豇豆根腐病菌的生物學(xué)特性及室內(nèi)殺菌劑毒力測(cè)定

摘要：對(duì)引起湖北武漢地區(qū)豇豆根腐病的病菌（茄類鐮刀菌，F(xiàn)usarium solani Schl.）進(jìn)行了生物學(xué)特性及室內(nèi)殺菌劑毒力研究。結(jié)果表明，病菌菌絲生長(zhǎng)的適宜溫度為25～35 ℃；適宜pH 6～9；光照有利于菌絲生長(zhǎng)；病菌能夠利用多種碳源和氮源，最適碳源是麥芽糖，最適氮源是硝酸鈉；菌絲的致死溫度為65 ℃（10 min）。室內(nèi)殺菌劑毒力測(cè)定結(jié)果表明，70%甲基托布津超微可濕性粉劑對(duì)病菌菌絲抑制效果最好，其后依次為50%硫磺·多菌靈可濕性粉劑和40%福星乳油，這3種殺菌劑均可用于防治豇豆根腐??；80%多菌靈可濕性粉劑和10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑的EC50也較低，也可作為防治豇豆根腐病的殺菌劑。

關(guān)鍵詞：豇豆根腐病菌（Fusarium solani Schl.）；生物學(xué)特性；殺菌劑；毒力測(cè)定

中圖分類號(hào)：S432.4+4；S436.411 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）22-5479-03

為進(jìn)一步了解湖北武漢地區(qū)豇豆根腐病菌（茄類鐮刀菌，F(xiàn)usarium solani Schl.）的生物學(xué)特性，篩選出防治效果較好的藥劑，本試驗(yàn)系統(tǒng)研究了該菌在不同光照、溫度、pH、碳源、氮源條件下的生長(zhǎng)特性及菌絲的致死溫度，并測(cè)定了7種殺菌劑對(duì)該菌的抑制作用，以期為該病害的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試病菌

豇豆根腐病菌菌株JGF，由武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)研究院武漢市蔬菜科學(xué)研究所于2009年9月從該所基地采集標(biāo)樣，經(jīng)分離培養(yǎng)獲得，并進(jìn)行了致病性測(cè)定、形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定[1，2]。

1.2 不同光照對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

病原菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5 d后，用打孔器從菌落邊緣取直徑6 mm菌絲塊，接種于PDA培養(yǎng)基平板上，每皿接種1個(gè)菌絲塊。將接種后的平皿置于HP250GS型智能人工氣候培養(yǎng)箱培養(yǎng)，溫度25 ℃。設(shè)置連續(xù)黑暗、連續(xù)光照、12 h/d光暗交替3個(gè)處理（光源為普通日光燈，18 W，距離22 cm），每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，4 d后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑。

1.3 不同溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

病原菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5 d后，用打孔器從菌落邊緣取直徑6 mm菌絲塊接種于PDA培養(yǎng)基平板上，每皿接1個(gè)菌絲塊。設(shè)置5、10、15、20、25、30、35、40 ℃共8個(gè)溫度處理，將接好菌種的平皿分別置于不同溫度的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)。7 d后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑。

1.4 不同pH對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

用1 mol/L NaOH和1 mol/L HCl溶液調(diào)節(jié) PDA培養(yǎng)基pH，終值分別為3、4、5、6、7、8、9、10、11、12，然后在不同pH的平板中央接種直徑6 mm的菌絲塊，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每個(gè)處理3 個(gè)重復(fù)，5 d后用十字交叉法測(cè)量菌落的直徑。

1.5 不同碳源、氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

以Czapek培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基[3]，用含碳量相同的葡萄糖、麥芽糖、乳糖、木糖、果糖、可溶性淀粉代替其中的蔗糖，以不加碳源作對(duì)照。以Czapek培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，用含氮量相同的尿素、硝酸鈉、硝酸銨、氯化銨、精氨酸代替其中的硝酸鉀，以不加氮源作對(duì)照。打取直徑為6 mm的菌絲塊接種在不同碳、氮源培養(yǎng)基平板中央，每處理3個(gè)重復(fù)，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，5 d后采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑。

1.6 菌絲致死溫度測(cè)定

用6 mm打孔器在活化好的PDA培養(yǎng)基菌落邊緣取菌絲塊并置于無(wú)菌試管中，加入2 mL無(wú)菌水。分別在35、40、45、50、55、60、65、70 ℃水浴鍋中處理10 min后取出迅速冷卻，將菌絲塊取出置于PDA平板上25 ℃恒溫培養(yǎng)，5 d后觀察菌絲生長(zhǎng)情況，每處理重復(fù)5次。

