不同低氧濃度暴露對(duì)慢性疲勞綜合征建模小鼠腸上皮內(nèi)γδT細(xì)胞的影響

王 茹， 羅貝貝， 張亞軍， 王紅霞， P．R．Mabounda Kounga， 陳佩杰

(上海體育學(xué)院運(yùn)動(dòng)健身科技省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海200438)

慢性疲勞綜合征(chronic fatigue syndrome，CFS)是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中發(fā)現(xiàn)的一種疾病。目前，CFS的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，臨床也缺乏特異的診斷標(biāo)準(zhǔn)和有效的治療方法［1］。近年有研究發(fā)現(xiàn):CFS患者腸道菌群異常改變，胃腸道功能紊亂，黏膜免疫失衡，促炎因子水平升高［2］，提示腸道菌群異常相關(guān)的腸黏膜免疫屏障功能紊亂可能參與了CFS的發(fā)生［3］。腸上皮間淋巴細(xì)胞(intestinal intraepithelial lymphocytes，iIEL)在消化道中的數(shù)量極其龐大且由多個(gè)T細(xì)胞亞群組成，其中以γδT細(xì)胞所占的比例最大。已知γδT細(xì)胞是一類重要的固有免疫細(xì)胞，主要分布在黏膜和上皮組織，在維持和調(diào)節(jié)正常黏膜免疫功能中發(fā)揮重要作用［4］。本研究通過流式細(xì)胞術(shù)分析γδT細(xì)胞在慢性疲勞綜合征建模小鼠腸上皮間淋巴細(xì)胞中所占的比例，試圖從腸道黏膜免疫的角度探討CFS的發(fā)病機(jī)制。此外，鑒于適宜低氧引發(fā)的良性生物學(xué)效應(yīng)，本研究進(jìn)一步觀察不同程度低氧暴露對(duì)CFS小鼠腸上皮內(nèi)γδT細(xì)胞的影響，為治療CFS患者提供新思路。

1 研究方法

1．1 動(dòng)物與分組選取72只30～40 g的SPF級(jí)雄性ICR小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，分籠飼養(yǎng)，每籠6只，自由飲食，保持飼養(yǎng)環(huán)境溫度為(23±2)℃，濕度為55% ±15%，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由上海西普爾－必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供［SCXK(滬)2008－0016］。所有小鼠被隨機(jī)分為6組，每組12只，即正常對(duì)照組(C0組)、慢性疲勞綜合征建模組(CFS0組)、低氧干預(yù)正常對(duì)照組(C組)、慢性疲勞綜合征低氧干預(yù)對(duì)照組(CFS組)、慢性疲勞綜合征+15%氧濃度低氧暴露組(15%H組)和慢性疲勞綜合征+18%氧濃度低氧暴露組(18%H組)。其中，CFS0組、CFS組、15%H組和18%H組采用束縛和強(qiáng)迫游泳方式建立慢性疲勞綜合征小鼠模型(建模方案如表1所示)，C0組和C組在同等條件下正常飼養(yǎng)。建模完成后C0組和CFS0組立即處死，用于檢驗(yàn)建模效果。C組繼續(xù)飼養(yǎng)7 d，CFS組自然恢復(fù)7 d，15%H組和18%H組分別在15%和18%氧濃度環(huán)境暴露7 d(1 h/d，低氧干預(yù)方案見表2)，低氧設(shè)備為美國(guó) HYPOXIC SYSTEMS公司 HYP－123型低氧發(fā)生器。

1．2 行為學(xué)測(cè)試 CFS建模第5周進(jìn)行水迷宮測(cè)試。水迷宮測(cè)試相關(guān)實(shí)驗(yàn)設(shè)備均由安徽淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)，視頻處理借助美國(guó)ANY－maze動(dòng)物行為學(xué)視頻分析系統(tǒng)完成。

