干細(xì)胞制品臨床前藥效學(xué)及安全評價研究概況

汪巨峰，霍艷，王慶利，王佑春

Back 等[1]1968年報道骨髓移植治療濕疹血小板減少伴免疫缺陷癥以來，細(xì)胞制品作為一種很有價值的資源一直用于治療多種疾病。由于干細(xì)胞具備自身更新和分化的能力，其衍變而來的臨床用生物制品可能具有與其本身不同的生物學(xué)特征，故干細(xì)胞制品是一種不同于基礎(chǔ)細(xì)胞的生物制品。目前，對此類干細(xì)胞制品的生物學(xué)特性及臨床應(yīng)用價值仍處于研究探索階段，但對不同類別的干細(xì)胞制品的研究探索程度不同，例如，間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem/stromal cells，MSCs）/基質(zhì)干細(xì)胞、造血干細(xì)胞等已有大量臨床前研究和臨床使用的報道[2-4]，而人胚胎干細(xì)胞（human embryonic stem cells，hESCs）或誘導(dǎo)性多功能干細(xì)胞（induced pluripent stem cells，iPSCs）目前還缺乏足夠的臨床前資料，尚未進(jìn)入臨床使用。雖然許多臨床觀察結(jié)果令人鼓舞，而且新的治療領(lǐng)域不斷擴(kuò)展，但干細(xì)胞的臨床應(yīng)用仍存在一定的安全風(fēng)險。本文結(jié)合近年來干細(xì)胞的臨床前研究，對干細(xì)胞制品的治療效果和安全風(fēng)險等進(jìn)行綜述。

1 干細(xì)胞的定義和類別

干細(xì)胞是一類具有自我更新能力，即形成子代細(xì)胞核多系分化能力的細(xì)胞，同時干細(xì)胞還具有增生的能力，通常可分為胚胎干細(xì)胞、成體干細(xì)胞和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞[5]。

1.1 胚胎干細(xì)胞

胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cells，ESCs）屬多能性細(xì)胞，能分化成機(jī)體的任何一種功能細(xì)胞，可通過其細(xì)胞表面的標(biāo)志物來區(qū)分其特性。在體外系統(tǒng)中可通過外源因子或基因調(diào)節(jié)等方式來調(diào)控其分化，但采用體外方法分化而成的細(xì)胞具有一定的多相性。

1.2 成體干細(xì)胞

成體干細(xì)胞（somatic stem cells）為胎兒或出生后已發(fā)育的組織器官中向特定組織細(xì)胞分化的前體細(xì)胞。又可以分為：①造血干細(xì)胞（hematopoietic stem cells，HSCs）：為組織特異的干細(xì)胞，可分化成所有的血細(xì)胞、骨髓細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等，這類干細(xì)胞在胎盤和臍帶血中的含量與成人骨髓中相近，在成人體內(nèi)造血干細(xì)胞主要存在于骨髓中，在外周血液和肝、脾、肌肉等組織中偶爾有少量存在。②間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）：主要來源于骨髓基質(zhì)和脂肪組織，往往具有特殊的表面抗原表達(dá)和多細(xì)胞系的分化潛力，如可分化為成脂、成骨和軟骨細(xì)胞，而在體外培養(yǎng)條件下亦可分化為肌腱細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、星型膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元。③神經(jīng)干細(xì)胞（neural stem cells，NSCs）等特定組織的前體細(xì)胞：分化能力有限，正常情況下形成單細(xì)胞。如神經(jīng)元、皮膚、肺、肌肉及腸道等細(xì)胞，它們只有有限分化能力，只進(jìn)行正常組織更新和交替活動。

表1 不同干細(xì)胞的特性

1.3 誘導(dǎo)多能干細(xì)胞

誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSCs）是一種由機(jī)體中已分化的細(xì)胞經(jīng)基因重編程所誘導(dǎo)產(chǎn)生的、具有多向分化能力的干細(xì)胞。它具有胚胎干細(xì)胞的許多特征，其細(xì)胞分化能力與所用軀體成年細(xì)胞類別和年齡等有較大的關(guān)系。不同類別干細(xì)胞的生物學(xué)特性歸納總結(jié)于表 1。

