胃癌組織Stathmin表達及其與血管生成關系

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(1 青島大學醫(yī)學院附屬青島市市立醫(yī)院病理科，山東 青島 266071； 2 青島市黃島區(qū)中醫(yī)醫(yī)院病理科)

胃癌是消化道最常見的惡性腫瘤，在我國胃癌占所有惡性腫瘤死亡率的第一位[1]。目前隨著診療水平的不斷改善，早期胃癌病人的生存率大幅度提高，但是晚期胃癌病人的預后仍然較差。胃癌的浸潤、轉(zhuǎn)移是造成胃癌病人死亡的主要原因，因此了解胃癌發(fā)生發(fā)展機制是預防和治療的關鍵。微管不穩(wěn)定蛋白(Stathmin)是一種高度保守的細胞內(nèi)可溶性磷酸蛋白質(zhì)，在細胞周期的不同階段通過磷酸化和去磷酸化作用來調(diào)節(jié)細胞微管系統(tǒng)的動力學平衡，控制細胞周期，改變細胞的增殖、分化等生物學行為[2]。Stathmin的表達在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展及腫瘤細胞對化療藥物的敏感性上具有重要作用。Endoglin(CD105)是新生血管內(nèi)皮的重要標記物。本實驗應用免疫組織化學方法檢測胃癌組織Stathmin和CD105的表達，探討其與胃癌臨床病理特征之間的關系，并進一步研究Stathmin的表達與微血管生成的關系。

1 材料與方法

1.1 材料來源

2012年1月—2012年7月，我院接受根治性胃癌手術(shù)切除并經(jīng)病理證實為腺癌的病人120例，收集其胃癌組織及癌旁組織標本(與癌組織距離>5 cm)，所有病例術(shù)前均未接受放療和化療。另外，收集30例非腫瘤胃黏膜組織作為對照組。

1.2 方法

所有標本均經(jīng)過40 g/L的中性甲醛固定、石蠟包埋及常規(guī)連續(xù)切片。然后切片常規(guī)脫蠟,高溫高壓下熱抗原修復,嚴格按照免疫組織化學 SP試劑盒說明書的操作步驟檢測Stathmin和CD105的表達，采用CD105標記胃癌組織微血管并檢測微血管密度(MVD)值。以原位肺腺癌及淋巴結(jié)組織作為Stathmin和CD105的陽性對照,以同種動物非免疫血清代替一抗作為陰性對照。鼠抗人CD105單克隆抗體購自北京中杉金橋公司；Stathmin兔抗人單克隆抗體、即用型SP試劑盒、DAB 顯色試劑盒均購自福州邁新公司。

1.3 結(jié)果判定

由兩位醫(yī)師分別雙盲閱片并進行結(jié)果判定，顯微鏡下觀察染色結(jié)果，Stathmin表達主要定位于細胞漿，呈棕黃色顆粒狀。每張切片隨機取5個高倍(400倍)視野，每個視野計數(shù)100個細胞。按照腫瘤細胞著色強度和陽性細胞率分別進行計分。著色強度計分：無著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分；陽性細胞率計分：陽性細胞<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分?？傇u分值(陽性細胞率計分乘以著色強度計分)≤3分為陰性，>3分為陽性。CD105主要表達于腫瘤間質(zhì)的血管內(nèi)皮細胞上，CD105陽性細胞為內(nèi)皮細胞膜或胞漿呈棕黃染色。MVD測定參照WEIDNER[3]報道的微血管計數(shù)方法，記錄5個血管密度最高的視野中微血管數(shù)，取平均數(shù)作為MVD值。

1.4 統(tǒng)計學處理

應用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學處理。各組間陽性表達率比較采用χ2檢驗，兩組均數(shù)的比較采用獨立樣本t檢驗，多組均數(shù)的比較采用Kruskal-Wallis法，相關性采用Spearman等級相關分析。

2 結(jié) 果

2.1 各組織中Stathmin的表達

Stathmin表達主要定位于腫瘤細胞的胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒狀。胃癌組織、癌旁組織及腫瘤胃黏膜組織中Stathmin陽性表達分別為81例(67.5%)、28例(23.3%)、4例(13.3%)，胃癌組織中Stathmin陽性表達率明顯高于癌旁組織、非腫瘤胃黏膜組織(χ2=59.37,P<0.01)。

2.2 各組織中CD105的表達及 MVD計數(shù)

CD105在胃癌組織的微小血管上表達較強，呈棕褐色，分布有異質(zhì)性，多數(shù)分布于腫瘤實質(zhì)邊緣的間質(zhì)區(qū)，常緊鄰腫瘤細胞，而在大血管上染色不明顯。胃癌組織、癌旁組織及非腫瘤胃黏膜組織MVD平均值分別為15.43±3.75、4.90±3.17、0.73±0.21，差異有顯著性(H=96.85，P<0.01)。

2.3 胃癌組織中Stathmin表達及MVD值與胃癌臨床病理參數(shù)的關系

胃癌組織Stathmin表達及MVD值與病人性別、年齡、腫瘤直徑無關(P>0.05)，而與腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期有關(χ2=5.99～10.69，t=6.20～8.39，P<0.05)。見表1。