1.7 不同殺菌劑對(duì)豇豆根腐病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

1.7.1 供試藥劑 70%甲基托布津超微可濕性粉劑（西安美邦藥業(yè)有限公司）、40%福星乳油（上海農(nóng)樂(lè)生物制品股份有限公司）、80%多菌靈可濕性粉劑（美國(guó)農(nóng)友集團(tuán)有限公司）、50%硫磺·多菌靈可濕性粉劑（河北冠龍農(nóng)化有限公司）、75%百菌清可濕性粉劑（成都皇牌作物科學(xué)有限公司）、80%?！じｄ\可濕性粉劑（河北冠龍農(nóng)化有限公司）、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑（北京綠色農(nóng)華植?？萍加邢薰荆?。

1.7.2 含藥平板制備 根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果，確定各個(gè)供試藥劑的濃度梯度和配制時(shí)的系列劑量，70%甲基托布津超微可濕性粉劑、80%福·福鋅可濕性粉劑、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑濃度梯度為31.25、62.50、125.00、250.00、500.00 μg/mL；80%多菌靈可濕性粉劑、50%硫磺·多菌靈可濕性粉劑、40%福星乳油濃度梯度為62.5、125.0、250.0、500.0、1 000.0 μg/mL；75%百菌清可濕性粉劑濃度梯度為125、250、500、1 000、2 000 μg/mL。將供試藥劑稀釋成相應(yīng)系列濃度后，準(zhǔn)確吸取一定量的藥液加入到熔化的培養(yǎng)基中，以1 mL藥液加入9 mL培養(yǎng)基為標(biāo)準(zhǔn)，3次重復(fù)。

1.7.3 測(cè)定方法 采用抑制菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定[4]。在超凈工作臺(tái)上，將供試藥劑配成不同濃度的帶藥培養(yǎng)基，制成PDA培養(yǎng)基平板，每處理3皿，同時(shí)設(shè)加等量無(wú)菌水的培養(yǎng)基為空白對(duì)照，然后用打孔器在培養(yǎng)5 d的菌落邊緣打取直徑6 mm菌絲塊，分別放在不同藥劑培養(yǎng)基平板中央，菌絲面朝上，在25 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)，5 d后用十字交叉法測(cè)量菌落的直徑，計(jì)算殺菌劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的（相對(duì)）抑制率，并用DPS數(shù)據(jù)分析軟件求毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)和EC50，比較幾種供試藥劑的毒力大小。

抑制率=（空白對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/（空白對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑）×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 光照對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

病原菌在PDA培養(yǎng)基平板上連續(xù)黑暗、連續(xù)光照、12 h/d光暗交替條件下培養(yǎng)7 d，菌落平均直徑分別為45.20、52.15、48.15 mm?？梢?jiàn)光照有利于菌絲的生長(zhǎng)（圖1）。

2.2 溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

在PDA培養(yǎng)基平板上，菌絲在10～35 ℃溫度范圍均能生長(zhǎng)，25～35 ℃為菌絲生長(zhǎng)的適宜溫度，30 ℃為最適生長(zhǎng)溫度；菌絲在5 ℃和40 ℃不生長(zhǎng)（圖2）。

2.3 pH對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

在PDA培養(yǎng)基平板上，菌株在pH 3～12均可生長(zhǎng)，pH 6～9為適宜生長(zhǎng)范圍，pH 8最適于生長(zhǎng)，說(shuō)明偏堿性環(huán)境更適宜病原菌生長(zhǎng)（圖3）。

2.4 碳源、氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

葡萄糖、蔗糖、麥芽糖等7種碳源均能被利用，其中菌絲在麥芽糖中生長(zhǎng)最好（圖4）；供試6種氮源均能被利用，其中以硝酸鈉、硝酸銨、硝酸鉀等硝態(tài)氮利用較好，氯化銨利用最差（圖5）。

2.5 菌絲致死溫度

由菌株菌絲的致死溫度測(cè)定結(jié)果（表1）可以看出， 60 ℃及以下水溫處理10 min后的菌絲在PDA 培養(yǎng)基上均能再生長(zhǎng)，而65 ℃和70 ℃水浴處理10 min后，所有重復(fù)均無(wú)菌絲生長(zhǎng)。說(shuō)明該病原菌菌絲致死溫度為65 ℃（10 min）。