2 干細(xì)胞制品目前已開展的臨床研究的范疇

近年來以干細(xì)胞為主的細(xì)胞治療研究發(fā)展迅速，在治療退行性疾病、缺血性心腦血管疾病、骨關(guān)節(jié)疾病、免疫系統(tǒng)疾病及移植物排斥反應(yīng)、肝硬化、糖尿病等領(lǐng)域已啟動了多項臨床試驗研究。主要包括：①心臟?。褐饕切迯?fù)損傷的心肌，目前仍處于早期研究階段。有臨床報道患者用自己的心臟干細(xì)胞和骨髓干細(xì)胞治療后心臟功能有一定的改善，心肌的壞死疤痕開始修復(fù)。另外，骨髓干細(xì)胞、臍帶血干細(xì)胞、脂肪組織的干細(xì)胞等均能促進(jìn)血管增生形成新的血管，有助于缺血心肌的恢復(fù)[2,6-8]。②眼?。簛碓从诮悄さ慕悄ぞ壐杉?xì)胞可通過重組角膜皮層有效地改善角膜病變患者的視力。干細(xì)胞對眼黃斑病變及干性黃斑退變也有一定的作用[9-10]。③糖尿?。耗壳把芯抗ぷ髡咧饕峭ㄟ^使用患者自身的干細(xì)胞分化成胰腺的 β 細(xì)胞，從而分泌胰島素來治療 I 型糖尿病[11]。④神經(jīng)系統(tǒng)：如脊髓損傷、帕金森癥和阿爾茨海默病等，自 2009年 1月 23日美國 FDA 首次批準(zhǔn)使用人胚胎干細(xì)胞對脊椎損傷患者進(jìn)行臨床治療后，已有不少臨床試驗在不同國家展開，而帕金森癥和阿爾茨海默病的臨床有效性有待進(jìn)一步證實[12]。

表2 總結(jié)了近年來美國干細(xì)胞制品的臨床試驗狀態(tài)。結(jié)果表明，目前干細(xì)胞制品主要是在臨床 I 期（即安全性研究）和 II 期（進(jìn)一步安全性和有效性研究）。而試驗所用干細(xì)胞制品大都來源于骨髓、造血系統(tǒng)和間充質(zhì)干細(xì)胞，其治療效果往往難以確定。干細(xì)胞的修復(fù)損傷組織功能在一些實驗條件下不一定發(fā)揮較大的作用，其治療效果有可能是通過非特異性的細(xì)胞營養(yǎng)作用而產(chǎn)生的[3]。

表2 美國干細(xì)胞制品處于臨床試驗不同階段的比例

3 干細(xì)胞制品的藥效學(xué)研究

20 世紀(jì) 50年代首次報道干細(xì)胞用于治療小鼠放射性損傷以來[13]，細(xì)胞制品的多種療效已在臨床前動物模型中得到證實。本文以心血管系統(tǒng)為例重點介紹干細(xì)胞的臨床前藥效學(xué)研究。

3.1 干細(xì)胞制品對缺血性心臟病治療效果的評價

2010年 10月，美國 FDA 正式頒發(fā)了“心臟病細(xì)胞治療的指導(dǎo)原則”（Guidance for Industry：Cellular Therapy for Cardiac Disease）[14]，對臨床前藥效學(xué)的評價作了相關(guān)的規(guī)定，尤其是對動物模型的選擇、干細(xì)胞給藥方式、細(xì)胞數(shù)和時程作了相應(yīng)的介紹。雖然臨床上的藥物治療和冠狀動脈血管再灌已改善心臟病患者的生存率，但對失去功能或死亡的心肌細(xì)胞，卻無法逆轉(zhuǎn)或修復(fù)。目前，干細(xì)胞制品臨床試驗主要是用于心肌缺血的治療，其目的就是通過干細(xì)胞促進(jìn)心肌組織和新血管增生來重塑心肌的生理功能和生物電活性。主要特征為：①通過減少心室的收縮末端容積（end-systolic volume，ESV）來改善左室射血分?jǐn)?shù)，提高心室的生理功能；②間充質(zhì)干細(xì)胞的療效高于其他類別的干細(xì)胞制品；③每次治療干細(xì)胞總數(shù)在 107～108之間效果較為理想；④動物種系對實驗結(jié)果無明顯影響，一般以大動物為主，多數(shù)實驗是用豬來進(jìn)行的；⑤給藥途徑的不同并不影響實驗結(jié)果，如冠脈給藥、心肌注射等給藥方式所獲結(jié)果相似；⑥冠脈左前降枝結(jié)扎引起的心肌梗死和慢性心肌梗死模型是干細(xì)胞治療心臟病的首選動物疾病模型；⑦另外，研究還表明，給藥8 周后在大動物身上干細(xì)胞的療效明顯減弱，并且隨著時間的延長干細(xì)胞制品的治療效果呈減弱趨勢。與對照組相比舒張末壓雖然無明顯變化，但心臟的總體功率得到改善，提示干細(xì)胞加強(qiáng)心肌收縮力。而間充質(zhì)干細(xì)胞的效果明顯優(yōu)于骨髓單核細(xì)胞等，表明 MSCs 可能在體內(nèi)分化成新的心肌細(xì)胞并促進(jìn)原心肌細(xì)胞釋放生長因子等，從而促進(jìn)新的血管生成、減少細(xì)胞凋亡[6,12,15-17]。具體結(jié)果見表 3。