Morris水迷宮測(cè)試用于測(cè)定小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力。Morris水迷宮測(cè)試分為隱藏平臺(tái)獲得實(shí)驗(yàn)和移開平臺(tái)空間搜索實(shí)驗(yàn)2個(gè)部分，水面背景采用黑色食用色素著染，測(cè)試順序參照 C．V．Vorhees等［5］建議的方案。1)隱藏平臺(tái)獲得實(shí)驗(yàn):平臺(tái)置于任一象限水面下1．5 cm處，每天訓(xùn)練4次，持續(xù)5 d，小鼠入水時(shí)面向池壁，找到隱藏平臺(tái)后立即停止試驗(yàn)，儀器自動(dòng)記錄小鼠從入水到發(fā)現(xiàn)隱藏平臺(tái)的時(shí)間即逃避潛伏期。如果小鼠在120 s內(nèi)未能找到平臺(tái)，由實(shí)驗(yàn)者將其引導(dǎo)至平臺(tái)停留15 s，逃避潛伏期記為120 s。2)移開平臺(tái)空間搜索實(shí)驗(yàn):在Morris水迷宮測(cè)試的第6天移去隱藏平臺(tái)，任意選取一個(gè)入水點(diǎn)將小鼠面向池壁放入水中，儀器自動(dòng)記錄60 s內(nèi)小鼠在各個(gè)象限停留的時(shí)間，記錄在平臺(tái)所在象限停留時(shí)間。

表1 CFS建模方案Table 1 CFS Mice Model Induced by Chronic Restraint and Forced Swimming

表2 低氧干預(yù)方案Table 2 Hypoxia Intervention Scheme

1．3 腸道iIEL分離方法

1．3．1 實(shí)驗(yàn)器材 RPMI 1640培養(yǎng)液購自美國(guó)Gibco公司，Percoll分離液購自美國(guó)Sigma公司，流式抗體以及相關(guān)試劑購自美國(guó)Beckman Coulter公司。磷酸鹽緩沖溶液(10×PBS溶液)、Hank’s溶液、乙二胺四乙酸(EDTA)、二硫蘇糖醇(DTT)、5%胎牛血清(FCS)、多聚賴氨酸、多聚甲醛、生理鹽水等常規(guī)試劑藥品均購自上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

眼科剪、培養(yǎng)皿、50 mL離心管、15 mL離心管、200目篩網(wǎng)購自上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。儀器設(shè)備:移液器(德國(guó)eppendorf)，振蕩水浴箱(上海比郎儀器有限公司生產(chǎn))，低溫離心機(jī)(上海飛鴿 DL－4000B)，病理診斷系統(tǒng)(德國(guó)Leica公司提供)，Epics XL流式細(xì)胞儀(美國(guó)Beckman Coulter公司生產(chǎn))，倒置相差顯微鏡(美國(guó)Olympus公司生產(chǎn))，GDS－8000圖像采集分析系統(tǒng)(美國(guó)UVP公司提供)。

1．3．2 iIEL分離方案 嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物iIEL的分離方法最早建立于1981年［6］。國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者對(duì)分離方法進(jìn)行了改進(jìn):梯度密度離心、篩網(wǎng)或尼龍毛過濾［7］;分離過程中大部分使用了DTT與EDTA等螯合劑作為消化液以及用冷生理鹽水(4℃)沖洗管腔［8］;低溫下靜置的時(shí)間、搖床振蕩的力度和2層Percoll界面間的細(xì)胞層是否吸取完全是影響小鼠iIEL分離收獲率的主要因素，此外分離過程中的人為因素(熟練程度)也影響iIEL的獲得量［9］。本實(shí)驗(yàn)采用2009年Binda等改良的分離小鼠iIEL方法［10］，并由專人操作以減少誤差。具體步驟如下。

第一，Percoll工作液的配制:Percoll原液與10×PBS溶液按體積比9∶1混合，制成100%等滲Percoll。100%等滲Percoll與1×PBS溶液按體積比7∶3和4∶6混合，制成70%等滲Percoll溶液和40%等滲Percoll溶液。

第二，iIEL的制備:頸椎脫臼法處死小鼠，剖開腹腔，小心取出小腸置于預(yù)先制冷的含5%FCS的RPMI 1640培養(yǎng)液中。在冷生理鹽水中沖洗，去除腸系膜和集合淋巴小結(jié)。縱向剪開小腸，再用冷生理鹽水沖洗至腸內(nèi)外壁均無殘留物。將小腸剪成5 mm大小的碎片，移入50 mL離心管中靜置沉淀，吸去上清液。加入30 mL消化液(在無Ca2+、Mg2+的Hank’s溶液中加入2 mmol/L DTT與5 mmol/L EDTA)，置入恒溫振蕩水浴箱中，37 ℃，150 r/min，振蕩30 min，收集上清，重復(fù)2次。上清液通過200目尼龍網(wǎng)篩過濾后，4℃離心(400 g)10 min收集細(xì)胞，將細(xì)胞沉淀用預(yù)先配置的40%Percoll溶液3 mL重懸。

