急性腦卒中患者血清視黃醇結(jié)合蛋白4的表達(dá)及其與低密度脂蛋白關(guān)系的探討

王 珊，姚 娟，高小平

（湖南師范大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，湖南 長(zhǎng)沙410005）

視黃醇結(jié)合蛋白(retinol-binding protein，RBP)是血液中視黃醇(維生素A)的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,參與血清和細(xì)胞內(nèi)視黃醇/視黃酸的轉(zhuǎn)運(yùn)。 它是由肝細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分泌的一種低分子量蛋白，廣泛分布在人體血清、腦脊液、尿液等體液中。而視黃醇結(jié)合蛋白4（RBP4）是血清視黃醇結(jié)合蛋白，是細(xì)胞外最主要的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。 RBP4(retinol binding protein 4，RBP4)是一個(gè)新近發(fā)現(xiàn)的脂肪因子，在許多研究中均發(fā)現(xiàn)RBP4 在肥胖、胰島素抵抗、代謝綜合征、高血壓及動(dòng)脈粥樣硬化、血脂異常中發(fā)揮了重要作用[1]。 但是，視黃醇結(jié)合蛋白4 在急性腦卒中的發(fā)生和發(fā)展中有無作用，與低密度脂蛋白有無關(guān)聯(lián)，目前仍不清楚。 本研究將對(duì)此進(jìn)行探討。

1 資料與方法

1. 1 一般資料

2010年12月至2012年6月期間在湖南省人民醫(yī)院住院的急性腦梗死患者191 例，男98 例，女93 例，年齡52～81 歲，平均年齡（66.04±11.08）歲，急性腦出血患者81 例， 男42 例， 女39 例，年齡49～78 歲，平均年齡（63.41±9.91）歲為觀察組。 入組條件為半月內(nèi)首次發(fā)病，均經(jīng)頭部CT 或頭部MRI得以確診。 對(duì)照組為同期門診體檢健康者，共100例，其中男性50 例，女性50 例，年齡50～79 歲，平均年齡（64.26±10.17）歲。 排除明顯肝腎功能異常、嚴(yán)重心臟及消化道疾病、甲狀腺功能障礙、惡性腫瘤。 三組的性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1. 2 方法

所有入選者空腹采靜脈血3mL 于潔凈自凝試管內(nèi)送檢，2h 內(nèi)分離血清檢測(cè)。 -20℃密閉放置待檢。血清視黃醇結(jié)合蛋白4 水平采用以酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA) 測(cè)定，試劑盒購(gòu)自美國(guó)ADL 公司，嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書步驟進(jìn)行檢測(cè)。采用免疫比濁法測(cè)定血清低密度脂蛋白。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)錄入采用Office Excel 2010， 利用SPSS13.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 根據(jù)數(shù)據(jù)資料類型，組間各項(xiàng)指標(biāo)差異比較采用多個(gè)獨(dú)立樣本兩兩比較的Nemenyi 法檢驗(yàn)，兩變量相關(guān)性用直線回歸與相關(guān)分析，計(jì)算Pearson 相關(guān)系數(shù)。 P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01 表示差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 檢驗(yàn)水準(zhǔn)采取a=0.05。

2 結(jié)果

2.1 腦出血組、 腦梗死組與對(duì)照組血清RBP4 及LDL 水平的比較

腦出血組、腦梗死組的血清RBP4 水平明顯高于對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.01 或P<0.001），腦出血組、腦梗死組的LDL 水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。 見表1。

2.2 腦出血組與腦梗死組血清RBP4 及LDL 水平的比較

腦出血組與腦梗死組兩組血清RBP4 水平相比，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.2768），腦出血組與腦梗死組血清LDL 的水平差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P=0.1523）。 見表1。

2.3 腦出血組、 腦梗死組、 對(duì)照組的血清RBP4、LDL 的直線相關(guān)分析

腦出血組、 對(duì)照組的血清RBP4、LDL 兩指標(biāo)間無線性關(guān)系(P>0.05)， 腦梗死組的血清RBP4、LDL 兩指標(biāo)有線性關(guān)系（P<0.001），Pearson 相關(guān)系數(shù)為0.456。 見表2。

