車前草提取物對(duì)三種儲(chǔ)糧害蟲的觸殺活性研究

摘要：采用冷浸法以4種不同極性的溶劑（乙醇、丙酮、乙酸乙酯和石油醚）對(duì)車前草（Plantago asiatica L.）活性成分進(jìn)行粗提，采用藥膜法研究提取物對(duì)玉米象（Sitophilus zeamais Motschulsky）、谷蠹（Tribolium castaneum）、赤擬谷盜（Rhyzopertha dominica Fbricius）3種儲(chǔ)糧害蟲成蟲的觸殺作用。結(jié)果表明，丙酮提取物、石油醚提取物和乙醇提取物分別對(duì)玉米象、谷蠹和赤擬谷盜觸殺效果較好，試蟲校正死亡率可達(dá)到97%以上。

關(guān)鍵詞：車前草（Plantago asiatica L.）提取物；觸殺活性；玉米象（Sitophilus zeamais Motschulsky）；赤擬谷盜（Rhyzopertha dominica Fbricius）；谷蠹（Tribolium castaneum）

中圖分類號(hào)：S379.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）22-5493-03

車前草（Plantago asiatica L.）又名車輪菜，為車前科（Plantaginaceae）多年生草本植物，含有谷甾醇、熊果酸、胡蘿卜苷、桃葉珊瑚苷和梓醇等化學(xué)成分。中醫(yī)認(rèn)為其具有清熱利尿、祛痰、涼血、解毒的功效，主治水腫尿少、熱淋澀痛、暑濕瀉痢、痰熱咳嗽、吐血衄血和痛腫瘡毒等[1-5]。有研究表明車前草水煎液和其所含黃酮類化合物、可溶性膳食纖維能有效清除·O2-和·OH-、DPPH等自由基[6-9]，其提取物對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、青霉和假絲酵母等具有抑制作用[10-12]。本研究采用乙醇、丙酮、乙酸乙酯、石油醚4種不同極性的有機(jī)溶劑提取車前草粗提物，測(cè)試不同溶劑提取物對(duì)玉米象（sitophilus zeamais Motschulsky）、谷蠹（Tribolium castaneum）和赤擬谷盜（Rhyzopertha dominica Fbricius）成蟲的觸殺作用，以期為綜合評(píng)價(jià)車前草的生物活性和合理利用車前草資源提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 供試儲(chǔ)糧害蟲

供試3種儲(chǔ)糧害蟲于2009年8月采自國(guó)家直屬糧庫(kù)麻城英山分庫(kù)，經(jīng)室內(nèi)繼代飼養(yǎng)。玉米象、谷蠹以整粒小麥、赤擬谷盜以小麥粉于養(yǎng)蟲室飼養(yǎng)，養(yǎng)蟲室溫度（27±1） ℃、相對(duì)濕度（75±5）%，挑選羽化后約4周、大小一致的成蟲供試。

1.2 供試植物

車前草于2012年8月采自湖北省黃岡市黃州區(qū)，為帶有子實(shí)的全草。

1.3 試驗(yàn)藥品

乙醇、丙酮、乙酸乙酯為分析純，石油醚沸程60～90 ℃。

1.4 植物提取物的制備

車前草洗凈，60 ℃烘干，粉碎機(jī)粉碎，過(guò)40目篩。分別以乙醇、丙酮、乙酸乙酯、石油醚4種溶劑采用冷浸法進(jìn)行提取。稱取車前草粉末100 g裝入1 000 mL標(biāo)本瓶，加入相應(yīng)的溶劑500 mL，置于避光處，20～25 ℃浸提48 h，濾出上清液后向瓶中加入250 mL的溶劑浸提48 h，濾出上清液后加入150 mL溶劑繼續(xù)浸提24 h，收集3次所得濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀55 ℃濃縮，放入通風(fēng)櫥中通風(fēng)至恒重，用丙酮將濃縮物稀釋至0.2 g/mL得到提取液，裝入棕色瓶于4 ℃保存。

1.5 觸殺試驗(yàn)

