子宮頸上皮內(nèi)瘤變及鱗癌組織Survivin與C-myc蛋白表達及其意義

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(青島大學醫(yī)學院，山東 青島 2660021 病理學教研室； 2 附屬醫(yī)院病理科)

子宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見惡性腫瘤之一，近年來其發(fā)病率有增高且呈年輕化的趨勢，非早期者嚴重影響女性身體健康。研究結(jié)果表明，宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展受多種因素的影響，有多個階段及多種原癌基因的活化和抑癌基因的失活參與其中[1]。由于子宮頸癌的發(fā)生往往伴有一系列的前驅(qū)病變并可存在多年，如果能夠早期發(fā)現(xiàn)，就可早期進行相應的監(jiān)控和治療，從而將癌變消滅在萌芽狀態(tài)，降低宮頸癌的發(fā)生率及危害性。因此，探討子宮頸癌早期診斷的分子生物學指標具有重要的臨床價值。本文通過對Survivin、C-myc蛋白在子宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)及鱗狀細胞癌(SCC)組織中的表達及關(guān)聯(lián)性研究,探討兩者在CIN及SCC發(fā)生、發(fā)展中的作用,旨在為臨床選擇該病的治療方案提供指導。現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

隨機選取我院2010年1月—2012年1月手術(shù)活檢及切除的子宮頸CIN及SCC標本100例，病人年齡20～76歲，平均41.6歲。CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ級各20例。鱗癌40例，其中高中分化鱗癌22例，低分化鱗癌18例；臨床Ⅰ～Ⅱ期24例，Ⅲ～Ⅳ期16例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者8例；術(shù)前均未經(jīng)過放化療。同時收集10例非瘤變宮頸鱗狀上皮組織作為對照。

1.2 研究方法

所有組織標本以4 μm厚連續(xù)切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化處理，以體積分數(shù)0.03的 H2O2溶液消除內(nèi)源性過氧化物酶，PBS緩沖液(pH 7.4)洗片，以檸檬酸緩沖液(pH 6.0)抗原修復鼠抗人C-myc、羊抗人Survivin抗體，待其自然冷卻后，分別采用PV-6000、 PV-9003法檢測相關(guān)組織中C-myc、Survivin蛋白的表達情況。鼠抗人C-myc單克隆抗體(北京中杉金橋生物有限公司)1∶100，羊抗人Survivin抗體(Santa Cruz Biotechnology, Inc)1∶100。實驗分別用已知陽性組織切片作為陽性對照，用PBS代替兩種一抗作為陰性對照。

1.3 免疫組化結(jié)果判定

Survivin蛋白陽性表達為細胞核或細胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒，C-myc蛋白陽性表達為細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒。免疫組化結(jié)果判定標準參照文獻[2-3]的方法。

2 結(jié) 果

2.1 不同病變子宮頸組織中Survivin、C-myc蛋白的表達

本文10例非瘤變子宮頸鱗狀上皮組織均未發(fā)現(xiàn)Survivin、C-myc蛋白表達。由表1可見，與非瘤變組相比，CIN及SCC組Survivin的陽性表達強度顯著增高(Hc=23.209,q=18.497、26.022；P均<0.01)；隨CIN分級的增高，Survivin的陽性表達強度也顯著增高(Hc=45.633,q=6.905～11.498；P均<0.01)；CINⅢ組與SCC組、CINⅠ組與非瘤變組比較，Survivin的陽性表達強度顯著增高(q=24.438、6.078；P均<0.01)。

由表2可見，與非瘤變組相比，CIN及SCC組C-myc的陽性表達強度表達強度顯著增高(Hc=21.315,q=18.086、25.437；P均<0.01)；隨CIN分級的增高，C-myc的陽性表達強度顯著增高(Hc=36.383,q=6.331～9.244，P均<0.01)；CINⅢ組與SCC組、CINⅠ組與非瘤變組比較，C-myc的陽性表達強度均顯著增高(q=26.156、6.463，P均<0.01)。

2.2 Survivin、C-myc蛋白的表達與子宮頸SCC主要臨床病理特征的關(guān)系

子宮頸SCC組織中Survivin及C-myc蛋白的表達陽性率在高中、低分化組間、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移組間及臨床Ⅰ～Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ期組間比較，差異均有顯著性(χ2=6.000～10.909，P<0.05)。見表3、4。

表1 Survivin在不同病變子宮頸組織中的表達(例)

表2 C-myc在不同病變子宮頸組織中的表達(例)

