。由圖4可以看出，主客比（質(zhì)量比，g∶g，下同）為3∶1時包合率最高。

2.5 正交試驗結(jié)果

根據(jù)預(yù)試驗，對影響包合作用的主要因素主客比、pH、包合時間按照L9（34）正交表進行正交試驗[11]。所選因素與水平見表1，試驗結(jié)果見表2。表2結(jié)果表明，對β-環(huán)糊精包合三七總皂苷的影響程度大小分別為主客比、包合時間、pH，且主客比、pH、包合時間均在中等水平時為優(yōu)，最優(yōu)組合為A2B2C2。

3 結(jié)論

以正交試驗篩選出三七總皂苷的β-環(huán)糊精包合物的最佳制備工藝為將β-環(huán)糊精在50 ℃下配制成飽和水溶液，調(diào)節(jié)pH 7.0，按照主客比3∶1的比例加入三七總皂苷溶解后，立即用超聲波清洗機處理，于水浴搖床中在50 ℃的溫度下作用3 h。取出蒸干溶劑，95%乙醇洗滌，布氏漏斗抽濾，干燥，即得包合物。

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（責(zé)任編輯 溫 亮）