NAA和6—BA對野生參薯愈傷組織誘導(dǎo)和不定芽分化、生根的影響

摘要：考察了NAA和6-BA對野生參薯（Dioscorea alata Linn.）愈傷組織誘導(dǎo)和不定芽分化、生根的影響。結(jié)果表明，愈傷組織誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基為MS + 1.0 mg/L 6-BA + 0.2 mg/L NAA + 30 g/L蔗糖+ 6.0 g/L瓊脂；愈傷組織分化不定芽的最適培養(yǎng)基為MS + 0.5 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA + 30 g/L蔗糖+ 6.0 g/L瓊脂；不定芽生根的最適培養(yǎng)基為MS + 0.01 mg/L 6 -BA + 0.3 mg/L NAA + 30 g/L蔗糖+6.0 g/L 瓊脂。生根試管苗在室溫下煉苗7～10 d后，開瓶煉苗2～3 d， 移栽成活率在95%以上。

關(guān)鍵詞：野生參薯（Dioscorea alata Linn.）；愈傷組織；不定芽；生根；蘄春縣

中圖分類號：Q943.1 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）19-4809-03

參薯（Dioscorea alata Linn.）又名大薯，是薯蕷科薯蕷屬多年生藤質(zhì)草本植物，其塊莖富含淀粉和粗蛋白，可作糧食和蔬菜食用，并可制取淀粉和供藥用[1，2]。醫(yī)圣李時珍故里湖北省蘄春縣具有悠久的山藥種植歷史，是鄂東名產(chǎn)“蘄山藥”的原產(chǎn)地[3]。在蘄春縣北部檀林鎮(zhèn)檀林村和青石鎮(zhèn)太平村、界嶺村等地的低山丘陵區(qū)，自然散生著大量的野生參薯，其葉片寬大、莖蔓粗壯、塊莖肥大、抗逆性強，具有一般栽培山藥所無法比擬的農(nóng)藝性狀，潛在的育種價值較大[4，5]。本研究采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，考察了NAA和6-BA對野生參薯愈傷組織誘導(dǎo)和不定芽分化、生根的影響，實現(xiàn)野生參薯的植株再生，為下一步人工馴化野生參薯和利用野生參薯種質(zhì)資源進行雜交育種提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

野生參薯采自蘄春縣檀林村，組織培養(yǎng)用生化試劑均購自上海稼豐園藝有限公司。

1.2 外植體的制備

12月上旬，挖取野生參薯塊莖置于室內(nèi)通風處晾放1周后，放入干燥、陰涼地方貯藏至第二年春季，將塊莖取出盆栽，等蔓莖長成后，用剪刀選取長約1～2 cm的帶節(jié)莖段，先用自來水沖洗30 min，接著用75%的無水乙醇處理15 s，然后用2%的次氯酸鈉溶液處理10 min，再用無菌水洗滌4～5次后，最后置于無菌濾紙上吸干水分備用。

1.3 NAA和6-BA對野生參薯愈傷組織誘導(dǎo)的影響

以MS+30 g/L蔗糖+6.0 g/L瓊脂為基本培養(yǎng)基（pH 6.0），用NAA（0.1、0.2、0.3 mg/L）和6-BA（1.0、1.5、2.0 mg/L）進行配比試驗，篩選野生參薯愈傷組織誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基。溫度25 ℃、光照時間14 h/d、光照度3 000 lx（下同），每個處理接種10個外植體，重復(fù)3次，接種20 d后統(tǒng)計愈傷組織誘導(dǎo)率。愈傷組織誘導(dǎo)率=（分化出愈傷外植體個數(shù)/接種外植體個數(shù)）×100%

1.4 NAA和6-BA對野生參薯愈傷組織分化不定芽的影響

以MS+30 g/L蔗糖+6.0 g/L瓊脂為基本培養(yǎng)基（pH 6.0），以NAA（0.05、0.10、0.20 mg/L）和6-BA（0.1、0.5、1.0 mg/L）進行組合配比試驗，篩選愈傷組織分化不定芽的最適培養(yǎng)基。