表1 腦出血組、腦梗死組、對(duì)照組RBP4 及LDL 水平的比較

表2 腦出血組、腦梗死組、對(duì)照組RBP4、LDL 兩指標(biāo)直線相關(guān)分析

3 討論

RBP4 基因位于10q23-24，大小約10kb，由6 個(gè)外顯子和5 個(gè)內(nèi)含子組成。 生理?xiàng)l件下，肝臟是RBP4的首要來源， 脂肪組織是第二主要來源(約為肝臟的20%～40%)。 RBP4 與全反式視黃醇結(jié)合形成holo-RBP，在血液循環(huán)中與甲狀腺素運(yùn)載蛋白(TTR)形成大分子復(fù)合物，將視黃醇從肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)至靶組織[2]。 血清RBP4 與血脂代謝有關(guān)，在不同人群的多項(xiàng)研究表明[3-4],RBP4 水平與TG 呈正相關(guān),與高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)呈負(fù)相關(guān),另外RBP4 可以影響脂肪酸的代謝,脂肪酸代謝失調(diào)與胰島素抵抗緊密相關(guān)[5]。 2 型糖尿病患者中血清RBP4 除了與甘油三酯、膽固醇相關(guān)外，和低密度脂蛋白(LDL)的相關(guān)性更好[6]。 臨床試驗(yàn)的證據(jù)證明低密度脂蛋白是最主要的致動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白[7],LDL 通過受損的血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙滲入內(nèi)膜下，通過氧自由基和氧化修飾的作用，導(dǎo)致膽固醇積聚、泡沫細(xì)胞形成，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化形成[8]。 無論出血性卒中還是缺血性卒中均有共同的病理基礎(chǔ)即動(dòng)脈硬化，降低低密度脂蛋白水平是預(yù)防腦卒中及腦卒中再發(fā)的最重要治療策略之一，那么在腦卒中患者中，血清RBP4水平如何，是否也與低密度脂蛋白相關(guān)。

本研究對(duì)191 例急性腦梗死患者、81 例急性腦出血患者血清RBP4 水平及LDL 水平進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示：腦梗死組、腦出血組患者血清RBP4、LDL 水平明顯高于對(duì)照組，證實(shí)了RBP4、LDL 的升高與腦卒中疾病的發(fā)生存在密切的關(guān)系。繪制散點(diǎn)圖后，經(jīng)直線相關(guān)分析提示腦梗死組血清RBP4 與血清LDL 存在直線相關(guān)關(guān)系，而腦出血組、對(duì)照組的兩組指標(biāo)則不相關(guān)。提示不考慮其他因素影響的情況下，在腦梗死患者中，血清RBP4 與血清LDL是直線相關(guān)并呈正相關(guān)的。 腦卒中患者血清RBP4水平升高是血脂異常、高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、2 型糖尿病等卒中危險(xiǎn)因素共同作用的結(jié)果。 RBP4 可能是腦卒中發(fā)生的一個(gè)危險(xiǎn)因子， 在腦卒中的發(fā)生、發(fā)展中存在一定價(jià)值。 腦梗死組RBP4 與LDL存在線性關(guān)系，證實(shí)了該類患者中血清RBP4 水平與血脂代謝相關(guān)，而降低低密度脂蛋白水平是腦梗死、心肌梗死二級(jí)預(yù)防的重中之重，那么降低RBP4水平是否也能起到預(yù)防梗死復(fù)發(fā)的作用，還需進(jìn)一步的臨床前瞻研究證實(shí)。 在腦出血患者中未發(fā)現(xiàn)類似的線性關(guān)系，可能與其具體發(fā)病機(jī)制的差異及病例數(shù)收集相對(duì)不足有關(guān)。