表3 心臟左室射血分?jǐn)?shù)的改善率

3.2 臨床前藥效研究的總體原則

雖然目前干細(xì)胞制品缺乏臨床前藥效學(xué)評價的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，但世界各國基本認(rèn)同下述原則：①選擇接近于人類疾病癥狀的實驗動物模型。②根據(jù)干細(xì)胞的特性和治療病癥的情況，可能需要用多種動物模型才能更好地了解治療效果和安全性。③有些臨床需要的特殊給藥方式在小動物試驗中很難實現(xiàn)。此外，若采用臨床相似用量，小動物亦較難達(dá)到，因此通常情況下首選大動物。④在研究干細(xì)胞制品的排斥性時，應(yīng)考慮使用免疫抑制的動物。⑤為提高干細(xì)胞在機(jī)體內(nèi)的生存時間，往往也會使用免疫抑制劑。但應(yīng)該注意到免疫抑制動物模型有可能會影響實驗結(jié)果，甚至影響動物中、長期的健康和生存率。⑥當(dāng)動物模型不能完全反映人類疾病的病理生理過程時，其他的替代模型和體外實驗應(yīng)重點考慮。⑦若無法找到替代動物模型，應(yīng)考慮制備動物來源的同種干細(xì)胞來進(jìn)行實驗研究。⑧在設(shè)計實驗類別、時段和范圍等時還應(yīng)考慮到干細(xì)胞制品的特性和存活時間。⑨考慮可能的作用機(jī)制、疾病的周期長短和給藥方式等因素。特殊時也要考慮補(bǔ)加一些實驗來證實給藥輸送裝置是否對干細(xì)胞制品有影響[3, 5, 15, 17-19]。

4 干細(xì)胞制品的臨床前安全評價

4.1 干細(xì)胞制品臨床前安全評價要點

通過體外條件大量產(chǎn)生的干細(xì)胞進(jìn)入機(jī)體后可能會變得無效，甚至?xí)a(chǎn)生嚴(yán)重的副作用，如腫瘤、嚴(yán)重的免疫反應(yīng)或形成不需要的組織等。目前，干細(xì)胞治療面臨的主要挑戰(zhàn)是有效性和安全性。干細(xì)胞制品是用于疾病狀態(tài)下的實驗動物或人體，機(jī)體對干細(xì)胞制品的影響可能大于其對機(jī)體的作用。當(dāng)干細(xì)胞輸入機(jī)體后，由于細(xì)胞自身內(nèi)部的不同再加上細(xì)胞所處外部環(huán)境的差異，都有引發(fā)干細(xì)胞變異的可能，從而產(chǎn)生不可預(yù)見的安全風(fēng)險，故對干細(xì)胞制品的安全性應(yīng)給予高度的關(guān)注。另外，由于干細(xì)胞制品在機(jī)體內(nèi)存留時間通常較長，應(yīng)特別注意干細(xì)胞給藥后的存活、移走、狀態(tài)改變甚至代謝等情況。在實驗研究中還要注意干細(xì)胞制品在機(jī)體內(nèi)的生物分布，其能幫助我們了解干細(xì)胞在體內(nèi)靶器官和非靶臟器的滯留，這對解釋可能的毒性部位和在靶器官的有效細(xì)胞數(shù)目提供科學(xué)依據(jù)[5, 12, 15, 17, 19-21]。