第三，iIEL的純化:取70%Percoll 4 mL鋪于15 mL離心管底部，再將上述3 mL的細(xì)胞懸液輕輕加于4 mL 70%Percoll溶液上，2層液體間可見形成清晰的分界面。4℃ 400 g離心30 min，小心吸取在2層分離液之間的細(xì)胞，用5倍以上體積的RPMI 1640培養(yǎng)液洗2遍、重懸，將所獲得的細(xì)胞用倒置顯微鏡計(jì)數(shù)。

1．3．3 流式檢測(cè)腸上皮內(nèi)γδT細(xì)胞 100萬個(gè)細(xì)胞加入1μL的FITC標(biāo)記的抗小鼠γδTCR和PE標(biāo)記的抗小鼠CD3抗體，避光室溫下孵育30 min，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)iIEL中的CD3+iγδT細(xì)胞的百分比。收集1萬個(gè)細(xì)胞用于數(shù)據(jù)分析，采用同型抗體作為陰性對(duì)照。熒光激發(fā)光波長(zhǎng)為488 nm，PE及FITC熒光濾光片波長(zhǎng)分別為575 nm和525 nm，分析系統(tǒng)軟件為SystemⅡ。

1．4 數(shù)據(jù)分析 所有數(shù)據(jù)以“均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，逃避潛伏期采用重復(fù)測(cè)量方差分析，其他指標(biāo)采用單因素方差分析處理。所有數(shù)據(jù)處理由SPSS 17．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件完成，其中P＜0．05表示具有顯著性差異。

2 研究結(jié)果

2．1 CFS建模及低氧干預(yù)過程中各組小鼠體重變化

表3顯示，CFS建模第1周C0組和CFS0組小鼠體重不存在顯著性差異，CFS 建模第2、3、4、5 周，CFS0組小鼠體重明顯低于C0組(P＜0．05)。

表3 CFS建模過程中小鼠體重的變化Table 3 CFSMice Weight Change during Chronic Restraint and Forced Swimming

2．2 CFS建模過程中行為學(xué)指標(biāo)變化

2．2．1 CFS建模過程中小鼠潛伏期的變化 圖1顯示，CFS建模第5周C0組和CFS0組小鼠逃避潛伏期的變化，重復(fù)測(cè)量方差分析顯示，C0組與CFS0組小鼠逃避潛伏期存在顯著性差異(P＜0．05)，單因素方差分析顯示，在水迷宮測(cè)試第4天C0組潛伏期明顯比CFS0組短(P ＜0．05)。

圖1 CFS建模小鼠逃避潛伏期的變化Figure 1．The Escape Latency of CFSMice in Morris Water Maze

2．2．2 CFS建模過程中小鼠空間搜索能力的差異圖2顯示，CFS建模第5周末CFS0組小鼠停留在平臺(tái)所在象限時(shí)間明顯低于C0組(P＜0．05)。

圖2 CFS建模小鼠停留在平臺(tái)所在象限的時(shí)間差異Figure 2．The Time Spending in the Target Quadrant of CFSMice

2．3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)γδT細(xì)胞在CD3+iIEL細(xì)胞中的百分比 圖3顯示，CFS建模第5周末CFS0組小鼠γδT細(xì)胞在 CD3+iIEL細(xì)胞中的百分比明顯低于C0組。

圖3 CFS建模時(shí)各組小鼠CD3+γδT細(xì)胞在iIEL細(xì)胞中所占的百分比Figure 3． Percentage of CD3+γδT Cells in Intestinal Intraepithelial Lymphocytes of CFSMice

CFS建模成功并進(jìn)行為期1周的低氧干預(yù)后發(fā)現(xiàn):與 C組相比，CFS組和18%H組的 γδT細(xì)胞在CD3+iIEL細(xì)胞中所占的百分比顯著下降;15%H組的γδT細(xì)胞在CD3+iIEL細(xì)胞中所占的百分比與對(duì)照組無差異;15%H組γδT細(xì)胞在CD3+iIEL細(xì)胞中所占的百分比顯著高于CFS組和18%H組(圖4)。

