幾種丙型肝炎抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑質(zhì)量分析

【摘 要】 目的：了解目前臨床上常用的幾種丙型肝炎抗體（抗-HCV）酶聯(lián)免疫診斷試劑的質(zhì)量情況。方法：選用三種國(guó)內(nèi)不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的抗-HCV酶聯(lián)免疫診斷試劑盒，對(duì)40份來(lái)自醫(yī)院的抗-HCV陽(yáng)性病人血清（以雅培i1000檢測(cè)結(jié)果為準(zhǔn)）、40份常規(guī)體檢抗-HCV陰性血清、1份上海市臨檢中心抗-HCV室內(nèi)質(zhì)控品進(jìn)行檢測(cè)。從而對(duì)三種試劑的靈敏度、特異性、相對(duì)符合率及精密度進(jìn)行分析。結(jié)果：三種國(guó)產(chǎn)試劑靈敏度均達(dá)100%。其中試劑盒A和試劑盒C的相對(duì)特異性均為97.5%，相對(duì)符合率均為98.75%。試劑盒B的相對(duì)特異性與相對(duì)總符合率均為100%。三家廠(chǎng)家試劑CV分別為14.8%、13.3%、10.9%。結(jié)論：國(guó)產(chǎn)抗-HCV酶聯(lián)免疫試劑靈敏度已符合要求，特異性及精密度的提高依然是主要問(wèn)題。影響試劑盒質(zhì)量的因素是多方面的，不同批次試劑盒在使用前應(yīng)注意抽檢，以確保檢測(cè)結(jié)果的可靠。陽(yáng)性結(jié)果應(yīng)做兩次檢驗(yàn)，避免假陽(yáng)性結(jié)果的報(bào)出。

【關(guān)鍵詞】 肝炎病毒；HCV；抗-HCV抗體；酶聯(lián)免疫法；試劑盒

【中圖分類(lèi)號(hào)】 R446.6 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 B

QUALITY ANALYSIS OF SEVERAL ANTI-HCV EIA KITS

Zhang Qianlan Zhang Jian Liu Xiaoyan*

（Shanghai Obstetrics and Gynecology Hospital， Fudan University， Huangpu ，Shanghai， 200011）

【Abstract】 Objective： To investigate the quality of several anti-HCV EIA kits in common market. Methods： 40 patients sera which were positive for anti-HCV（confirmed with Abbott i1000），40 samples which were negative for anti-HCV and one quality control materials of Shanghai Centre for Clinical Laboratory were detected by using three kinds of anti-HCV EIA kits which made of different manufactories. So the sensitivity and specificity and precision of each kit were calculated and the ability of each kit to detect the anti-HCV was also analyzed. Results： The sensitivity of three domestic anti-HCV EIA kits all reached 100%.The specificity of kit A and kit C reached 97.5% which of kit B reached 100%.The compliance rate of kit A and kit C reached 98.75% which of kit B reached 100%.The CV values of kits were 14.8%，13.3% and 10.9%. Conclusion： The sensitivity of domestic anti-HCV kits has already meet the requirements. But those kits still need improve the specificity. The factors which affect the quality of kit are variety. We should make the quality analysis before that kit of different batch number being used to ensure the reliable results. The positive results should be detected twice to avoid the 1 positive.

【Keywords】 hepatitis virus； HCV； anti-HCV； ELISA；EIA kits

1 材料與方法

1.1 樣本 從各家醫(yī)院收集的肝炎病人抗-HCV陽(yáng)性血清（-20℃保存）26份（已用雅培i1000檢測(cè)確認(rèn)，無(wú)溶血、乳糜標(biāo)本），從中隨機(jī)各抽取200μl血清兩兩混合，組成混合陽(yáng)性血清14份（每份400μl）。（見(jiàn)表1）

全部陽(yáng)性血清編號(hào)為1-40；上海市臨檢中心2009年正常體檢標(biāo)本40份（已用雅培i1000檢測(cè)確認(rèn)），編號(hào)為41-80；上海市臨檢中心抗-HCV室內(nèi)調(diào)查品1份（批號(hào)1001）。2℃-8℃冰箱保存。