4.2 干細(xì)胞制品的臨床前安全評價的相關(guān)指導(dǎo)原則

我國在 2008年 9月頒發(fā)了《人體細(xì)胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》對細(xì)胞制品的來源分類、制備、質(zhì)量控制、臨床前試驗即安全性和有效性等均作出一個共性要求。隨后，于 2010年 5月頒發(fā)了《治療用生物制品非臨床安全性技術(shù)審評一般原則》，闡述了我國對治療用生物制品的安全性評價原則。其評價的主要內(nèi)容和具體要求與化學(xué)藥物類似，主要為：①生物活性測定/藥效學(xué)試驗；②一般藥理學(xué)試驗；③急性毒性試驗；④長期毒性試驗；⑤免疫原性/毒性試驗；⑥生殖毒性試驗；⑦遺傳毒性試驗；⑧致癌性試驗；⑨局部耐受性試驗；⑩藥代/毒代試驗。但對干細(xì)胞制品目前一般不建議做藥代、毒代實驗。2013年 3月衛(wèi)生部對干細(xì)胞制品的臨床前研究頒發(fā)了《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則（試行）》，這是我國最新的針對干細(xì)胞制品的研究指導(dǎo)原則。

另外，美國 FDA 及 ICH 等均對生物制品的安全性作了相應(yīng)的要求[14,22-23]。臨床前動物毒性研究是評價干細(xì)胞制品安全性的基本的、也是必需的步驟。臨床前毒性研究所得的安全資料將是決定干細(xì)胞制品用于臨床試驗的主要依據(jù)。同時也能為臨床試驗提供可能的特殊毒性的監(jiān)測信息。

4.3 干細(xì)胞制品的臨床前安全評價一般原則

干細(xì)胞制品的臨床前安全評價一般可分為兩部分：①生物制品要求進(jìn)行的常規(guī)毒性評價：一般包括行為觀察、臨床指征的變化、死亡率、體重、攝食量、血液生化測定、尿常規(guī)分析、眼科檢查和組織病理檢查等。②非靶組織或部位毒性：包括生物分布、致瘤性及免疫原性。

4.3.1 生物分布 研究發(fā)現(xiàn)，大約只有 1% 的干細(xì)胞將蓄積在體內(nèi)相應(yīng)的靶器官，而絕大多數(shù)細(xì)胞因其粒徑或其表面黏附受體等原因在肺部滯留，還有少部分因通過前毛細(xì)血管時在血流中被吸附或損失。故干細(xì)胞制品的一個極為重要的安全性考慮就是其在體內(nèi)的生物分布，研究其生物分布可追蹤干細(xì)胞制品在體內(nèi)的狀態(tài)、分化和在靶組織與非靶組織的存留[5,15,17]。目前，大都采用干細(xì)胞體外標(biāo)記后再移植入體內(nèi)的方法來追蹤干細(xì)胞在體內(nèi)的狀況。文獻(xiàn)報道使用超順磁性氧化鐵（SPIO）納米顆粒標(biāo)記兔肌腱干細(xì)胞，通過核磁共振（MRI）技術(shù)能有效地觀察到肌腱干細(xì)胞參與受損肌腱的修復(fù)和再生。將肌腱干細(xì)胞與 50 mg/ml 的 SPIO 一起培養(yǎng)，通過 qRT-PCR 和免疫組化等方法對干細(xì)胞生長等指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)測。實驗結(jié)果表明，肌腱干細(xì)胞的標(biāo)記成功率高達(dá)98%，與未標(biāo)記對照干細(xì)胞相比，細(xì)胞的生長、分化及誘導(dǎo)分化等功能沒有明顯的不同。同時，干細(xì)胞的標(biāo)志物，如核干細(xì)胞因子、Nanog 和 Qct-4A 等也沒有受到影響。上述結(jié)果說明，SPIO 標(biāo)記沒有改變干細(xì)胞的存活狀態(tài)、分化等，可以作為一種較常用的檢測干細(xì)胞在機(jī)體內(nèi)生物分布的工具[3, 5, 24-25]。