1.5 NAA和6-BA對野生參薯不定芽生根的影響

以MS+30 g/L蔗糖+6.0 g/L瓊脂為基本培養(yǎng)基，以NAA（0.10、0.15、0.20、0.30、0.40 mg/L）和0.01 mg/L 6-BA進行組合配比試驗，篩選野生參薯的最適生根培養(yǎng)基。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度的NAA和6-BA對野生參薯愈傷組織誘導(dǎo)的影響

不同濃度的NAA和6-BA對野生參薯愈傷組織誘導(dǎo)的影響見表1。由表1可知，野生參薯帶節(jié)莖段接種4 d后，部分處理（處理5、處理7、處理8、處理9）外植體在剪切傷口處出現(xiàn)膨大現(xiàn)象；接種7 d后，處理1、處理9外植體在剪切口處也有不同程度的膨大。接種20 d后，除了處理1沒有愈傷組織出現(xiàn)，其他處理都有愈傷組織出現(xiàn)，但愈傷組織誘導(dǎo)率差異較大。處理8誘導(dǎo)率最高，達86.7%；其次是處理9，愈傷誘導(dǎo)率為83.3%；處理5也有較高的誘導(dǎo)率；其他處理的誘導(dǎo)率均較低。因此，培養(yǎng)基MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6.0 g/L瓊脂為野生參薯愈傷組織誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基。

2.2 不同濃度的NAA和6-BA對愈傷組織分化不定芽的影響

不同濃度的NAA和6-BA對愈傷組織分化不定芽的影響見表2。由表2可以看出， 9個處理都有較高的不定芽分化率，其中處理5的不定芽分化率最高，達100.00%；其次是處理2，不定芽分化率為93.33%；處理3也有較高的分化率，達90.00%。從外植體分化不定芽數(shù)及不定芽長勢來看，單個外植體分化不定芽數(shù)較高的是處理5、處理4、處理2和處理3，其不定芽數(shù)分別為4.53、4.10、3.83和3.80，并且分化出的不定芽健壯、飽滿，長勢很好（圖1），將這些不定芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，全部都能成苗。因此，0.5 mg/L 6-BA與0.1 mg/L NAA最適于野生參薯愈傷組織分化不定芽。

2.3 不同濃度的NAA與6-BA對不定芽生根的影響

將不定芽接種在不同濃度的NAA和6-BA的生根培養(yǎng)基上，3～5 d在不定芽下端可見明顯的白色突起，10 d左右即可見伸長的須根，20 d后大部分處理的不定根已經(jīng)很發(fā)達（圖2）。不同濃度的NAA與6-BA對不定芽生根的影響見表3。由表3可知，處理2生根率最高，達100.00%；處理3也有較高的生根率，達到93.33%，其他處理的生根率相對較低，僅為56.67%～73.33%。因此，0.01 mg/L 6-BA與0.3 mg/L NAA最適于野生參薯不定芽生根。

2.4 生根苗移栽

將野生參薯生根組培苗先在室內(nèi)煉苗2～3 d，然后開瓶煉苗3～5 d，最后移栽至營養(yǎng)土中（園土∶蛭石=5∶5），幼苗成活率可達95%以上（圖3）。

3 小結(jié)

本試驗研究了采自鄂東大別山蘄春縣野生參薯的組織培養(yǎng)技術(shù)，優(yōu)化了愈傷組織誘導(dǎo)、愈傷組織分化不定芽、不定芽生根培養(yǎng)及生根苗移栽等環(huán)節(jié)，成功實現(xiàn)了野生參薯的離體再生，為下一步人工馴化野生參薯和開發(fā)利用參薯野生種質(zhì)資源奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻：

[1] 宋德勛.藥用植物栽培學(xué)[M].貴陽：貴州科學(xué)技術(shù)出版社，2000. 151.

[2] 徐 良.中國名貴藥材規(guī)范化栽培與產(chǎn)業(yè)化開發(fā)新技術(shù)[M].北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2001.339.

[3] 康 薇，王本忠，周緒鵬.蘄山藥及其優(yōu)質(zhì)豐產(chǎn)栽培技術(shù)[J].黃石理工學(xué)院學(xué)報，2010，26（4）：30-31，55.

[4] 姜芳婷，李明靜，史會齊，等.山藥及其同屬植物參薯中多糖含量的測定[J].化學(xué)研究，2004，15（3）：47-49.

[5] 梁小娟，杜偉鋒，張 云，等.參薯研究進展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2011，29（5）：1085-1087.