日糧中添加生物絮團對鯽魚幼魚生長與肝臟抗氧化指標影響

邱立疆，郁二蒙，吉 紅,3*，謝 駿*，王廣軍，夏 耘

(1.西北農(nóng)林科技大學 動物科技學院，陜西 楊凌 712100；2. 中國水產(chǎn)科學研究院 珠江水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部熱帶亞熱帶水產(chǎn)資源利用與養(yǎng)殖重點實驗室， 廣東 廣州 510380；3. 西北農(nóng)林科技大學 安康水產(chǎn)試驗示范站，陜西 安康 725021)

生物絮團(Biofloc)是養(yǎng)殖水體中以異養(yǎng)微生物為主,經(jīng)生物絮凝作用結合水體中有機質(zhì)、原生動物、藻類、絲狀菌等形成的絮狀物[1]。作為新興的技術-生物絮團技術，生物絮團是其絮凝所得的副產(chǎn)品，含粗蛋白20%以上，粗纖維低于18%[2-5]，是一種非常規(guī)、價格低廉的蛋白飼料源。研究表明，生物絮團較益生菌可更好地促進南美白對蝦的生長[6]。用15N同位素標記生物絮團，發(fā)現(xiàn)南美白對蝦只能利用生物絮團總量的3%[7]，過量的絮團抑制水生動物的生長[8]。用生物絮團飼養(yǎng)羅非魚，濃度為DM∶14 mg/cm3的生物絮團最有利于羅非魚的生長[8-9]。也有學者用羅非魚養(yǎng)殖池塘中形成的絮團替代飼料原料中的魚粉或豆粕，發(fā)現(xiàn)一定水平(DM∶7.8%與15.6%)的替代可提高羅非魚的體重[10]。但在已有生物絮團替代餌料或者飼料原料的研究中，生物絮團作為蛋白原料在水產(chǎn)飼料中的最適添加量仍未明確。

項目已完成石坎坡改梯34.58hm2、沉沙凼50m3、排洪溝3879m、水土保持林 1011.96hm2、封禁治理 300hm2、農(nóng)村飲水900戶、田間道路94 446 m、機耕道 48 500 m、蓄水池 4 166.84 m3、渠道12 231 m、經(jīng)濟果木林796.90 hm2和沼氣池927座等。完成治理水土流失面積30.25 km2，為計劃數(shù)的79%。

為研究生物絮團的最佳使用水平，提高其菌體蛋白的利用率，本研究在鯽魚苗種基礎飼料中添加不同水平的生物絮團，研究生物絮團的添加對鯽魚生長性能、體成分及健康狀況的影響，為生物絮團技術背景下飼料資源合理利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗所用生物絮團(CP29.39%，EE2.32%)為本實驗室培養(yǎng)，魚粉(CP53.50%,EE10.70%)及其它飼料原料均購自于珠江水產(chǎn)研究所飼料廠，飼料各原料均粉碎過 80 目篩。

1.2 試驗魚及飼養(yǎng)管理

試驗鯽魚(Carassius cuvieri)來自大宗淡水魚類產(chǎn)業(yè)技術體系華南區(qū)南沙實驗基地；挑選規(guī)格一致的鯽魚放于水族箱(2401)中暫養(yǎng)兩周，同時飼喂含粗蛋白30%的商品飼料。預試驗結束后，挑選體重(3.24±0.27) g，體長(4.52±0.51) cm的健康鯽魚300尾，飼養(yǎng)于水族箱中，每缸25尾魚，飼養(yǎng)周期為8周。

1.3 試驗飼料

(終末魚體重量+死亡魚體重量-初始魚體重量)/初始魚體重量×100

各原料按比例混勻后用飼料制條機(F-26型雙螺桿擠條機)壓制成直徑 1.5 mm飼料條，然后用制粒機(G-500型造粒機)制成長3 mm的顆粒，制成的飼料晾干后放于冰箱冷藏保存，隨用隨?。辉囼烇暳吓浞郊盃I養(yǎng)成分見表1。

