維生素D3固體分散體片制備與穩(wěn)定性研究

曾宇君，劉 娟，，黃 勇

(1.西南大學榮昌校區(qū)動物醫(yī)學系，重慶 402460;2.重慶市藥效評價工程技術研究中心，重慶 402460)

維生素D是機體必需的一種維生素，屬于類固醇類激素，在體內(nèi)具有多方面活性，是促進機體鈣磷吸收的主要元素。維生素D2與維生素D3對哺乳動物的活性基本相同，且對包括家禽在內(nèi)的鳥類，維生素D3的活性遠高于維生素D2，約20～40倍［1］。因此，獸醫(yī)臨床多采用維生素D3進行相關疾病的治療。但是維生素D3對光照和高溫不穩(wěn)定，常規(guī)制劑易降解失效，難以保證其質(zhì)量穩(wěn)定性。固體分散技術可將易揮發(fā)、易分解的不穩(wěn)定藥物制成固體分散體系，增加藥物穩(wěn)定性，減少用藥劑量，提高藥物生物利用度，并可根據(jù)需要制成片劑、注射劑、散劑以及栓劑等［2］。需要注意的是，固體分散體長時間貯存會出現(xiàn)硬度增加、析出結晶、藥物溶出度降低的情況，即老化現(xiàn)象［3］。目前在維生素藥物中對維生素C和維生素E采用固體分散技術進行新制劑制備的報道較多，制備維生素D3新制劑的報道較少，本試驗對維生素D3固體分散體片進行了工藝與穩(wěn)定性研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑與藥品 維生素D3固體分散體片(重慶天龍牧業(yè)科技有限公司制備);維生素D3對照品(中國藥品生物制品鑒定所，批號1001－200505);維生素 D3(鄭州匯鑫科技股份有限公司，批號20081108);PEG－6000(成都科立隆化工貿(mào)易有限公司，批號20081009);乙腈(天津市科密歐化學試劑有限公司，批號20080309);甲醇(天津市大茂化學試劑廠，批號20080702);氯仿(天津市博迪化工有限公司，批號20080220);醋酐(重慶川東化工有限公司，批號20080415);濃硫酸(重慶川東化工有限公司化學試劑廠，批號20070831)。

1.1.2 儀器 電子天平(YP1200型，上海精科);高效液相色譜儀(型號waters 2487，天津市沃爾孚科技發(fā)展有限公司);電子恒溫水浴鍋(DXKW，北京中興偉業(yè)儀器有限公司);電熱恒溫鼓風干燥箱(DHG型，上海精宏試驗設備有限公司);超聲波振蕩器(KQ3200E，寧波科生超聲設備公司)。

1.2 方法

1.2.1 維生素D3固體分散體的制備條件 采用正交試驗設計法，以分散比例(因素A)、溫度(因素B)、光照(因素C)為考察因素，維生素D3含量為檢測指標，采用L4(23)正交表［4］，篩選優(yōu)良的制備工藝，正交試驗方案見表1。

按照上述方案，采用熔融法制備維生素D3固體分散體，將維生素D3均勻分散至載體熔融液中，冷凍干燥，研末，過80目篩，置冰箱(4℃)內(nèi)備用［5］。

表1 維生素D3固體分散體制備方案正交試驗設計表

1.2.2 維生素D3固體分散體片與普通片的制備工藝 參照文獻［6］，將維生素D3固體分散體以適當比例和空白淀粉粒子、硬脂酸鎂、滑石粉混合均勻，制成維生素D3固體分散體片，按0.5 g/片進行壓片，維生素D3的含量為1250單位/片。取處方量維生素D3溶解于乙醇中，均勻噴灑在空白淀粉粒子上，以適當比例與硬脂酸鎂、滑石粉混合均勻，制成維生素D3普通片，按0.5 g/片進行壓片，維生素D3的含量為1250單位/片。

1.2.3 定性鑒別 取維生素D3原料約0.5 mg，加入氯仿5 mL溶解，再依次加入醋酐0.3 mL和濃硫酸0.1 mL，振搖，觀察顏色變化［7］。維生素 D3固體分散體片和普通片，可先分別研磨過80目篩后，取適量粉末再進行上述操作。

1.2.4 含量測定方法 參照文獻［8］，測定方法如下。

1.2.4.1 對照品溶液的制備 準確稱取維生素D3對照品0.05 g置50 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，精確量取上述溶液1 mL稀釋到10 mL，作為對照品溶液，置冰箱(4℃)內(nèi)備用，對照品溶液含維生素D3100 mg/L。

1.2.4.2 色譜條件 色譜柱:Waters 38145－21柱(250 mm×4.6 mm);流動相為甲醇 ∶乙腈=90∶10;流速1.0 mL/min;檢測波長265 nm;柱溫25℃;進樣體積5 μL;檢測器為二極管陣列檢測器。

1.2.4.3 標準曲線的繪制 用甲醇分別稀釋對照品溶液至 50、20、10、2、0.5 mg/L，在上述色譜條件下分別吸取5 μL進樣測定，以峰面積(Y)對進樣量(X)進行線性擬合，同時用最小二乘法進行線性回歸，得回歸方程為 Y=223427X+35460，R2=0.9999。結果表明，維生素D3進樣量在2.5～250 ng范圍內(nèi)線性關系良好。繪制標準曲線(圖1)。

圖1 維生素D3標準曲線圖

1.2.4.4 供試品溶液的制備 分別取維生素D3固體分散體片和普通片各若干片，放器皿中研細，攪拌均勻。精密稱取樣品5 g于10 mL容量瓶中，用流動相定容至8 mL，搖勻，超聲溶解20 min，加流動相定容至刻度，再搖勻，將溶液轉(zhuǎn)移到離心管，放置到離心機中4000 r/min離心10 min。將離心后的溶液上層清液，取0.22 μm濾膜過濾，濾液為供試品溶液。精密量取5 μL供試品溶液進行HPLC分析。根據(jù)峰面積用標準曲線計算維生素D3的相對百分含量。

