杉木雙花鞘花寄生提取物自由基清除能力研究

摘要：以95%乙醇、丙酮和乙酸乙酯為溶劑分別對杉木雙花鞘花[Macrosolen bibracteolatus （Hance） Danser]寄生進(jìn)行冷浸提取，用DPPH和ABTS體系評價(jià)杉木雙花鞘花寄生提取物清除自由基的能力。結(jié)果表明，杉木雙花鞘花寄生各提取物對DPPH自由基和ABTS自由基均具有清除能力，其中95%乙醇和丙酮提取物對自由基的清除能力較強(qiáng)，可作為抗氧化劑的天然來源之一。

關(guān)鍵詞：雙花鞘花[Macrosolen bibracteolatus （Hance） Danser]；杉木寄生；抗氧化；DPPH自由基；ABTS自由基

中圖分類號：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）15-3625-03

生物體內(nèi)存在的過量氧自由基與蛋白質(zhì)、脂類化合物、多糖、核酸等大分子發(fā)生氧化反應(yīng)，造成細(xì)胞損傷和引起組織結(jié)構(gòu)的非正常變化，進(jìn)而引發(fā)心血管疾病[1]、衰老[2]甚至癌變[3]等問題?？寡趸晕镔|(zhì)可淬滅自由基，阻止因過量自由基和生物大分子作用而引起的一系列鏈?zhǔn)窖趸^程。盡管通過化學(xué)手段合成的物質(zhì)如叔丁基羥基茴香醚（BHA）、2，6-二叔丁基對甲酚（BHT）、沒食子酸丙酯（PG）、叔丁基對苯二酚（TBHQ）等具有優(yōu)良的抗氧化性質(zhì)，且在食品及其他領(lǐng)域已經(jīng)得到了廣泛應(yīng)用，但近年研究發(fā)現(xiàn)，這類物質(zhì)對人體呼吸酶活性產(chǎn)生一定的不利影響，甚至還有致畸作用，一旦進(jìn)入人體就會產(chǎn)生潛在危害[4]。因此尋找安全、可靠的抗氧化物質(zhì)成為近年世界各國精細(xì)化工領(lǐng)域研究的重點(diǎn)內(nèi)容之一。

雙花鞘花[Macrosolen bibracteolatus （Hance） Danser]別名二苞鞘華、八角寄生等，為桑寄生科鞘花屬植物，常寄生于杉木屬、樟屬、五月茶屬、灰木屬或殼斗科植物，民間主要用于治風(fēng)濕痹癥、關(guān)節(jié)疼痛、筋骨拘攣、腰膝酸軟[5]。植物的抗氧化活性多與酚類及黃酮類物質(zhì)有關(guān)[6]，雙花鞘花的同屬植物鞘花寄生（Macrosolen cochinchinensis）可分離出酚及黃酮類物質(zhì)[7，8]。目前，寄主為杉木（Cunninghamia Lanceolata）的雙花鞘花（以下均稱為杉木雙花鞘花寄生）的抗氧化活性鮮有報(bào)道。因此，通過分析杉木雙花鞘花寄生乙酸乙酯提取物、丙酮提取物和乙醇提取物對DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼）、ABTS[2，2′-聯(lián)氨-雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]自由基的清除能力，研究杉木雙花鞘花寄生不同溶劑提取物的抗氧化活性，旨在為天然抗氧化物質(zhì)的開發(fā)利用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

材料：雙花鞘花，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)壯醫(yī)藥學(xué)院韋松基教授鑒定為桑寄生科鞘花屬植物雙花鞘花，其寄主鑒定為杉科杉木屬植物杉木，將其莖枝自然晾干，粉碎。

儀器：8453型紫外可見分光光度計(jì)（美國安捷倫公司）、BS224S電子天平（德國賽多利斯公司）、恒溫水浴鍋（黃驊市新興儀器廠）、RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）。

試劑：DPPH、ABTS購于美國SIGMA公司，其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 杉木雙花鞘花寄生的部位提取 將杉木雙花鞘花寄生全株陰干，粉碎后各稱取100 g，用800 mL 95%乙醇冷浸3 d，過濾。濾渣加等量溶劑同法再提取1次，過濾，合并2次濾液。濾液置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓蒸餾，回收溶劑，殘留物低溫真空干燥至干，得杉木雙花鞘花寄生乙醇提取物浸膏（EE） 5.181 g，得率為5.18%。同法制備丙酮提取物浸膏（AE） 3.203 g，得率為3.20%；乙酸乙酯提取物浸膏（EAE） 1.400 g，得率為1.40%。