1.4 樣品采集與分析

表1 試驗飼料配方及營養(yǎng)成分組成(干物質(zhì)，%)Table 1 Formulations and proximate compositions(DM,%)

注：①微生物預混料(mg·kg-1):維生素A 300 IU,維生素D3400 IU,維生素E 3 mg，維生素K32.5 mg,維生素B10.25 mg，維生素B20.25 mg，維生素B60.25 mg，維生素B120.096 mg，泛酸鈣 1.2 mg，煙酰胺 0.7 mg，葉酸 0.032 mg，生物素 0.05 mg，肌醇 5 mg，維生素C-酯 8 mg，維生素混合物載體為玉米蛋白粉；②礦物預混料(mg·kg-1):鐵 280 mg,銅1.92 mg,鋅 64 mg,錳 92 mg,鈷 0.8 mg,碘 0.8 mg,硒 0.16 mg。無機鹽混合物載體為沸石粉。

Notes:①Vitamin premix(mg·kg-1):vitamin A 300 IU,vitamin D3400 IU,vitamin E 3 mg,vitamin K32.5 mg,vitamin B10.25 mg,vitamin B20.25,vitamin B60.25 mg,vitamin B120.096 mg,Calcium pantothenate 1.20 mg,Nicotinic acid 0.7 mg,floc acid 0.032 mg,biotin 0.05 mg,inositol 5.00 mg,ascorby1-2-monophosphate 8 mg,corn gluten meal was used as a carrier;②Mineral premix(mg·kg-1)：Fe 280 mg,Cu 1.92 mg,Zn 64 mg,Mn 92 mg,Co 0.8 mg,I 0.8 mg,Se 0.16 mg，zeolite powder was used as a carrier.

特定生長率(specific growth rate,SGR,%/d)=(ln終末魚體重量-ln初始魚體重量) ×100/飼養(yǎng)天數(shù)

成活率(survival ratio,SR,%)=

(終末魚數(shù)量/開始魚數(shù)量)×100

從不同水平生物絮團添加對鯽魚生長(見表2)和生物學性狀(見表3)影響結果發(fā)現(xiàn)，隨著生物絮團添加量的增加，4個處理組間的成活率沒有顯著差異(P>0.05)；鯽魚的末均重、增重率、特定生長率都是呈先升高后下降的變化趨勢，且Ⅱ組的末均重，增重率，特定生長率顯著高于其它組(P<0.05)；末均重Ⅲ組與Ⅳ組沒有顯著差異(P>0.05)，但是顯著低于Ⅰ組(P<0.05)；增重率Ⅳ組顯著低于其它各組(P<0.05)，Ⅲ組顯著低于Ⅰ組和Ⅱ組(P<0.05)。Ⅱ組飼料系數(shù)顯著低于其它各組(P<0.05)，Ⅲ組與Ⅳ組沒有顯著差異(P>0.05)，但都顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。絮團不同水平添加對鯽魚生物學性狀的脂肪指數(shù)、腸指數(shù)和脾臟指數(shù)均沒有顯著影響(P>0.05)；而Ⅱ組肝指數(shù)則顯著低于其它各組，Ⅲ組與Ⅳ則沒有顯著差異(P>0.05)，但是它們都顯著高于Ⅰ組(P<0.05)；Ⅱ組肥滿度顯著高于其余各組(P<0.05)。

配方參考解綬啟鯽魚飼養(yǎng)試驗飼料配方[11]。試驗所用生物絮團是在室內(nèi)水泥池中，對草魚飼以粗蛋白30%某商品飼料，外加碳源(葡萄糖)調(diào)節(jié)碳氮比為20∶1，24 h不斷充氧的條件下培養(yǎng)而成；當絮團總固體懸浮物濃度為200 mg/L時，用200目篩絹網(wǎng)收集并風干；生物絮團的營養(yǎng)成分(干物質(zhì))：粗蛋白(29.39±0.42)%，脂肪(2.32±0.07)%，粗纖維(1.22±0.03)%，無氮浸出物(38.60±0.46)%，灰分(17.80±0.32)%，水分(11.50±0.35)%，飼料各原料均粉碎過 80 目篩。