目前干細(xì)胞生物分布的檢測方法有[25-29]：①胞漿標(biāo)記物：常用的主要有 Hoechst 和 Dil 等熒光色素，主要用于細(xì)胞的追蹤。但隨著細(xì)胞的分裂，標(biāo)記物會等分給兩個子細(xì)胞，子細(xì)胞的熒光強(qiáng)度也隨著下降。根據(jù)觀察到的熒光只能判斷干細(xì)胞的存在，而難以判斷干細(xì)胞的形態(tài)和存活情況。②核酸標(biāo)記：最常用的有 5-溴脫氧嘌呤核苷（BrdU）標(biāo)記法。其標(biāo)記和檢測方法簡便，準(zhǔn)確性及標(biāo)記率高，是反映干細(xì)胞增殖及跟蹤干細(xì)胞的理想指標(biāo)。但標(biāo)記干細(xì)胞若發(fā)生死亡，其釋放的 BrdU 則可摻入到干細(xì)胞循環(huán) S 期的任何細(xì)胞，從而難以區(qū)分移植細(xì)胞和宿主細(xì)胞。③光學(xué)成像標(biāo)記：常用的有生物發(fā)光成像（biolminstcence/maging，BLI）和熒光成像，但由于定位困難、光穿透力有限，該方法不適于大動物，只用于小動物實驗性成像的研究。④單光子發(fā)射計算機(jī)層攝影術(shù)（single photon emission computer tomography，SPECT）和正電子發(fā)射斷層顯像（positron emission tomography，PET），主要用于干細(xì)胞的細(xì)胞動力學(xué)和增殖研究。⑤核磁共振細(xì)胞成像顯影，優(yōu)點是可觀察干細(xì)胞的動態(tài)遷徙過程，空間時間分辨率高，對比度好，有利于觀察、追蹤活體細(xì)胞。

4.3.2 致瘤性 形成異體組織或腫瘤是干細(xì)胞制品的一個主要安全關(guān)注點，而來源于植入干細(xì)胞所形成的異體組織或腫瘤是可以通過臨床前毒性評價來監(jiān)測的。干細(xì)胞制品的致腫瘤性取決于以下幾個方面的因素，即干細(xì)胞的來源、操作影響和注射給藥部位或途徑。另外，干細(xì)胞分化狀態(tài)、多能或細(xì)胞系定型及培養(yǎng)條件等均對致腫瘤性有一定的影響。致瘤性一般被認(rèn)為是多能性干細(xì)胞，即 iPSC 和 hESC 的自己特性，而軀體干細(xì)胞如 MSC、HSC 等的致瘤性相對較小。干細(xì)胞制品致瘤易形成的部位主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心臟和關(guān)節(jié)腔等組織連接部位。多能干細(xì)胞最易引起良性畸胎瘤、惡性畸胎瘤和繼發(fā)性腫瘤。因人胚胎干細(xì)胞和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞具有其自身特點，故比任何來源于胎兒或成年組織的干細(xì)胞具有更強(qiáng)的致瘤性。另外，延長干細(xì)胞體外培養(yǎng)時間有可能提高其遺傳或表觀遺傳的變化，從而增加致瘤性風(fēng)險。干細(xì)胞在體內(nèi)存活時間越長，其致瘤性風(fēng)險也相應(yīng)提高。若干細(xì)胞植入體內(nèi)后，在局部發(fā)揮作用而不遷移到其他組織，其致瘤風(fēng)險相對變小[3,5,15,17,21,30]。故在評價干細(xì)胞制品的致瘤性時應(yīng)考慮：①干細(xì)胞體外培養(yǎng)的時間；②用于形成細(xì)胞制品的干細(xì)胞類別；③最終細(xì)胞制品的分化狀態(tài)；④預(yù)期干細(xì)胞植入體內(nèi)后的存活期；⑤干細(xì)胞在體內(nèi)的分布和遷移；⑥若形成異體組織或腫瘤可能的臨床后果；⑦使用干細(xì)胞制品的臨床前研究信息等。

表4 干細(xì)胞制品安全評價中常用的免疫缺陷實驗動物

表5 實驗干細(xì)胞制品臨床前安全評價設(shè)計原理

在致瘤性安全評價動物模型的選擇方面，應(yīng)該考慮到干細(xì)胞有足夠長的生存時間。一般推薦使用免疫抑制的嚙齒類動物來進(jìn)行[17]。Gilbert 和 Blau[20]報道，T 淋巴細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞和 NK 細(xì)胞缺乏小鼠給予干細(xì)胞后畸胎瘤的發(fā)生率比單一 T、B 細(xì)胞缺乏小鼠要高，且畸胎瘤生長更快。另外，一般都要求致瘤實驗周期在 9～12 個月[17]。表 4 列舉了目前在干細(xì)胞臨床前研究中常用的免疫缺陷動物。

