苗藥八爪金龍中生物活性成分的研究（Ⅰ）

摘要：采用水蒸氣蒸餾法、索氏提取法分別提取苗藥八爪金龍（Ardisia crispa（Thunb.）DC.）中的揮發(fā)油和巖白菜素。利用GC/MS法及HPLC/MS法對(duì)揮發(fā)油及巖白菜素含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，巖白菜素在30.300～912.000 ng/mL范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系（r=0.999 1）， 平均回收率為97.66%（RSD=2.31%）；八爪金龍揮發(fā)油主要成分有己醛、（Z）-2-庚烯醛、3-羥基-1-辛烯、石竹烯、龍腦、9，12，15-十八三烯、3-苯基-2-丙烯醛、芳姜黃酮、n-癸酸、十二烷酸、正丁烯基苯酞、棕櫚酸等，含量分別為7.72%、1.82%、1.92%、1.85%、2.48%、2.98%、3.06%、5.17%、4.08%、7.36%、3.11%、29.11%。GC/MS法測(cè)定出揮發(fā)油中的27個(gè)成分，占揮發(fā)油總量的87.17%。建立的HPLC/MS方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好， 可作為八爪金龍根藥材質(zhì)量檢測(cè)的方法。

關(guān)鍵詞：八爪金龍（Ardisia crispa（Thunb.）DC.）；巖白菜素；揮發(fā)油；HPLC/MS；GC/MS

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）19-4723-03

八爪金龍（Ardisia crispa（Thunb.）DC.）為金?？谱辖鹋僦参铮愿叭~入藥，夏、秋采集，別名朱砂根、百兩金、八爪龍、八爪根、鐵雨傘、高八爪、開喉箭[1-3]。根木質(zhì)，細(xì)長(zhǎng)柱狀，有分枝，淡紫棕色，斷面淡紅色，有褐色小點(diǎn)，具有清咽利喉、散瘀消腫等功效[2-3]。主要用于治療咽喉腫痛、跌打損傷、風(fēng)濕骨痛[4-5]。初步研究表明，八爪金龍中含有三萜皂苷、香豆素類、揮發(fā)油、酚類、醌類、強(qiáng)心苷、氨基酸、糖類等多種化合物[5-8]。以上有效成分除能夠止咳平喘、抗炎抗菌外，還具有抗腫瘤活性、抗生育、抑制血小板凝聚、降低血壓、收縮子宮、抑制cAMP磷酸二酯酶等多方面作用，因此八爪金龍具有多種生理活性，對(duì)于治療多種疾病具有良好的開發(fā)利用價(jià)值[9，10]。但目前主要集中于異香豆素中巖白菜素的研究，且不同產(chǎn)地的測(cè)定方法也不盡相同。

本研究采用水蒸氣蒸餾法提取苗藥八爪金龍的揮發(fā)油成分，索氏提取法提取巖白菜素，利用GC/MS法對(duì)揮發(fā)油成分進(jìn)行分離鑒定，HPLC/MS法對(duì)巖白菜素進(jìn)行含量測(cè)定，以期為八爪金龍的質(zhì)量控制及二次開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

采用水蒸氣蒸餾法，取100 g八爪金龍根粉末，浸泡1 h，用揮發(fā)油提取器進(jìn)行提取，提取完畢后收集揮發(fā)油并稱重。揮發(fā)油為淡黃色，具有特殊香味，平均收率為0.20 mL/100 g。

1.4 巖白菜素溶液的制備及測(cè)定

準(zhǔn)確稱取八爪金龍根粗粉0.5 g，加入無水乙醇-氨水（V/V，3∶2）1 mL，放置0.5 h后加入25 mL氯仿，用索氏提取器提取，約70 ℃回流提取2 h，冷卻，濾過，揮干溶劑，殘?jiān)眉状歼m量溶解，用0.45 μm微孔濾膜過濾至10 mL 量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。提取液定容至50 mL，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，在“1.2.3”的條件下分析巖白菜素含量。

準(zhǔn)確稱取巖白菜素對(duì)照品20 mg（標(biāo)準(zhǔn)品巖白菜素），用甲醇稀釋至25 mL，取此溶液1 mL稀釋定容至50 mL，終濃度為0.016 mg/mL，搖勻備用。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確吸取適量?jī)?chǔ)備液于l、2、3、4、5號(hào)50 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，分別進(jìn)樣，采用高效液相色譜法測(cè)定。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，巖白菜素的進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)方法驗(yàn)證

準(zhǔn)確吸取5號(hào)容量瓶中八爪金龍根供試溶液10 μL，分別進(jìn)樣6次，測(cè)得巖白菜素含量平均為0.582%，RSD=0.18%，表明該試驗(yàn)方法精密度良好。

取1號(hào)容量瓶中樣品2～5 mL共 6 份，制備成供試溶液，分別進(jìn)樣。測(cè)得各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，RSD<5%。表明其重復(fù)性較好。

取1號(hào)容量瓶中樣品2～5 mL制備成供試溶液，分別在12 h內(nèi)不同時(shí)間段進(jìn)樣，檢測(cè)指紋圖譜，測(cè)得各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，RSD均小于3%。表明供試溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

準(zhǔn)確稱取已測(cè)定含量的八爪金龍根粉末樣品5份，每份0.5 g，分別準(zhǔn)確加入適量巖白菜素對(duì)照品溶液，按“1.4”制備供試溶液，在“1.2.3”條件下進(jìn)行分析，計(jì)算回收率。巖白菜素的平均回收率為97.66%，RSD=2.31%（n=5），表明回收率較好。

2.2 液相色譜線性關(guān)系

采用高效液相色譜法測(cè)定八爪金龍中巖白菜素的含量（圖1）。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，巖白菜素的進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。所到標(biāo)準(zhǔn)曲線為一過原點(diǎn)的直線?；貧w方程為Y=-511 494

+41 181.1X，巖白菜素含量在30.300～912.000 ng/mL范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系（r=0.999 1）。

2.3 八爪金龍化學(xué)成分分析

采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)，對(duì)八爪金龍中的揮發(fā)油進(jìn)行分離，分離得到33個(gè)峰，氣相色譜圖見圖2。大部分分離度較高的色譜峰可通過質(zhì)譜工作站檢索質(zhì)譜庫(kù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)確定。與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比較確定八爪金龍的化學(xué)成分，鑒定出八爪金龍中的27個(gè)化學(xué)成分（表1）。采用液相色譜法對(duì)八爪金龍中巖白菜素的含量進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)線性回歸方程計(jì)算出巖白菜素平均含量為1.27%。

3 小結(jié)

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