1.2 材料

1.2.1 試劑 北京某廠(chǎng)家生產(chǎn)抗-HCV試劑盒（96孔），批號(hào)2009090810，編號(hào)試劑A；上海某廠(chǎng)家生產(chǎn)抗-HCV試劑盒（96孔），批號(hào)201001021，編號(hào)試劑B；上海某廠(chǎng)家生產(chǎn)抗-HCV試劑盒（96孔），批號(hào)20100101，編號(hào)試劑C。三種試劑盒均具有中國(guó)藥品生物制品檢定所批檢合格報(bào)告單，每盒均在有效期內(nèi)，有防偽標(biāo)簽。所用包被抗原均為合成多肽及基因工程抗原（包括HCV病毒結(jié)構(gòu)區(qū)核心抗原和非結(jié)構(gòu)區(qū)抗原）。2-8℃冰箱避光保存。

1.2.2 洗板機(jī) Wellwash 4 Mk 2（Labsystems Dragon，芬蘭）

1.2.3 酶標(biāo)儀 Wellscan Mk 3（Labsystems Dragon，芬蘭）

1.2.4 其他 ARCHITECT i1000化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（Abbott雅培，美國(guó)）

1.3 方法 將收集的26份抗-HCV陽(yáng)性血清標(biāo)本用雅培i1000檢測(cè)，隨機(jī)抽取部分標(biāo)本兩兩吸樣混合，制成14份混合陽(yáng)性血清標(biāo)本。將所有40份抗-HCV陽(yáng)性標(biāo)本與40份陰性標(biāo)本編號(hào)1-80。將精密度參考品10孔連續(xù)加樣，編號(hào)901-910。用三種待評(píng)定丙型肝炎病毒抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑盒嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)方法進(jìn)行檢測(cè)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 靈敏度、特異性與總符合率 以雅培i1000的檢測(cè)結(jié)果為相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)，凡試劑盒檢出標(biāo)準(zhǔn)品的陽(yáng)性結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)品的預(yù)期陽(yáng)性結(jié)果相一致的稱(chēng)為真陽(yáng)性以a表示，凡不符合的結(jié)果為假陽(yáng)性以b表示。試劑盒檢出的標(biāo)準(zhǔn)品陰性結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)品預(yù)期的陰性結(jié)果一致時(shí)為真陰性以d表示，不符合的為假陰性以c表示。按照下列公式計(jì)算各項(xiàng)評(píng)價(jià)試劑指標(biāo)：靈敏度=（a/a+c）×100%（某試驗(yàn)從已知某一種病的人群中檢出這一病真正陽(yáng)性結(jié)果的率）；特異性=（d/b+d）×100%（某試驗(yàn)?zāi)軓哪骋蝗巳褐袡z出某一疾病的陰性結(jié)果的能力）；符合率=（a+d/a+b+c+d）×100%（某試驗(yàn)?zāi)軓年?yáng)性患者中測(cè)出陽(yáng)性結(jié)果和從陰性人群中測(cè)出陰性結(jié)果的能力）。

抽檢的三種國(guó)產(chǎn)丙型肝炎試劑盒，每個(gè)批次的相對(duì)靈敏度均為100%。其中試劑盒A和試劑盒C的相對(duì)特異性均為97.5%，相對(duì)符合率均為98.75%。試劑盒B的相對(duì)特異性與相對(duì)總符合率均為100%。

2.1.1 試劑A

2.2 精密度 用三家廠(chǎng)家生產(chǎn)的抗-HCV酶聯(lián)免疫診斷試劑盒分別檢測(cè)精密度參考品（抗-HCV室內(nèi)調(diào)查品，2NCU/ml），每板內(nèi)連續(xù)檢測(cè)10孔。計(jì)算每孔的吸光度（A）值與cutoff的比值（S/CO值）、變異系數(shù)（CV）。（表5）