3 討論

圖4 干預(yù)后各組小鼠CD3+γδT細(xì)胞在iIEL細(xì)胞中所占的百分比Figure 4． Percentage of CD3+γδT Cells in Intestinal Intraepithelial Lymphocytes of CFSMice after Hypoxia Intervention

Michael Maes提出CFS的發(fā)生是生理和心理因素綜合作用的結(jié)果，他認(rèn)為:持續(xù)性的心理和生理(如劇烈運(yùn)動(dòng)等)應(yīng)激易造成機(jī)體免疫及氧化－抗氧化平衡紊亂;當(dāng)反復(fù)遭受外界病毒和細(xì)菌感染時(shí)，進(jìn)一步惡化機(jī)體免疫，導(dǎo)致氧化抗氧化失衡狀態(tài)，誘發(fā)CFS，出現(xiàn)疲勞、肌肉疼痛及行為認(rèn)知功能惡化等癥狀［11］。

鑒于CFS患者主要病癥，以生理、心理為切入點(diǎn)可能更加符合CFS的發(fā)病機(jī)制。目前關(guān)于CFS動(dòng)物模型建立尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn):多數(shù)研究［12－15］采用注射脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)、布魯氏桿菌 (Brucella abortus，BA)及多聚肌胞甘酸(poly I:C)等造成動(dòng)物機(jī)體免疫紊亂進(jìn)而誘發(fā)慢性疲勞綜合征;也有部分研究［16－20］采用強(qiáng)迫游泳或跑步等運(yùn)動(dòng)形式建立慢性疲勞綜合征動(dòng)物模型，但建模時(shí)間各不相同。此類CFS動(dòng)物模型往往偏重于CFS患者病癥的復(fù)制，忽略了生理、心理應(yīng)激在CFS發(fā)生中的作用?；诖耍狙芯扛鶕?jù)CFS發(fā)病的生理、心理學(xué)理論模式，采用束縛及強(qiáng)迫游泳方式建立CFS小鼠模型。

3．1 CFS建模效果 臨床對(duì)于CFS尚無特異性的診斷標(biāo)準(zhǔn)，相關(guān)研究多采用動(dòng)物行為學(xué)相關(guān)指標(biāo)判斷CFS建模效果，目前最為常用的是水迷宮測(cè)試。Morris水迷宮測(cè)試是英國(guó)心理學(xué)家Morris于20世紀(jì)80年代初設(shè)計(jì)并應(yīng)用于大腦學(xué)習(xí)記憶機(jī)制研究的一種實(shí)驗(yàn)手段，此方法已得到廣泛認(rèn)可，并被大多數(shù)學(xué)者運(yùn)用于從事動(dòng)物空間學(xué)習(xí)記憶能力的相關(guān)研究。水迷宮測(cè)試主要包括隱藏平臺(tái)獲得實(shí)驗(yàn)和移開平臺(tái)空間搜索實(shí)驗(yàn)，其中前者主要通過逃避潛伏期的變化反映小鼠的學(xué)習(xí)能力，而后者主要通過穿越平臺(tái)所在象限的次數(shù)和停留在平臺(tái)所在象限的時(shí)間反映小鼠的記憶力水平。

研究證實(shí)，CFS建模動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力下降［21］，與CFS患者注意力和記憶力減退癥狀相符，提示可通過學(xué)習(xí)記憶能力評(píng)定、判斷CFS建模效果。本研究結(jié)果顯示:采用束縛和強(qiáng)迫游泳的方式成功建立以空間學(xué)習(xí)記憶能力減退為主要特征的CFS小鼠模型。