樣品采集前試驗魚饑餓24 h；每尾試驗魚測量體重、全長及體長，每缸隨機取15尾魚用MS-222麻醉，另隨機取 3 尾魚采用組織搗碎機進行勻漿作為全魚樣本，其它魚解剖測量腸長、稱空殼重、肝胰臟重、脾臟重及腸重；取肝胰臟組織迅速置液氮中保存，隨后轉至-20 ℃冰箱保存待用。采用以下公式計算鯽魚生長性能和生物學性狀：

肝胰臟指數(shù)(hepatosomatic index，HIS,%)=肝胰臟重/體重量×100

飼料系數(shù)(feeding conversion ratio，F(xiàn)CR,%)=投飼總量/(終末魚體重量+死亡魚體重量-初始魚體重量)

腸指數(shù)(intestine index，%)=腸重/體重量×100

肥滿度(condition factor ,CF,g/cm3)=全魚重量/體長3×100

1.3.3 相關知識掌握度評估 采用本院自制的量表進行評估，滿分100分，包括熱量換算、飲食搭配、禁止食用等，掌握度高：評分在92分以上；掌握度一般：評分在70～92分之間；未掌握度：評分在70分以下。

1.2.4 妊娠結局隨訪 打電話對所有孕婦妊娠結局追蹤隨訪或查閱本院電子病歷，包括孕期超聲篩查結果、妊娠結局、新生兒體檢的外貌、結構、智力發(fā)育等。

原文：But he never said a word to Amelia that was not kind and gentler;or thought of a want of hers that he did not try to gratify.譯文一：可是他對愛米麗亞總是溫柔體貼，千依百順。

脾臟指數(shù)(spleen index， %)=脾臟重/全魚重×100

脂肪指數(shù)(fat index， %)=腹腔脂肪重/全魚重×100

焦慮癥是比較多見的精神科疾病,每年該疾病發(fā)病率都在增加,人們的正常生活、學習和工作受到了極大的影響,導致生存質(zhì)量下降[3-6]。目前臨床中采取的藥物和心理治療方式是主要的方法,可是治療效果不是十分理想,因為焦慮癥患者的病情比較復雜,發(fā)病機制還不清楚,單一模式治療的難度比較大[3]。

干物質(zhì)測定采用恒溫干燥法(105 ℃)；蛋白質(zhì)采用凱氏定氮法測定；脂肪采用索氏抽提法測定；灰分測定采用馬福爐灼燒法(550 ℃)；肝臟組織抗氧化指標采用南京建成生物工程研究中心生產(chǎn)的試劑盒測定。

1.5 數(shù)據(jù)分析

試驗結果用“平均值±標準差”(mean±SD)表示。數(shù)據(jù)用SPSS18.0軟件中的獨立樣本單因素Duncan's方法進行多重比較，以P<0.05 為顯著差異水平，P<0.01為極顯著差異水平。

2 結果與分析

2.1 生物絮團添加對鯽魚生長的影響

增重率(weight gaining rate,WGR,%)=

表2 不同水平生物絮團添加對鯽魚生長影響Table 2 Effects of different levels of biofloc addition on growth performance of Carassius cuvieri

注：同行肩標不同小字字母表示差異顯著(P<0.05)。下同。

Note:Values with different lowercase superscripts in the same column show significant difference(P<0.05).The same below.