2.6 不同殺菌劑對(duì)豇豆根腐病菌的室內(nèi)毒力

由不同殺菌劑對(duì)豇豆根腐病菌室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果（表2）可知，7種殺菌劑對(duì)豇豆根腐病菌的抑制作用有較大差異，以70%甲基托布津超微可濕性粉劑為最好；50%硫磺·多菌靈可濕性粉劑、40%福星乳油和80%多菌靈可濕性粉劑效果次之；10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑EC50雖較前幾種高，但數(shù)值并不大，也可用于此病害的防治。75%百菌清可濕性粉劑抑菌效果較差。

3 小結(jié)與討論

豇豆根腐病由茄類鐮刀菌引起，茄類鐮刀菌寄主范圍較廣，可以單獨(dú)侵染、混合侵染導(dǎo)致植物發(fā)病。周洪友等[5]報(bào)道，沙打旺根腐病由茄類鐮刀菌和尖孢鐮刀菌導(dǎo)致；王文君等[6]報(bào)道中國(guó)甜菜根腐病病原包括茄類鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、木賊鐮刀菌、層出鐮刀菌等；而茄子根腐病、花椒根腐病、辣椒根腐病、西瓜根腐病等也是由茄類鐮刀菌侵染所致[7-10]。

本試驗(yàn)對(duì)引起豇豆根腐病的病原進(jìn)行生物學(xué)特性及幾種殺菌劑的室內(nèi)藥效研究。結(jié)果表明，光照利于菌絲生長(zhǎng)；菌絲生長(zhǎng)適溫為25～35 ℃，最適生長(zhǎng)溫度為30 ℃；pH 6～9為菌絲適宜生長(zhǎng)范圍，pH 8最適于生長(zhǎng)；該菌的致死溫度為65 ℃（10 min）。該菌能利用多種單糖、多糖作為碳源，能利用精氨酸有機(jī)氮和硝酸鈉等無(wú)機(jī)硝態(tài)氮作氮源，說(shuō)明其對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不嚴(yán)格，具有廣泛的適應(yīng)性。因茄類鐮刀菌能在土壤中存活，常引起辣椒、茄子、西瓜等多種植物發(fā)病。

室內(nèi)殺菌劑藥效試驗(yàn)結(jié)果表明，70%甲基托布津超微可濕性粉劑對(duì)該病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果最好，EC50值為0.000 1 μg/mL，其下依次為50%硫磺·多菌靈可濕性粉劑、40%福星乳油、80%多菌靈可濕性粉劑、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑，它們均可用于防治豇豆根腐病。后續(xù)研究可在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步進(jìn)行溫室盆栽和大田防治試驗(yàn)，以明確這幾種藥劑的實(shí)際防治效果，為藥劑防治豇豆根腐病提供科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 呂佩珂，蘇慧蘭，高振江，等.中國(guó)現(xiàn)代蔬菜病蟲(chóng)原色圖鑒[M].呼和浩特：遠(yuǎn)方出版社，2008.

[2] 吳仁鋒，楊紹麗，萬(wàn) 鵬，等.豇豆根腐病病原分離鑒定及其核糖體DNA-ITS序列分析[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50（24）：5107-5109.

[3] 方中達(dá). 植病研究方法[M].北京：農(nóng)業(yè)出版社，1979.

[4] 遲福梅，周宗山，吳玉星，等.5種殺菌劑對(duì)蘋(píng)果輪紋病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定[J].中國(guó)果樹(shù)，2008（5）：41-43.

[5] 周洪友，楊合同，唐文華.沙打旺根腐病發(fā)生及病原菌鑒定[J].草地學(xué)報(bào)，2004，12（4）：285-288，297.

[6] 王文君，趙 燦，劉 梅，等.我國(guó)甜菜根腐病病原鐮刀菌的初步研究[A].郭澤建，侯明生.中國(guó)植物病理學(xué)會(huì)2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2011.

[7] 王 勇，楊秀榮，楊依軍.茄根腐病致病病原——茄病鐮刀菌及其藍(lán)色變種的分離與鑒定[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué)，2002，9（2）：21-25.

[8] 李智敏，陳建斌，周惠萍，等.花椒根腐病病原鑒定和生物學(xué)特性研究[J].云南大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，21（5）：591-595.

[9] 劉麗云，劉曉林，劉志恒，等.辣椒根腐病菌生物學(xué)特性研究[J].沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，38（1）：54-58.

[10] 耿麗華，郭紹貴，張海英，等.西瓜根腐病菌的生物學(xué)特性[J].中國(guó)蔬菜，2010（18）：60-63.

（責(zé)任編輯 陳 焰）