3．2 腸道γδT細(xì)胞免疫機(jī)能腸上皮間淋巴細(xì)胞(intestinal intraepithelial lymphocytes，iIEL)是腸道黏膜免疫屏障的主要組成部分，其數(shù)量極其龐大，每只鼠可達(dá)5×106～7×106個(gè)，主要位于腸道基底膜的腸腔面且在腸道的不同部位iIEL數(shù)量不相同(空腸最多，回腸次之，結(jié)腸較少)。iIEL受刺激后可分泌多種細(xì)胞因子，進(jìn)而參與維持正常的腸道黏膜免疫功能，其作為一種特殊的淋巴細(xì)胞群體，長(zhǎng)期與腸道菌群、病原體等接觸，在調(diào)節(jié)腸道黏膜抗感染免疫、維持腸道上皮細(xì)胞完整性和對(duì)食物等外來抗原的免疫耐受中發(fā)揮重要作用［22］。

iIEL由多個(gè)T細(xì)胞亞群組成，其中以γδT細(xì)胞所占的比例最大，可達(dá)30%～50%［22］。γδT細(xì)胞是適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的重要成員T細(xì)胞的一大亞類，由于其表面的TCR是由γ和δ鏈組成而命名。相對(duì)于αβT細(xì)胞而言，γδT細(xì)胞有許多特殊的天然免疫系統(tǒng)特性:γδTCR具有高度多樣性，不具M(jìn)HC限制性和不依賴抗原的處理和呈遞過程，表明γδT細(xì)胞在抗感染中起第一線的防御作用［23］。早在1999年，Matrumoto等用轉(zhuǎn)基因鼠研究證明，TCRγδIEL通過合成分泌IFN－γ促進(jìn)腸上皮細(xì)胞的分化、增殖和MHCⅡ類分子的表達(dá)［24］。此外，γδT細(xì)胞作為一種特殊的淋巴細(xì)胞群體，通過其活化后合成分泌的細(xì)胞因子及細(xì)胞毒活性在黏膜局部的抗感染免疫，維護(hù)上皮細(xì)胞的完整性及調(diào)節(jié)對(duì)外來抗原的免疫應(yīng)答等方面起重要作用［24］，被稱作固有免疫與適應(yīng)性免疫的橋梁細(xì)胞［25］。近年來，對(duì)γδT細(xì)胞的深入研究進(jìn)一步表明了其能調(diào)控免疫反應(yīng)具有毒殺多種癌細(xì)胞與被病毒感染的細(xì)胞的能力，但其對(duì)抗原的識(shí)別與αβT細(xì)胞并不相似。在歷經(jīng)長(zhǎng)期進(jìn)化后，相比αβT細(xì)胞，γδT細(xì)胞以更廣泛、快速和直接的方式對(duì)體內(nèi)應(yīng)激事件做出應(yīng)答［26］。

3．3 CFS建模小鼠腸上皮內(nèi)γδT細(xì)胞的變化 大量研究表明，CFS可能存在免疫功能異常，包括慢性免疫激活、免疫細(xì)胞對(duì)多克隆刺激的反應(yīng)性降低、慢性炎癥和細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)紊亂等［27］。此外，還有研究認(rèn)為，CFS患者免疫功能的異?？赡苡赡c道菌群紊亂引起，腸道菌群改變可能與CFS患者的認(rèn)知及情緒狀態(tài)、特別是焦慮有一定關(guān)系［28］。有研究報(bào)道，補(bǔ)充含有益生菌的制劑能減輕CFS患者的壓力和疲憊［29］，甚至能改善神經(jīng)認(rèn)知功能［30］。同樣，一項(xiàng)隨機(jī)選取39名CFS患者雙盲的研究通過糞便樣本檢測(cè)和貝克焦慮量表發(fā)現(xiàn):服用干酪乳桿菌促進(jìn)患者的腸道菌群和黏膜免疫功能平衡，并緩減CFS焦慮癥狀［31］。腸道菌群改變、黏膜屏障失調(diào)和小腸免疫異?？赡苁荂FS的發(fā)病機(jī)制之一。本研究發(fā)現(xiàn)，CFS建模小鼠腸上皮間γδT細(xì)胞數(shù)量所占iIEL的百分比下降，提示CFS小鼠可能對(duì)體內(nèi)應(yīng)激事件做出應(yīng)答的速度有所減弱，機(jī)體動(dòng)員、發(fā)揮免疫監(jiān)視的作用有所下降。當(dāng)反復(fù)遭受外界病毒和細(xì)菌感染時(shí)，進(jìn)一步惡化機(jī)體免疫機(jī)能，導(dǎo)致 CFS的發(fā)生。

