HBV血清標(biāo)志物與HBV-LP及HBV-DNA聯(lián)合檢測(cè)的臨床意義初探

雷 平

（湖南師范大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南省人民醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙410006）

中國(guó)是乙型肝炎病毒( HBV)感染的高流行區(qū)。在一般人群中，HbsAg 的陽(yáng)性檢出率高達(dá)9.09%。而HBsAg 陽(yáng)性率在接種與未接種乙型肝炎疫苗人群之間分別達(dá)4. 51%和9. 51%[1]。 因此, HBV 的早期檢測(cè)及診斷對(duì)于乙肝的篩查及肝癌的預(yù)防具有重要意義。 目前為止，HBV 血清標(biāo)志物檢測(cè)已經(jīng)有幾十年的歷史，它在乙肝的篩查、診斷以及治療過(guò)程中占有極其重要的地位。 然而，隨著免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的飛速發(fā)展，HBV-LP 的檢測(cè)也開(kāi)始應(yīng)用于臨床乙肝病毒的感染診斷及治療監(jiān)測(cè)。近年來(lái), HBVDNA 的定性和定量檢測(cè)也在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用。本研究對(duì)1210 例檢測(cè)HBV 感染的血清標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了回顧性分析。

1 材料與方法

1.1 樣本來(lái)源

樣本來(lái)自于2008年7月～ 2012年4月期間1210 例在我院門(mén)診和住院的檢測(cè)的患者血清。 其診斷均符合乙型病毒性肝炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則6(衛(wèi)生部GB15990-1995)的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 試劑與方法

乙肝血清標(biāo)志物檢測(cè)試劑盒購(gòu)自英科新創(chuàng)(廈門(mén))科技有限公司，HBsAg、HbeAg 采用ELISA 雙抗體夾心法檢測(cè)， 結(jié)果判定以S/CO≥1. 0 為陽(yáng)性；HBsAb 采用ELISA 雙抗原夾心法檢測(cè)， 以S/CO≥1. 0 為陽(yáng)性；HBeAb 以及HBcAb 采用ELISA 競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)， 以S/CO<1. 0 為陽(yáng)性；HBV-LP 蛋白檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京貝爾生物工程有限公司，采用雙抗體夾心法檢測(cè)， 以S/CO≥1. 0 為陽(yáng)性； HBV-DNA熒光定量檢測(cè)試劑盒購(gòu)自大連寶生物工程有限公司，病毒載量≥1. 0×103拷貝/毫升判為陽(yáng)性。

表1 HBV 血清模式與HBV-LP 及HBV-DNA 聯(lián)合檢測(cè)

1.3 儀器

美國(guó)bio-tek 公司ELX- 800 型酶標(biāo)儀； 美國(guó)bio-rad 公司實(shí)時(shí)熒光定量基因擴(kuò)增儀HBV-LP IQ5 型。

2 結(jié)果

2.1 HBV 的不同血清感染模式與HBV-LP 以及HBV-DNA 聯(lián)合檢測(cè)的結(jié)果

在HBV 的各種不同感染模式中，HBV-LP 與HBV-DNA 陽(yáng)性的患者例數(shù)及其構(gòu)成比例如表1所示。

Ⅰ組，HBsAg、HBeAg、HBcAb 陽(yáng)性模式組(即是俗稱(chēng)的"大三陽(yáng)")的HBV-LP 陽(yáng)性率與其它各血清模式組之間分別比較，前者高于后者(乙肝兩對(duì)半模式χ2 檢驗(yàn), P<0. 05)。 " 大三陽(yáng)" 模式組的HBV-DNA 陽(yáng)性率高于其余各血清模式組 (P<0.05)。

2.2 三種感染模式中，HBV-DNA 陽(yáng)性標(biāo)本的實(shí)時(shí)熒光定量PCR 結(jié)果

HBV-DNA 載量在3 種血清感染模式中的分布見(jiàn)表2。

Ⅰ（大三陽(yáng)）組與Ⅱ（小三陽(yáng)）組的HBV-DNA載量相比，兩者具有顯著性差異，前者高于后者(χ2檢驗(yàn),P<0. 05)；Ⅰ（大三陽(yáng)）組與Ⅲ（HBsAg、HBcAb陽(yáng)性）組比較, 前者的HBV-DNA 載量亦高于后者(P< 0. 05)；Ⅱ（小三陽(yáng)）組與Ⅲ（HBsAg、HBcAb 陽(yáng)性） 組相比，HBV-DNA 水平無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