3 討論與結(jié)論

我國(guó)的抗-HCV診斷試劑自1993年面世以來(lái)，其質(zhì)量已取得了很大進(jìn)展。自1994年5月國(guó)家對(duì)抗-HCV試劑實(shí)行批批檢定以來(lái)，已有多份的抗-HCV EIA試劑用于供血員和血液制品篩查，國(guó)內(nèi)丙型肝炎的發(fā)病率已明顯下降[2]。EILSA試驗(yàn)以其操作簡(jiǎn)便、靈敏度高和特異性強(qiáng)等特點(diǎn)而廣泛應(yīng)用于全國(guó)各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)，但其受其他因素影響較大，如加樣準(zhǔn)確性、溫育時(shí)間、試劑反應(yīng)溫度、洗板效果、酶標(biāo)儀準(zhǔn)確性等。因此實(shí)驗(yàn)中嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作并努力減少操作誤差是獲得最佳實(shí)驗(yàn)結(jié)果的關(guān)鍵[3]。由于抗-HCV陽(yáng)性標(biāo)本收集較為困難，在幾個(gè)月的時(shí)間內(nèi)無(wú)法收集大量標(biāo)本，因此在實(shí)驗(yàn)中采用陽(yáng)性標(biāo)本混合稀釋的方法使標(biāo)本量達(dá)到所需數(shù)量。但人類(lèi)血清成分復(fù)雜多變，雖然同為血清，但混合后不可避免地也會(huì)產(chǎn)生一定基質(zhì)效應(yīng)，經(jīng)過(guò)處理的混合血清，由于血清機(jī)制的理化性質(zhì)在處理過(guò)程中的改變，在常規(guī)測(cè)定上往往出現(xiàn)基質(zhì)偏差。關(guān)于不同血清成分組合對(duì)標(biāo)本稀釋后的影響的研究也正在進(jìn)行，如劉沛等所做的混合血清法篩檢丙型肝炎抗體的前瞻性研究。為使基質(zhì)效應(yīng)的影響降至最低，標(biāo)本混合后應(yīng)及時(shí)測(cè)定，以免血清成分發(fā)生改變對(duì)測(cè)定結(jié)果造成影響，也可避免標(biāo)本反復(fù)凍融影響檢測(cè)結(jié)果。

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，三個(gè)品牌試劑盒檢測(cè)的相對(duì)靈敏度均達(dá)到100%，而特異性也分別達(dá)到了97.5%和100%，相對(duì)符合率達(dá)到了98.75%和100%?？梢钥闯鰢?guó)內(nèi)廠(chǎng)家自從開(kāi)發(fā)了第三代抗-HCV EIA試劑盒，其檢測(cè)的靈敏度與特異性均較第二代試劑有了很大的提高，對(duì)于陽(yáng)性較強(qiáng)標(biāo)本無(wú)一漏檢。特異性方面，試劑A與試劑B都有1例假陽(yáng)性（經(jīng)過(guò)雅培i1000復(fù)檢2例標(biāo)本抗-HCV S/CO值分別為0.08與0.12），可以看出檢測(cè)試劑在假陽(yáng)性率方面還有待加強(qiáng)，各醫(yī)療單位在日常檢測(cè)中如遇陽(yáng)性結(jié)果不應(yīng)直接報(bào)出，而應(yīng)復(fù)檢。若兩次結(jié)果皆為陽(yáng)性才可認(rèn)為是陽(yáng)性。三廠(chǎng)牌試劑盒的CV值均小于15%，但其較高的CV值顯示出三種試劑的精密度有待提高。當(dāng)然由于手工ELISA方法的特性，檢測(cè)過(guò)程中的影響因素多樣，如操作人員水平、溫育時(shí)間控制等等，容易造成操作誤差，因此精密度的結(jié)果與儀器檢測(cè)相比稍遜一籌也是可以接受的結(jié)果[3]。

可以看出國(guó)產(chǎn)抗-HCV酶聯(lián)免疫試劑靈敏度已符合要求，特異性及精密度的提高依然是主要問(wèn)題。影響試劑盒質(zhì)量的因素是多方面的，不同批次試劑盒在使用前應(yīng)注意抽檢，以確保檢測(cè)結(jié)果的可靠。陽(yáng)性結(jié)果應(yīng)做兩次檢驗(yàn)，避免假陽(yáng)性結(jié)果的報(bào)出。

參考文獻(xiàn)

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[2] 于洋，祁自柏，周誠(chéng)，谷金蓮，楊振，張庶民，張華遠(yuǎn)，李河民.國(guó)產(chǎn)抗HCV酶聯(lián)免疫診斷試劑質(zhì)量分析[J].中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2001，2（3）：168-170.

[3] 伍建寧，夏傳友，李交，等.自動(dòng)化酶免檢測(cè)系統(tǒng)與手工酶免檢測(cè)的對(duì)比評(píng)價(jià)[J].上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志.2001，16：294-295.