3．4 不同低氧濃度對(duì)CFS建模小鼠的影響 采取措施改善CFS小鼠腸上皮間γδT細(xì)胞的表達(dá)量，無疑有利于調(diào)節(jié)腸道菌群平衡從而維持正常的腸道黏膜免疫功能。近年來，“低氧與健康”的議題引起了國(guó)際生物醫(yī)學(xué)界的研究興趣［32－34］。低氧暴露作為一種生理性刺激，其對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)主要取決低氧刺激的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間，急性低氧暴露或持續(xù)性的低氧暴露易于引起機(jī)體損傷，中等濃度且時(shí)間相對(duì)較短的低氧暴露往往對(duì)機(jī)體具有保護(hù)作用。適宜的低氧暴露可能對(duì)CFS患者腸道免疫的改善具有一定的積極意義，但至今尚無相關(guān)報(bào)道。此外，如何把控適宜的低氧暴露時(shí)間和濃度，尤其是對(duì)CFS患者，這可能更是解決相關(guān)問題的關(guān)鍵?；诖?，本研究在觀察CFS小鼠腸道γδT細(xì)胞表達(dá)量下降的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討不同濃度低氧暴露對(duì)CFS小鼠腸道上皮內(nèi)γδT細(xì)胞的影響，為進(jìn)一步研究低氧應(yīng)用于治療CFS患者提供一定的實(shí)驗(yàn)支撐。

如何選擇適宜的低氧暴露時(shí)間及低氧刺激強(qiáng)度是本研究的重點(diǎn)。當(dāng)機(jī)體處于海拔5 100 m以上高度時(shí)，空氣氧濃度約為12%，機(jī)體動(dòng)脈血氧飽和度約為75%左右，而正常動(dòng)脈血氧飽和度為93%～98%，低于94%可認(rèn)為機(jī)體處于缺氧狀態(tài)，低于70%可危及生命。對(duì)于CFS患者的治療，低氧濃度可能高于12%更為合適。本研究選擇15%和18%氧濃度為干預(yù)措施，探討不同濃度低氧暴露1 h對(duì)CFS建模小鼠腸道上皮內(nèi)γδT細(xì)胞的影響。研究發(fā)現(xiàn)，15%H組γδT細(xì)胞在CD3+iIEL細(xì)胞中所占的百分比顯著高于CFS組和18%H組，15%H組γδT細(xì)胞在CD3+iIEL細(xì)胞中所占的百分比和C組無明顯差異，18%H組與CFS組γδT細(xì)胞在CD3+iIEL細(xì)胞中所占的百分比無差異。

該研究結(jié)果表明:采用18%低氧干預(yù)不能緩減CFS小鼠腸道黏膜免疫細(xì)胞的改變，15%低氧干預(yù)有利于改善CFS小鼠腸道黏膜γδT細(xì)胞的抑制狀況。其機(jī)制可能是:在適宜的間歇性低氧暴露刺激下，低氧誘導(dǎo)因子－1α(HIF-1α)合成增加，HIF-1α 不僅參與了機(jī)體的低氧耐受，而且它是維持細(xì)胞氧平衡和低氧反應(yīng)基因表達(dá)的一個(gè)中心調(diào)節(jié)因子。HIF-1α蛋白活性適度地增加，調(diào)節(jié)許多靶基因及產(chǎn)物的表達(dá)以適應(yīng)低氧，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子等表達(dá)增加，可能有助于改善腸黏膜微循環(huán)，提高腸道免疫功能。HIF-1α蛋白亦可通過多種途徑導(dǎo)致機(jī)體代謝降低、組織耐低氧能力提高等［35］。這些微環(huán)境的改變有利于機(jī)體的內(nèi)源性保護(hù)。

4 小結(jié)

CFS建模小鼠腸上皮內(nèi)γδT細(xì)胞數(shù)量占iIEL的百分比下降可能導(dǎo)致機(jī)體對(duì)應(yīng)激事件做出應(yīng)答的速度有所減弱，機(jī)體動(dòng)員、發(fā)揮免疫監(jiān)視的作用有所下降;而每天1 h 15%低氧干預(yù)可有效提高CFS小鼠腸上皮內(nèi)γδT細(xì)胞的表達(dá)，有利于改善CFS小鼠腸道黏膜免疫機(jī)能。這為今后CFS患者的治療提供新思路。

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