表2 3 種血清模式HBV-DNA 陽(yáng)性標(biāo)本的定量檢測(cè)結(jié)果

3 討論

乙型肝炎病毒(HBV)是一種嗜肝DNA 病毒，其染色體結(jié)構(gòu)部分雙鏈并形成了一個(gè)約3.2Kb 的環(huán)狀結(jié)構(gòu)。HBV 的某些部位可發(fā)生變異，如前C 區(qū)和基本核心啟動(dòng)子(BCP) ，這些部位的變異導(dǎo)致HBeAg 不表達(dá)或低表達(dá)，產(chǎn)生HBeAg 陰性的變異株[2]。

HBV-DNA 是臨床上用來(lái)評(píng)估抗病毒療效的重要指標(biāo)之一，是證明外周血中HBV-DNA 復(fù)制的金標(biāo)準(zhǔn)，基于PCR 的高靈敏性，可以用來(lái)判斷乙肝患者和乙肝病毒攜帶者有無(wú)傳染性[2,3]。 但是，血清HBV-DNA 檢測(cè)尚未標(biāo)準(zhǔn)化，對(duì)于其檢測(cè)限的認(rèn)識(shí)仍存在一定的爭(zhēng)議。 而在實(shí)際臨床治療過(guò)程中，肝內(nèi)cccDNA 的降低遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于血清HBV-DNA 水平，血清低水平HBV-DNA 時(shí)， 肝內(nèi)仍可維持一定水平。 因此，血清HBV-DNA 檢測(cè)為陰性時(shí)并不意味著HBV 已經(jīng)完全清除干凈[4]。

HBeAg 是臨床上使用的另一個(gè)重要標(biāo)志物，它用來(lái)判定HBV 傳染性的強(qiáng)弱、 復(fù)制程度以及慢性乙型肝炎患者的預(yù)后等[5]。但是由于某些因素，如持續(xù)免疫壓力、 長(zhǎng)期治療、 前C 和C 啟動(dòng)子變異等， 致使HBeAg 陰性的慢型乙型肝炎患者明顯增多， 此時(shí)患者的體內(nèi)仍可能存在極低水平的HBV病毒復(fù)制[6]。因此，HbeAg 的轉(zhuǎn)陰并不能完全排除病毒的感染與復(fù)制的可能，進(jìn)而在臨床上造成難以確定停藥時(shí)機(jī)等情況。

HBV 可以分泌3 種外膜蛋白，HBV-LP 是其中之一，它可以與中蛋白和小蛋白以合適的比例組裝成Dane 顆粒。 而HBV-LP 是這3 種膜蛋白中與Dane關(guān)系最密切的成分，即與HBV 的復(fù)制密切相關(guān)[3,7]。

本研究發(fā)現(xiàn)，在"大三陽(yáng)"模式組中，HBV-DNA陽(yáng)性率占95.3%(244/256)，顯著高于其他各模式組(P<0.05)， 這提示HBV-DNA 與HBeAg 高度相關(guān)。另外，" 大三陽(yáng)" 模式組中,HBV-LP 的陽(yáng)性率占88.3%(226/256)，顯著高于其余各模式組(P<0.05)，表明HBV-LP 與HBeAg 亦具有較高的相關(guān)性，與已有的文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果基本一致[8]。

另外，在HBsAb、HBcAb 陽(yáng)性模式組檢測(cè)出1例HBV-DNA 陽(yáng)性(1/64)，其可能原因是經(jīng)過(guò)治療后在患者體內(nèi)已經(jīng)開(kāi)始產(chǎn)生HBsAg/HBsAb 血清轉(zhuǎn)換，但是還未完全清除HBV 病毒引起[9]。 HBeAb、HBcAb 陽(yáng)性模式組檢測(cè)出1 例HBV-DNA 陽(yáng)性(1/41)， 其可能原因是由于S 基因的突變導(dǎo)致了HBsAg 檢測(cè)呈現(xiàn)陰性結(jié)果， 而體內(nèi)的HBV 卻依然呈低復(fù)制水平[10]。

綜合上述結(jié)果分析，HBV 的血清學(xué)標(biāo)志、HBV-LP 以及HBV-DNA 載量的聯(lián)合檢測(cè)有助于指導(dǎo)醫(yī)生選擇最佳治療方案、監(jiān)測(cè)病情變化并有助于臨床療效觀察。

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