1.2.5 維生素D3固體分散體片穩(wěn)定性研究

1.2.5.1 光穩(wěn)定性試驗 在溫度為25℃，將維生素D3固體分散體片用普通白色塑料袋密封包裝，置于照度4500 Lx下放置10 d，進行加速試驗，在第0、5、10 天各取樣 1 次，設普通片為對照組，按1.2.4項下方法測定維生素D3含量。

1.2.5.2 加速試驗 在溫度(40±2)℃、相對濕度75% ±5%條件下，將維生素D3固體分散體片用普通白色塑料袋密封包裝放置6個月，進行加速試驗，在第0、1、2、3、4、5、6 個月各取樣1 次，設普通片為對照組，按1.2.4項下方法測定維生素D3含量。

2 結果

2.1 正交試驗工藝研究結果 正交試驗結果可見，以A2B1C2組合為最佳工藝，即維生素D3和分散載體按照1∶20的比例，經(jīng)60℃水浴，在避光的情況下進行固體分散包被，其含量最高，工藝為最佳，詳見表2。

表2 維生素D3固體分散體制備方案正交試驗結果

2.2 定性鑒別結果 鑒別結果見表3，維生素D3固體分散體片鑒別顯色均符合要求，且第1、4步顯色明顯，而維生素D3普通片只有第4步顯色明顯，第1步顯色不明顯，中間兩步無顏色變化。

表3 維生素D3原料、固體分散體片和普通片的理化鑒別結果

2.3 含量測定結果 維生素D3高效液相色譜圖見圖2。根據(jù)維生素D3固體分散體片與普通片的出峰面積，將其分別代入標準曲線，計算得出維生素D3的含量(圖3)。維生素D3固體分散體片的平均相對百分含量為97.94%，普通片為95.6%。

圖2 維生素D3高效液相色譜圖

2.4 維生素D3固體分散體片穩(wěn)定性研究結果

2.4.1 光穩(wěn)定性試驗結果 在上述光照條件下，隨著光照時間的延長，維生素D3固體分散體中維生素D3含量微有下降，但保持在高含量水平;普通片含量下降明顯，第5天實驗室判斷已為不合格，結果見圖4。

2.4.2 加速試驗結果 維生素D3固體分散體片中維生素D3含量隨著放置時間的延長雖有微量降解，但無明顯變化;而普通片則發(fā)生了較大變化，第2個月實驗室判斷已為不合格，結果見圖5。

3 討論

3.1 維生素D3性質(zhì)不穩(wěn)定，遇光、氧、熱等易發(fā)生降解而失效，導致體內(nèi)生物利用度降低。通過正交試驗結果可看出，載體、溫度、光照是影響維生素D3固體分散體穩(wěn)定性的三大因素，增加載體比例、降低包被溫度、避免光照可有效阻隔維生素D3和空氣、光、熱的接觸，大大減緩藥物在生產(chǎn)、貯存過程中被水解和氧化。正交試驗結果中A2B1C2組合鑒別顯色結果最明顯且所測相對百分含量最高，所以維生素D3固體分散體的最佳工藝為:維生素D3和載體PEG－6000按照1∶20的比例，經(jīng)60℃水浴，在避光的情況下進行固體分散包被。將易氧化分解的維生素D3制備成固體分散體，可以大大提高維生素D3的穩(wěn)定性和生物利用度，減少毒副反應，防治動物維生素D缺乏癥，具有安全、有效、應用方便的優(yōu)勢［9］。

3.2 穩(wěn)定性研究的目的是考察藥物及其制劑在溫度、濕度和光線的影響下隨時間變化的規(guī)律，為藥品的生產(chǎn)、包裝、貯存和運輸條件提供科學依據(jù)，是新藥研究必不可少的內(nèi)容［10］。通過對維生素D3固體分散體片穩(wěn)定性的考察，發(fā)現(xiàn)在本試驗條件下，維生素D3固體分散體片較普通片抗光、氧、熱的能力更強，可有效保護藥物的成分，提高生物利用率。但試驗結果也顯示，固體分散體片在光照、高溫和潮濕環(huán)境下，也有部分降解，故維生素D3固體分散體片應干燥、常溫、避光貯存。

［1］ 馮志華，劉觀忠，張義明.維生素D在動物營養(yǎng)中的應用研究［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2004，31(8):16 －18.

［2］ 洪 濤，歐陽五慶.固體分散體的載體選擇及質(zhì)量評價的新進展［J］.專論與綜述，2004，(9):84 －86.

［3］ 陸 彬.藥物新劑型與新技術［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1998:13.

［4］ 明道緒.生物統(tǒng)計附試驗設計第三版［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2001:356.

［5］ 郭芳茹，張遂平，楊建春，等.癸氧喹酯固體分散體制備方法及效果評價研究［J］.河南畜牧獸醫(yī)，2012，3(1):31 －32.

［6］ 胡功政.獸醫(yī)藥劑學［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2008:140.

［7］ 中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典2010版二部［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2011:268－269.

［8］ 朱 英，楊艷偉，王 歆.化妝品中維生素D2、維生素D3的高效液相色譜測定［J］.衛(wèi)生研究，2005，34(5):624 －625.

［9］ 劉 娟，黃 勇.維生素D3固體分散體在獸醫(yī)臨床應用價值討論［J］.內(nèi)江科技，2009，(11):29 －30.

［10］鄒 陽，黃 華.固體分散法制劑工藝研究進展［J］.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2005，36(10):648 －651.