2.4 胃癌組織中Stathmin表達及與MVD的關系

Stathmin表達陽性胃癌組織MVD值為18.54±3.92，表達陰性胃癌組織MVD值為8.96±3.41，兩者比較差異有顯著性(t=13.06，P<0.01)。相關分析顯示，Stathmin在胃癌組織的表達與MVD值呈正相關(r=0.86，P<0.01)。

3 討 論

Stathmin是近年來發(fā)現(xiàn)的在細胞的增殖和分化中十分重要的可溶性磷酸蛋白質(zhì)，該蛋白由149個氨基酸組成，相對分子質(zhì)量為19 000。最初發(fā)現(xiàn)Stathmin在細胞有絲分裂期紡錘體的聚合和解聚中發(fā)揮重要作用，Stathmin通過調(diào)節(jié)微管系統(tǒng)的動態(tài)平衡從而調(diào)控細胞周期，并以此調(diào)節(jié)細胞的生物學行為。Stathmin促微管解聚的活性受其自身磷酸化水平的調(diào)節(jié)。近年來研究顯示，其與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關系密切[4-5]。有研究結(jié)果顯示，Stathmin在多種惡性腫瘤中的高表達與腫瘤的生物學特性及預后密切相關[4]。TROVIK等[5]在研究子宮內(nèi)膜癌時發(fā)現(xiàn)，高表達的Stathmin與腫瘤的侵襲進展及預后密切相關。JEON等[6]在研究食管癌、胃癌時發(fā)現(xiàn)，Stathmin的表達與腫瘤的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有密切關系。本研究結(jié)果顯示，Stathmin的高表達與病人性別、年齡、腫瘤直徑無關，而與腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關，與文獻報道的結(jié)果一致。提示Stathmin高表達在胃癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，推測Stathmin可以作為判斷胃癌生物學行為的指標之一。

近年來對腫瘤血管生成的研究顯示，血管生成在實體腫瘤的惡變、生長、轉(zhuǎn)移等方面起至關重要的作用。CD105是一種較特異性地代表新生血管的因子，主要表達于各組織血管內(nèi)皮細胞表面，但其并非泛血管標記，與傳統(tǒng)內(nèi)皮標記因子相比，能夠更好標記新生血管內(nèi)皮細胞，因其高表達于活化-增殖的內(nèi)皮細胞表面，故更適用于腫瘤新生血管的研究。以CD105為標記計數(shù)的MVD是評價腫瘤血管形成較為理想的指標[7]。有研究顯示，MVD在結(jié)直腸癌組織中較腺瘤組織和正常黏膜顯著增加，與腫瘤的Dukes分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移密切相關，因此認為腫瘤的微血管數(shù)量是腫瘤病人的危險因素，數(shù)量越多預后越差，越容易發(fā)生轉(zhuǎn)移[8]。YOSHIE等[9]在研究子宮內(nèi)膜周期性再生中發(fā)現(xiàn)，Stathmin的表達導致了HIF-1α與VEGF的累積，從而刺激子宮內(nèi)膜血管生成；另外有研究顯示，Stathmin能上調(diào)血管內(nèi)皮鋅指蛋白(Vezf1)，而Vezf1則是胚胎血管形成的重要轉(zhuǎn)錄調(diào)控子，從而提示Stathmin參與了血管形成的過程[10]。MISTRY等[11]研究顯示，通過反Stathmin核酶抑制人臍靜脈內(nèi)皮細胞中Stathmin的表達，能夠抑制人臍靜脈內(nèi)皮細胞血管生成。此外，近期有研究顯示，Stathmin在子宮內(nèi)膜異位癥組織中的高表達可能與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展及血管生成密切相關[12]。本文的研究結(jié)果顯示，Stathmin陽性的胃癌組織中MVD值遠高于Stathmin陰性者，且Stathmin在胃癌組織表達與 MVD值呈正相關，推測Stathmin可能通過增加腫瘤新生血管形成，從而促進腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移。Stathmin參與調(diào)節(jié)微管系統(tǒng)的動態(tài)平衡以及細胞骨架的重構(gòu)，而內(nèi)皮細胞的活性在調(diào)節(jié)血管生理功能方面起著重要的作用，Stathmin可能是通過趨化募集血管內(nèi)皮細胞的遷移，同時提高腫瘤微環(huán)境中的HIF-1α和VEGF等多種促血管生成因子的含量，從而調(diào)控血管和管道形成的。但是，有關Stathmin與胃癌新生血管形成的關系仍需做進一步研究，從而進一步揭示胃癌發(fā)生及轉(zhuǎn)移的分子機制。

表1 Stathmin表達及MVD值與胃癌臨床病理參數(shù)的關系

綜上所述，Stathmin高表達在胃癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，并與胃癌組織中微血管生成有關，可以作為判斷胃癌惡性生物學行為的指標之一。此外，Stathmin在胃癌的新生血管形成過程中起著重要作用，或可成為腫瘤抗血管生成治療的新靶點。

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