表3 不同水平生物絮團添加對鯽魚生物學性狀的影響Table 3 Effects of different levels of biofloc addition on biological parameters of Carassius cuvieri

2.2 生物絮團添加對鯽魚常規(guī)成分的影響

不同水平絮團添加對鯽魚全魚、肌肉和肝胰臟的常規(guī)成分的影響結果見表4。由表4可知，各試驗組全魚和肝胰臟水分含量沒有顯著差異(P>0.05)，Ⅱ組肌肉水分顯著高于其它組(P<0.05)，Ⅰ組和Ⅲ組沒有顯著差異(P>0.05)，但顯著高于Ⅳ組(P<0.05)；對照組Ⅰ全魚和肝胰臟粗脂肪顯著高于其它組(P<0.05)，而各處理組沒有顯著差異(P>0.05)，肌肉中粗脂肪沒有顯著差異(P>0.05)；全魚粗蛋白各處理組顯著低于對照組Ⅰ(P<0.05)，Ⅱ組和Ⅲ組沒有顯著差異(P>0.05)，但顯著高于Ⅳ組(P<0.05)；肌肉中粗蛋白隨著絮團添加量的增加，各處理組呈顯著上升趨勢(P<0.05)，且均顯著高于對照組(P<0.05)；肝胰臟粗蛋白Ⅱ組顯著高于其它試驗組組(P<0.05)。各處理組全魚，肝胰臟灰分顯著高于對照組(P<0.05)，而肌肉中灰分則沒有顯著差異(P>0.05)。

表4 不同水平生物絮團添加對鯽魚體成分的影響Table 4 Effects of different levels of biofloc addition on body composition of Carassius cuvieri %

2.3 生物絮團添加對鯽魚肝臟抗氧化指標的影響

鯽魚肝胰臟組織抗氧化指標(見表5)，T-SOD，GST， CAT隨絮團添加量的上升，均處于先上升后下降趨勢，且Ⅱ組均顯著高于其它組(P<0.05)，各處理組均顯著高于對照組(P<0.05)；肝臟中MDA含量Ⅱ組顯著低于其余試驗組，而其余試驗組之間則沒有顯著差異(P>0.05)。

工程勘察中經(jīng)常出現(xiàn)不按照規(guī)定進行勘察，例如角點處出現(xiàn)過大的孔間距，達不到規(guī)定的孔深與孔距。在工程勘察流程中，因為對試驗取樣環(huán)境不夠了解，導致勘探過程中出現(xiàn)突發(fā)狀況。部分技術人員是在不考慮場地實際情況和土壤條件的情況下根據(jù)最低限度試驗抽樣，沒有對取樣、測試的均勻性與有效性進行全面考慮。

表5 不同水平生物絮團添加對鯽魚肝臟抗氧化指標的影響Table 5 Effects of different levels of biofloc addition on antioxidant index in hepatopancrease of Carassius cuvieri

3 討 論

3.1 生物絮團添加對鯽魚生長的影響

生物絮團作為蛋白源添加到飼料中的研究相對于其它蛋白源(棉粕，豆粕，菜粕，肉骨粉、羽毛粉等)較少，目前餌料替代研究主要集中在羅非魚、對蝦和鳙魚等[12-14]養(yǎng)殖中。本試驗結果顯示，當生物絮團添加量為10%時，鯽魚生長效果顯著優(yōu)于其它試驗組(P<0.05)，肥滿度也顯著高于其它各組(P<0.05)，而當絮團添加量上升時，鯽魚的生長受到抑制。有研究用生物絮團直接飼喂鳙，發(fā)現(xiàn)生物絮團對鳙的末均重，增重率，特定生長率，肥滿度顯著高于配合飼料組(P<0.05)[14]。將越冬羅非魚苗種放入生物絮團池，羅非魚的肥滿度顯著高于對照組(P<0.05)[15]。本研究中,10%添加組的肝指數(shù)顯著低于對照組和其它試驗組(P<0.05)，說明絮團的添加對鯽魚肝臟代謝有顯著影響(P<0.05)。用不同水平絮團替代蝦料中的魚粉和豆粕，處理組蝦的增重率和特定生長率顯著高于對照組(P<0.05)[10]，這與本試驗的結果一致。目前關于生物絮團促進水產(chǎn)動物生長的具體原因還不清楚，有研究者稱可能是生物絮團是菌類蛋白，其氨基酸組成有利于水生動物的吸收；生物絮團含有益生菌是促進生長的另一個原因[10,16-17]。研究發(fā)現(xiàn)生物絮團對鯽魚的脂肪指數(shù)、腸指數(shù)、脾臟指數(shù)沒有顯著影響，說明生物絮團的添加不會對鯽魚的生物學性狀(肥滿度和肝指數(shù)除外)產(chǎn)生顯著影響(P<0.05)。