近年研究發(fā)現(xiàn)[9]，脂肪因子不僅在能量平衡和代謝調(diào)控中發(fā)揮重要作用,而且在免疫調(diào)節(jié)和血管穩(wěn)態(tài)等方面也有獨(dú)特作用。脂肪細(xì)胞因子的分泌失衡或功能障礙在胰島素抵抗及心血管疾病的病理生理過程中發(fā)揮重要作用,被視為胰島素抵抗和心血管疾病可能的中間環(huán)節(jié)[10]。 RBP4 是一種新的脂肪源性因子， 它可以通過抑制磷脂酞肌醇3 激酶(Phosphatidylinositol- 3kinase，PI3K)的活性，促使胰島素受體底物1 (Insulin receptor substrate 1，IRS1)酪氨酸發(fā)生磷酸化，從而誘導(dǎo)磷酸烯醇式丙酮酸激酶基因表達(dá)，參與了肥胖、胰島素抵抗和2 型糖尿病的發(fā)生[11-12]。 研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)RBP4 與動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)，目前研究的熱點(diǎn)在于RBP4 對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化及其并發(fā)癥的影響[13]。 通過檢測(cè)冠心病患者血漿RBP4 水平，發(fā)現(xiàn)RBP4 與體重指數(shù)（BMI）、尿酸水平、血脂及其他心血管病危險(xiǎn)因素相關(guān)[14]。 有研究證明，RBP4 水平的顯著升高預(yù)示著冠狀動(dòng)脈內(nèi)斑塊由穩(wěn)定向不穩(wěn)定轉(zhuǎn)化，RBP4 有可能成為急性心肌梗死（AMI）的生化標(biāo)志物，在AMI 的診斷中發(fā)揮重要作用[15]。而RBP4 在顱內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化、粥樣斑塊中的作用還需相關(guān)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。降低血清RBP4 水平對(duì)腦卒中的發(fā)生能否起到預(yù)防作用，對(duì)腦卒中的發(fā)展能否起到治療作用尚不明確。可望RBP4 能作為一種新的危險(xiǎn)因素,與LDL 等經(jīng)典指標(biāo)共同預(yù)測(cè)腦卒中疾病的發(fā)生發(fā)展。

[1] Christou GA, Tselepis AD, Kiortsis DN.The metabolic role of retinol binding protein 4: an update[J].Horm Metab Res.2012 Jan;44(1):6-14.

[2] Frey SK，Andrea H，Britta N，et al. Effect of renal replacement therapy on retinol-binding protein 4 isoforms[J].Clinica Chimica Acta.2009，401(1-2)：46-50.

[3] Graham TE,Yang Q, Blüher M, et al. Retinol-binding protein 4 and insulin resistance in lean, obese, and diabetic subjects[J].N Engl JMed, 2006,354: 2552-2563.

[4] Broch M,Gómez JM,Auguet MT, et al. Association of retinol-binding protein-4 (RBP4) with lipid parameters in obese women[J].Obes Surg, 2010,20: 1258-1264.

[5] Lee DC,Lee JW, Im JA.Association of serum retinol binding Protein 4 and insulin resistance in apparently healthy adolescents[J].Metabolism, 2007,56: 327-331.

[6] 葉麗麗,王彩玲.血清視黃醇結(jié)合蛋白對(duì)早期糖尿病腎病的診斷價(jià)值[D].山東：泰山醫(yī)學(xué)院，2010：1-10.

[7] Wanders D, Plaisance EP, Judd RL.Pharmacological effects of lipid-lowering drugs on circulating adipokines[J].World J Diabetes. 2010 Sep 15;1(4):116-28.

[8] 黃紅波，劉庚勛，李正賢.老年腦梗死患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊與血脂變化的研究[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）,2011,8(3):48-50.

[9] Ronti T,Lupattelli G,Mannarino E.The endocrine function of adipose tissue: an update [J].Clin Endocrinol (oxf), 2006,64: 355-365.

[10]Hamdy O.Lifestyle medication and endothelial function in obese subjects[J]. Expert Rev Cardiovasc Ther, 2005, 3:231-241.

[11]Gandhi H, Upaganlawar A, Balaraman R.Adipocytokines:The pied pipers[J]. Pharmacol Pharmacother. 2010 Jan;1(1):9-17.

[12]Yang Q,Graham TE,Mody N,et al.Serum retinol banding protein 4 contributes to insulin resistance in obesity and type 2 diabetes[J]. Nature,2005，436:356 一362.

[13]von Eynatten M, Humpert PM.Retinol-binding protein-4 in experimental and clinical metabolic disease[J].Expert Rev Mol Diagn. 2008 May;8(3):289-99.

[14]Li F, Yang T, Zhao Z,et al.Plasma level of RBP4 in patients with coronary heart disease and the effect of hyperinsulinemia[J].Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 2012 Nov;37(11):1177-82.

[15]王治中.急性心肌梗死患者血清視黃醇結(jié)合蛋白4 的變化及其意義[J].臨床醫(yī)學(xué), 2012,32(9): 7-8.