4.3.3 免疫原性 免疫原性亦是影響干細(xì)胞制品安全性的主要因素之一。自身來源的干細(xì)胞免疫排斥反應(yīng)通常較低，但在體外培養(yǎng)過程中，外部環(huán)境的改變有可能會改變干細(xì)胞的一些特征，而引起宿主免疫效應(yīng)。免疫原性受多種因素的影響，包括同源或非同源治療、干細(xì)胞給予部位、細(xì)胞的成熟狀態(tài)、反復(fù)給予和免疫性疾病等。免疫原性和免疫毒性對細(xì)胞制品而言是一個重要的安全問題。在進(jìn)行免疫原性評價時還應(yīng)充分考慮到動物模型與臨床患者的差異。當(dāng)將一個臨床患者使用的干細(xì)胞制品輸入到正常動物身上時，此干細(xì)胞就會成為一個外源異物[5,17-18]。

4.3.4 小結(jié) 綜合上述，干細(xì)胞制品的臨床前安全性研究是與其他生物制品相似的，可單獨(dú)進(jìn)行也可與致瘤性或生物分布實驗整合到一起來進(jìn)行[5,15,17]。其總體原則見表 5。

5 結(jié)語

目前，開展干細(xì)胞制品的臨床前藥效學(xué)和安全評價仍存在不少問題，面臨極大的挑戰(zhàn)，因為每種干細(xì)胞制品的治療方式都是獨(dú)特的，很難找到一種單一的固定模式來對其進(jìn)行臨床前有效性和安全性評價。隨著越來越多的干細(xì)胞制品進(jìn)入臨床試驗，開發(fā)適合的臨床前安全性評價模型越來越引起人們的關(guān)注。建立科學(xué)的干細(xì)胞制品臨床前研究策略，需要藥物監(jiān)管部門、制藥企業(yè)和科研單位的共同努力。

[1] Back F, Albertini RJ, Joo P, et al.Bone-marrow transplantation in a patient with the Wiskott-Aldrich syndrome.Lancet, 1968, 292(7583):1364-1366.

[2] Mansour S, Vanderheyden M, De Bruyne B, et al.Intracoronary delivery of hematopoietic bone marrow stem cells and luminal loss of the infarct-related artery in patients with recent myocardial infarction.J Am Coll Cardiol, 2006, 47(8):1727-1730.

[3] Trounson A, Thakar RG, Lomax G, et al.Clinical trials for stem cell therapies.BMC Med, 2011, 9:52.

[4] Ali H, Bahbahani H.Umbilical cord blood stem cells - potential therapeutic tool for neural injuries and disorders.Acta Neurobiol Exp(Wars), 2010, 70(3):316-324.

[5] Herberts CA, Kwa MS, Hermsen HP.Risk factors in the development of stem cell therapy.J Transl Med, 2011, 9:29.

[6] van der Spoel TI, Jansen of Lorkeers SJ, Agostoni P, et al.Human relevance of pre-clinical studies in stem cell therapy: systematic review and meta-analysis of large animal models of ischaemic heart disease.Cardiovasc Res, 2011, 91(4):649-658.

[7] Loffredo FS, Steinhauser ML, Gannon J, et al.Bone marrow-derived cell therapy stimulates endogenous cardiomyocyte progenitors and promotes cardiac repair.Cell Stem Cell, 2011, 8(4):389-398.

[8] Copeland N, Harris D, Gaballa MA.Human umbilical cord blood stem cells, myocardial infarction and stroke.Clin Med, 2009,9(4):342-345.

[9] Tsubota K, Satake Y, Kaido M, et al.Treatment of severe ocular-surface disorders with corneal epithelial stem-cell transplantation.N Engl J Med, 1999, 340(22):1697-1703.

[10] Schwartz SD, Hubschman JP, Heilwell G, et al.Embryonic stem cell trials for macular degeneration: a preliminary report.Lancet, 2012,379(9817):713-720.

[11] Laino C.Type 1 diabetes treatment shows promise.(2012-08)[2013-10-14].http://diabetes.webmd.com/news/20120611/stem-cellstype-1-diabetes.

[12] Joers VL, Emborg ME.Preclinical assessment of stem cell therapies for neurological diseases.ILAR J, 2009, 51(1):24-41.

[13] Lorenz E, Uphoff D, Reid TR, et al.Modification of irradiation injury in mice and guinea pig by bone marrow injections.J Natl Cancer Inst,1951, 12(1):197-201.