表3 Survivin蛋白表達與子宮頸SCC主要臨床病理特征的關(guān)系

表4 C-myc蛋白表達與子宮頸SCC主要臨床病理特征關(guān)系

2.3 Survivin、C-myc蛋白表達的相關(guān)性

Survivin、C-myc蛋白在CIN組織的表達呈顯著正相關(guān)(r=0.680,P<0.01)。見表5。Survivin、C-myc蛋白在SCC組織的表達亦呈顯著正相關(guān)(r=0.722,P<0.01)。見表6。

表5 Survivin和C-myc蛋白在CIN組織表達相關(guān)性(例)

表6 Survivin和C-myc蛋白在子宮頸SCC組織中表達的相關(guān)性(例)

3 討 論

3.1 Survivin蛋白在CIN及SCC組織中表達意義

Survivin蛋白是目前發(fā)現(xiàn)的最強的凋亡抑制因子[4]，生理狀態(tài)下，除胎盤和胸腺組織中存在程度不同的Survivin蛋白表達外，大多數(shù)組織中均無Survivin蛋白的表達[5]。它在正常成熟的組織中不表達，但廣泛表達于許多人體腫瘤組織中，通過抑制Caspase的表達，促使DNA受損細胞無限增殖，導致惡性腫瘤的發(fā)生。

本文結(jié)果提示， Survivin表達增強出現(xiàn)在CIN的初始階段，且隨CIN分級的增高而增強，在SCC組織中表達最強，且與SCC分化、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，這與許多研究結(jié)果一致[6-7]。BRANCA等[6]的研究結(jié)果顯示，Survivin是一種可以預測宮頸癌發(fā)生的早期標志物。朱燕等[7]對40例CIN及64例宮頸癌組織的研究結(jié)果顯示，低分級瘤變(L-CIN)與高分級瘤變(H-CIN)間及L-CIN 與宮頸癌間Survivin表達差異均有顯著性。此差異性可能與CIN病例的分組不同及免疫組化結(jié)果判斷標準不同有關(guān)。上述結(jié)果表明，Survivin參與了CIN和SCC的發(fā)生和發(fā)展過程，其異常是預示SCC可能發(fā)生的一個早期事件，提示臨床應注意隨訪Survivin陽性的CIN病人或盡早給予及時有效治療。另外，上述結(jié)果亦表明，Survivin可作為評估子宮頸SCC生物學行為的一個重要指標。

3.2 C-myc蛋白在CIN及SCC組織中表達的意義

c-myc是一種原癌基因，其表達產(chǎn)物位于癌細胞核內(nèi)，屬于信號傳導通路的下游基因[8]，該基因是決定細胞從G0/G1期進入S期的開關(guān)，在細胞由正常轉(zhuǎn)向腫瘤性生長過程中起到至關(guān)重要的作用[9]。研究表明，正常宮頸組織中c-myc不表達，CINⅢ組織比CINⅡ、CINI組織表達增強,宮頸癌組織中有c-myc基因擴增或過度表達且與病人的不良臨床預后有關(guān)，其表達強度隨惡性程度的增高而增強[10]。本文結(jié)果亦與上述報道基本一致。說明C-myc的過表達亦出現(xiàn)在CIN的初期并在CIN和SCC的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用。提示C-myc陽性的CIN病人具有癌變的高危性，應注意隨訪，同時亦可作為評估子宮頸SCC生物學行為的重要指標。

3.3 Survivin、C-myc蛋白在CIN及SCC組織中的相關(guān)關(guān)系

關(guān)于兩者在CIN及SCC組織中的相關(guān)關(guān)系，文獻中鮮有報道。成克倫[11]通過對survivin和c-myc在前列腺癌組織中表達的研究顯示，兩者呈顯著正相關(guān)關(guān)系；PAPANIKOLAOU等[12]對乳癌細胞系研究顯示，HER2通過核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB 和c-myc調(diào)控Survivin的表達，這一研究揭示出HER2陽性的乳癌細胞的放療抵抗作用是通過HER2誘導NF-κB和c-myc表達，激活下游靶基因Survivin而抑制凋亡實現(xiàn)的。本文研究結(jié)果顯示，Survivin、C-myc蛋白在CIN及SCC組織表達均呈顯著正相關(guān),提示兩者共同促進CIN及SCC的發(fā)生及發(fā)展。聯(lián)合檢測Survivin、C-myc，對于篩查高危CIN個體并密切隨訪或盡早給予及時有效治療，具有重要的臨床價值。

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