1.5.1 4種提取物觸殺效果比較 觸殺試驗(yàn)采用藥膜法。在直徑6.4 cm的培養(yǎng)皿底盤上滴加車前草提取液，再在每個(gè)培養(yǎng)皿中滴加200 μL丙酮使稀釋液均勻地涂布于培養(yǎng)皿上，在同規(guī)格的培養(yǎng)皿中滴入等量丙酮作為對(duì)照，待丙酮完全揮發(fā)后放入直徑12 cm的玻璃杯內(nèi)，玻璃杯內(nèi)壁涂刷滑石粉。培養(yǎng)皿中分別放入玉米象、谷蠹和赤擬谷盜30頭，玻璃杯上蓋扎有小孔的塑料培養(yǎng)皿蓋，加壓鐵環(huán)。每處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。置于溫度（27±1） ℃、相對(duì)濕度（75±5）%全黑暗養(yǎng)蟲室內(nèi)。于1、2、3 d后檢查觸殺效果，以撥針觸及成蟲觸角、足及尾部，不動(dòng)者為死亡。計(jì)算校正死亡率，確定對(duì)試蟲觸殺效果最好的提取物。校正死亡率=（處理組死亡率-對(duì)照組死亡率）/（1-對(duì)照組死亡率）×100%。

1.5.2 3種提取物殺蟲活性檢測(cè) 根據(jù)1.5.1試驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)行以下操作。在培養(yǎng)皿上分別滴加車前草丙酮提取液、石油醚提取液、乙醇提取液。每個(gè)培養(yǎng)皿藥液均用400 μL丙酮稀釋，后續(xù)操作同1.5.1。3個(gè)重復(fù)，以丙酮作為空白對(duì)照，分別于1、2、3 d后檢查觸殺效果，計(jì)算校正死亡率。

2 結(jié)果與分析

2.1 4種提取物觸殺效果比較

供試植物4種溶劑提取物對(duì)玉米象、谷蠹和赤擬谷盜3種試蟲觸殺效果見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，在供試劑量處理下，對(duì)玉米象、谷蠹和赤擬谷盜的觸殺效果較好的提取物分別為丙酮提取物、石油醚提取物和乙醇提取物。

2.2 丙酮提取物對(duì)玉米象的觸殺作用

供試植物丙酮提取物對(duì)玉米象成蟲的觸殺試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)，隨著丙酮提取物劑量的增加，玉米象成蟲校正死亡率升高，觸殺效果明顯增強(qiáng)。1.62 mg/cm2劑量對(duì)玉米象具有較強(qiáng)的觸殺作用，處理2 d試蟲校正死亡率達(dá)70.00%以上，處理3 d其校正死亡率達(dá)97.75%。

2.3 石油醚提取物對(duì)谷蠹的觸殺作用

供試植物石油醚提取物對(duì)谷蠹成蟲的觸殺試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可見(jiàn)，隨著石油醚提取物劑量的增加，谷蠹成蟲校正死亡率升高，觸殺效果明顯增強(qiáng)。1.62 mg/cm2劑量石油醚提取物處理2 d谷蠹校正死亡率達(dá)92.02%，處理3 d其校正死亡率達(dá)98.76%。

2.4 乙醇提取物對(duì)赤擬谷盜的觸殺作用

供試植物乙醇提取物對(duì)赤擬谷盜成蟲的觸殺試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可見(jiàn)，隨著乙醇提取物劑量的增加，赤擬谷盜成蟲校正死亡率升高，觸殺效果明顯增強(qiáng)。1.87 mg/cm2乙醇提取物處理3 d赤擬谷盜成蟲校正死亡率達(dá)98.86%，1.62 mg/cm2劑量處理3 d其校正死亡率達(dá)81.39%。

3 小結(jié)與討論

在試驗(yàn)各處理中，車前草丙酮提取物對(duì)玉米象的觸殺效果最好，在最高劑量1.62 mg/cm2時(shí)，3 d后校正死亡率達(dá)97.75%；乙醇提取物對(duì)赤擬谷盜觸殺效果最佳，在最高劑量1.87 mg/cm2時(shí)，3 d后校正死亡率達(dá)98.86%；石油醚提取物對(duì)谷蠹觸殺效果最好，在最高劑量1.62 mg/cm2時(shí)，2 d后谷蠹校正死亡率達(dá)92.02%，3 d后達(dá)98.76%。

玉米象、赤擬谷盜和谷蠹分別對(duì)車前草丙酮提取物、乙醇提取物和石油醚提取物敏感，這可能是由于4種提取溶劑的極性不同，根據(jù)相似相溶原理，提取的物質(zhì)可能有所差異。因此，有待進(jìn)一步研究各提取物主要成分及其對(duì)主要儲(chǔ)糧害蟲的不同活性，研究其作用機(jī)制，為儲(chǔ)糧害蟲的有效無(wú)公害防控提供參考。

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（責(zé)任編輯 陳 焰）