[14] U.S.Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Biologics Evaluation and Research, et al.Guidance for Industry: cellular therapy for cardiac disease.(2010-10)[2013-10-14].http://www.fda.gov/downloads/BiologicsBloodVaccines/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/CellularandG eneTherapy/UCM164345.pdf.

[15] Frey-Vasconcells J, Whittlesey KJ, Baum E, et al.Translation of stem cells research: points to consider in designing preclinical animal studies.Stem Cells Transl Med, 2012, 1(5):353-358.

[16] Piccini JP, Whellan DJ, Berridge BR, et al.Current challenges in the evaluation of cardiac safety during drug development: translational medicine meets the critical path initiative.Am Heart J, 2009, 158(3):317-326.

[17] Sharpe ME, Morton D, Rossi A.Nonclinical safety strategies for stem cell therapies.Toxicol Appl Pharmacol, 2012, 262(3):223-231.

[18] European Medicines Agency.Reflection paper on stem cell-based medicinal products.(2011-01-14) [2013-10-14].http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2011/02/WC500101692.pdf.

[19] Goldring CE, Duffy PA, Benvenisty N, et al.Assessing the safety of stem cell therapeutics.Cell Stem Cell, 2011, 8(6):618-628.

[20] Gilbert PM, Blau HM.Engineering a stem cell house into a home.Stem Cell Res Ther, 2011, 2(1):3.

[21] Hentze H, Soong PL, Wang ST, et al.Teratoma formation by human embryonic stem cells: evaluation of essential parameters for future safety studies.Stem Cell Res, 2009, 2(3):198-210.

[22] U.S.Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Biologics Evaluation and Research.Guidance for industry: preclinical assessment of investigational cellular and gene therapy products, draft guidance.(2012-11)[2013-10-14].http://www.fda.gov/downloads/biologicsbloodvaccines/guidancecomplianceregulatoryinformation/guidances/cellularandgenet herapy/ucm329861.pdf.

[23] The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use.Preclinical safety evaluation of biotechnology-derived pharmaceuticals.(1997-07) [2013-10-14].http://www.ich.org/fileadmin/Public_Web_Site/ICH_Products/Guidelines/Safety/S6_R1/Step4/S6_R1_Guideline.pdf.

[24] Jackson JS, Golding JP, Chapon C, et al.Homing of stem cells to sites of inflammatory brain injury after intracerebral and intravenous administration: a longitudinal imaging study.Stem Cell Res Ther,2010, 1(2):17.

[25] Yang Y, Zhang J, Qian Y, et al.Superparamagnetic iron oxide is suitable to label tendon stem cells and track them in vivo with MR imaging.Ann Biomed Eng, 2013, 41(10):2109-2119.

[26] Gharaibeh B, Lavasani M, Cummins JH, et al.Terminal differentiation is not a major determinant for the success of stem cell therapy -cross-talk between muscle-derived stem cells and host cells.Stem Cell Res Ther, 2011, 2(4):31.

[27] Duan F, Wang MQ.Current status and prospect of labeling and tracking stem cells.Int J Med Radiol, 2009, 32(6):563-566.(in Chinese)段峰, 王茂強(qiáng).干細(xì)胞標(biāo)記示蹤技術(shù)的研究進(jìn)展.國際醫(yī)學(xué)放射學(xué)雜志, 2009, 32(6):563-566.

[28] Tong L, Zhao H, He Z, et al.Current perspectives on molecular imaging for tracking stem cell therapy//Okechukwu FE.Medical imaging in clinical practice.Rijeka, Croatia: InTech, 2013:63-79.(2013-02-20) [2013-10-14].http://cdn.intechopen.com/pdfs/40177/In Tech-Current_perspectives_on_molecular_imaging_for_tracking_ste m_cell_therapy.pdf.

[29] Sun JS, Li B, Gong YK.Research progress in labeling and tracing technique of bone marrowmesenchymal stem cells.Chin J Tissue Eng Res, 2012, 16(6):1107-1110.(in Chinese)孫江森, 李彪, 龔躍昆.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記及示蹤技術(shù)的研究與進(jìn)展.中國組織工程研究, 2012, 16(6):1107-1110.

[30] Cunningham JJ, Ulbright TM, Pera MF, et al.Lessons from human teratomas to guide development of safe stem cell therapies.Nat Biotechnol, 2012, 30(9):849-857.