1.2.2 清除DPPH自由基能力測定[9] 取0.15 mL不同濃度（0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、1.8、2.0 mg/mL）杉木雙花鞘花寄生提取物，分別加入8 mL 0.004%（m/V）DPPH溶液，室溫放置10 min，以不加提取液的DPPH為空白對照，在最大波長517 nm處測定吸光度，直到平衡為止。根據(jù)下列公式計(jì)算各種提取液對DPPH自由基的清除率：SC=（1-A1/A0）×100%，式中，SC為清除率，A1為加提取物后DPPH溶液的吸光度；A0為未加提取物時DPPH溶液的吸光度。

1.2.3 清除ABTS自由基能力測定[10] 用去離子水將ABTS配制成7 mmol/L準(zhǔn)備液，然后往準(zhǔn)備液中加入過硫酸鉀固體，使此準(zhǔn)備液的過硫酸鉀濃度變?yōu)?.45 mmol/L。室溫避光放置2 d備用。將ABTS溶液用磷酸鹽緩沖液（PBS）稀釋，在732 nm下測得吸光度為（0.70±0.05），將30 μL不同濃度（同“1.2.2”）的杉木雙花鞘花寄生提取物分別與3 mL ABTS溶液混合，在室溫下放置10 min后測其吸光度，PBS溶液作為參比，取穩(wěn)定時的A732 nm值。清除率計(jì)算公式如下：SC=[1-Atest/Acontrol）]×100%。其中，Atest為加入提取物后的ABTS的穩(wěn)定吸光度；Acontrol為不加提取物的ABTS的吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 杉木雙花鞘花寄生對DPPH自由基的清除能力

DPPH是一種早期合成的有機(jī)自由基，其結(jié)構(gòu)中含有3個苯環(huán)，1個氮原子上有 1個孤對電子，常用來評估抗氧化物的供氫能力，它在有機(jī)溶劑中非常穩(wěn)定，呈紫色，在517 nm處有強(qiáng)吸收，當(dāng)遇到自由基清除劑時，DPPH的孤對電子被配對而使其退色，也就是在最大吸收波長處的吸光值變小。因此，可通過測定吸光值的變化來評價(jià)樣品對DPPH自由基的清除效果。通過測定不同濃度杉木雙花鞘花寄生不同極性溶劑提取物對DPPH自由基的清除能力，結(jié)果（圖1）表明，杉木雙花鞘花寄生不同極性溶劑提取物DPPH自由基清除率與提取物濃度呈正相關(guān)，EE、AE具有較強(qiáng)的清除能力，且清除率較為相近。在提取物溶液濃度為2.0 mg/mL時，EE、AE對DPPH自由基的清除率分別為76.75%和74.75%，而EAE清除能力則相對較弱，僅為64.59%。

2.2 杉木雙花鞘花寄生對ABTS自由基的清除能力

ABTS在適當(dāng)?shù)难趸瘎┳饔孟卵趸删G色的ABTS自由基，在抗氧化物存在時ABTS自由基的產(chǎn)生會被抑制，在732 nm測定其吸光度即可測定并計(jì)算出樣品的ABTS自由基清除能力。圖2是不同濃度杉木雙花鞘花寄生不同極性溶劑提取物對ABTS自由基清除能力的測定結(jié)果。由圖2可知，EE和AE均具有很好地清除ABTS自由基的能力，對ABTS自由基的清除率與提取物溶液濃度呈正相關(guān)。在濃度為0.5～1.2 mg/mL時，AE 對ABTS自由基清除能力稍強(qiáng)于EE，但在濃度為1.5～2.0 mg/mL時，EE對ABTS的清除率高于AE。EAE活性最弱，其對ABTS的清除能力隨提取物濃度的升高變化幅度很小。

3 結(jié)論

杉木雙花鞘花寄生各極性提取物對DPPH及ABTS自由基均具有清除能力，清除率與各提取物溶液濃度呈正相關(guān)；95%乙醇和丙酮提取物對自由基的清除能力均很強(qiáng)，乙酸乙酯提取物對自由基的清除能力較弱，表明杉木雙花鞘花寄生提取物特別是95%乙醇和丙酮提取物具有較好的開發(fā)天然抗氧化性物質(zhì)的潛力，這為進(jìn)一步開發(fā)利用杉木雙花鞘花寄生資源、深入挖掘杉木雙花鞘花寄生在食品和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用提供了一定的參考依據(jù)。

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