3.2 生物絮團添加對鯽魚常規(guī)體成分的影響

常規(guī)成分含量是衡量飼料原料的利用率的一個重要因子，可為評價飼料原料優(yōu)劣提供參考。本試驗條件下的結果顯示，鯽魚全魚和肝臟的水分、肌肉中的粗脂肪及灰分均不會隨著絮團添加水平的升高而變化；而全魚中粗蛋白、脂肪顯著低于對照組(P<0.05)；灰分、肌肉中粗蛋白和肝臟中粗蛋白及灰分則顯著高于對照組(P<0.05)。研究用羽毛粉替代鯽魚飼料中魚粉，全魚中的水分也不受添加水平的影響，但處理組全魚粗蛋白顯著高于對照組(P<0.05)，這可能是因為羽毛粉含有較高的粗蛋白(CP∶70.91%)所致[18]。絮團組肌肉中粗蛋白顯著高于對照組(P<0.05)，說明生物絮團添加有利于蛋白在肌肉中的形成，這是因為生物絮團含有一定量的必需氨基酸(精氨酸2%，蛋氨酸0.5%、賴氨酸2.1%)[17],有利于氨基酸吸收。用水解棉粕替代鯽魚飼料中魚粉，全魚中粗蛋白顯著高于對照組(P<0.05)，而對脂肪含量沒有影響[19]；肝臟中粗蛋白結果顯示，過量添加導致肝組織中的蛋白含量顯著降低(P<0.05)，其原因未知；處理組全魚和肝臟的灰分含量顯著高于對照組(P<0.05)。解綬啟研究不同水平的藻粉(CP∶30.6%)添加對鯽魚全魚灰分含量顯示，發(fā)現(xiàn)處理組顯著高于對照組(P<0.05)，與本文結果一致[20]，猜測這可能與絮團含有較高的灰分有關。

3.3 生物絮團添加對鯽魚肝臟抗氧化指標的影響

生物絮團是一種混合單細胞蛋白原料[21],關于其對抗氧化性的研究尚未見報道，本研究結果顯示：生物絮團添加對肝臟T-SOD，GST、 CAT和MDA有顯著影響，添加10%時，其抗氧化性能得到提高，而過量添加抗氧化性能則受到抑制。此效果可能與生物絮團含有益生菌-芽孢桿菌[22]有關。在水體施用或者飼料中添加芽孢桿菌與對照組相比，處理組草魚肝臟總抗氧化力(T-AOC) 顯著升高(P<0.01), 而肝臟中丙二醛(MDA)含量顯著下降(P<0.01)[23-24]， 這與本文的研究結果一致。

1.1 對象 2011年10月選擇上海市長寧區(qū)6所2級醫(yī)院，按主管護師:護師:護士為1∶4∶5比例采用分層抽樣法中抽取護理人員200名。納入標準:具有國家規(guī)定的護士執(zhí)業(yè)證書;在臨床護理中能接觸到靜脈治療。200名護理人員中，職稱:主管護師21名，護師79名，護士100名;學歷:中專54名，大專115名，本科及以上31名。護齡:0～4年92名，5～9年36名，10～14年27名，15～19年14名 ，20年以上31名。

4 結 論

適量的生物絮團添加可以促進鯽魚生長，提高肝臟抗氧化性能，而過量添加則會抑制鯽魚生長和導致鯽魚肝臟受到應激脅迫。本研究結果顯示，生物絮團在鯽魚飼料中的添加量應該在10%左右。

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