白及種子無菌繁殖微型種莖初探

摘要：種子；繁殖；微型種莖

中圖分類號：S567.23；Q945.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）19-4708-02

白及為蘭科植物白及[Bletilla striata （Thunb. ex A. Murray）Rchb.f.]的干燥塊莖， 又名白芨、連及草等，分布于亞洲的緬甸北部經(jīng)中國至日本，在我國北起河南、江蘇至臺灣，東起浙江至西藏東南部均有分布。白及藥用歷史悠久，性微寒、味苦、甘，具有補(bǔ)肺、止血、散風(fēng)除濕、通竅止痛、消腫排膿、生肌、斂瘡等功效，主要用于治療感冒頭痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻淵、牙痛、肺傷咳血、衄血、金瘡出血、 癰疽腫毒、潰瘍疼痛、湯火灼傷、手足皴裂等[1]，是我國民間的傳統(tǒng)中藥，1977年以后被各版《中國藥典》收載。

近年來，由于人為的過度采挖和天然生境的破壞，白及野生自然資源急劇減少，瀕臨滅絕，被列為國家重點(diǎn)保護(hù)的野生藥用植物之一。白及種子較小，自然條件下需與真菌共生才能萌發(fā)，實生苗的栽培較為困難，而傳統(tǒng)分株、切塊等無性繁殖的方式成活率極低，不能滿足大規(guī)模生產(chǎn)的需要。白及組織培養(yǎng)和種子繁殖技術(shù)研究雖然有不少人涉及[2-5]，但基本上采用先培育成幼苗再移栽到田間的技術(shù)路線，由于白及組培苗離開培養(yǎng)環(huán)境后栽培成活困難，限制了其在生產(chǎn)上的應(yīng)用。試驗就白及種子無菌繁殖微型種莖進(jìn)行了研究，旨在為白及種植提供種源，以期實現(xiàn)規(guī)模化的人工種植，擺脫對野生資源的過度依賴。

1 材料與方法

1.1 材料

2011年10月17日在建始縣頤泰生物科技有限公司紅巖寺鎮(zhèn)白及基地，采摘自然授粉結(jié)實的、飽滿未開裂的白及蒴果做試驗材料。

MS系列培養(yǎng)基購自青島海博生物技術(shù)有限公司，KC系列培養(yǎng)基購自上海麗臣商貿(mào)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 種子消毒與接種 蒴果采摘后于2011年10月19日進(jìn)行處理。先用洗衣粉漂洗20 min，后置于2%的升汞溶液中消毒20 min，再用無菌水沖洗5次，然后接種。

接種時十字狀切開果實，將白色粉末狀種子彈到經(jīng)滅菌的濾紙上，然后適量接種到培養(yǎng)基上。每個蒴果接種4～5個三角瓶，每種萌發(fā)培養(yǎng)基接種50瓶，作為批量觀察。白及有胚種子才能保證發(fā)芽，所以用接種針在解剖鏡下選擇有胚的種子接種到三角瓶上，每種接4瓶，每瓶100粒左右有胚種子。

1.2.3

2 結(jié)果與分析

2.1 白及有胚種子在5種萌發(fā)培養(yǎng)基上的萌發(fā)情況

白及種子接種10 d后，5種萌發(fā)培養(yǎng)基上均可見種子呈淡綠色，20 d后可見萌芽點(diǎn)，30 d后可見小苗。5種培養(yǎng)基上均長出了小苗，發(fā)芽率見表1。從表1可以看出，以萌發(fā)培養(yǎng)基②發(fā)芽率最高；從長勢來看，也是萌發(fā)培養(yǎng)基②小苗長勢最好。

2.2 白及幼苗在3種生根培養(yǎng)基上的生根情況

由表2可知，生根培養(yǎng)基②上的白及幼苗生根苗數(shù)達(dá)到97株，生根率達(dá)到97%，根數(shù)為2～3條/株，最長根長為2.5 cm，遠(yuǎn)高于培養(yǎng)基①和培養(yǎng)基③。由此可以得出，白及種苗在生根培養(yǎng)基②上各項指標(biāo)最高。

2.3 白及種苗在不同種莖培養(yǎng)基上的種莖生長情況

在種莖培養(yǎng)基中培養(yǎng)150 d后，由表3可以看出，①號培養(yǎng)基中，平均每粒白及種子可以長出2.5個苗，而②號培養(yǎng)基平均可以長出2.8個苗，顯然②號培養(yǎng)基出苗率比①號培養(yǎng)基好；②號培養(yǎng)基的最大葉片長為3.8 cm，比①號多0.8 cm；②號培養(yǎng)基根數(shù)為6條/株，而①號培養(yǎng)基僅為4條/株。

繼續(xù)生長至2012年7月10日觀察，生長在1/2 MS培養(yǎng)基上的植株已全部倒苗，原球莖和根系仍保持活力；而生長在MS培養(yǎng)基上的植株才部分出現(xiàn)發(fā)黃的現(xiàn)象。至2012年8月20日，生長在MS培養(yǎng)基上的植株才絕大部分倒苗，但原球莖和根系仍保持活力。

3 小結(jié)

白及藥用價值很高，資源十分匱乏。成熟的白及種子雖然在自然條件下幾乎不能發(fā)芽，但具有大規(guī)模利用的可能。

試驗結(jié)果表明，采用白及種子在KC+200 g/L馬鈴薯的培養(yǎng)基上萌發(fā)，并培育一段時間；再將小苗轉(zhuǎn)接到1/2 MS+0.2 mg/L NAA生根培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)生根；然后轉(zhuǎn)移到MS培養(yǎng)基上進(jìn)行原球莖的培育，能保證全部實生苗都形成原球莖（微型種莖），再利用原球莖（微型種莖）很容易繁殖白及種苗，克服了一般組培苗移栽成活率低的困難，為利用白及種子進(jìn)行種莖規(guī)?；a(chǎn)提出了一條可行的技術(shù)路線。

參考文獻(xiàn)：

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[2] 李 嶸，王喆之.白及的研究概述及其資源利用對策[J].中草藥，2006，37（11）：1751-1755.

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[5] 葉 靜，鄭曉君，管常東，等.白及的無菌萌發(fā)與組織培養(yǎng)[J].云南大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2010，32（增刊）：422-425.