HPLC測定綠絨蒿中槲皮素的含量研究

孫躍寧 王海英 孫 楠

(青海阿如拉藏醫(yī)藥研究開發(fā)有限公司，青海 西寧 810003)

綠絨蒿，藏名歐貝，為罌粟科植物全緣綠絨蒿Meconopsis integrifolia(Maxim.)Franch.及五脈綠絨蒿Meconopsis quintuplinervia Regel、長葉綠絨蒿 Meconopsis lancifolia(Franch.)Franch.等的干燥花，6～8月花盛期采集，晾干［1、2］。綠絨蒿全世界共用49種，主產(chǎn)于亞洲中南部，以我國最為豐富。綠絨蒿不僅具有很高的觀賞價(jià)值，有限種類還可以入藥治病。其性味涼，甘，澀。清熱，用于肝熱病，肺熱病。如全緣綠絨蒿、尼泊爾綠絨蒿全草可入藥，具有清熱解毒的功效，其他如被稱為“紅毛洋參”、“雪參”的綠絨蒿根可入藥，可治療氣虛、浮腫、哮喘等癥［3、4］。綠絨蒿中含有大量的黃酮類化合物，黃酮類化合物具有抗炎、抗病毒、解熱和保肝的作用［5］。槲皮素為綠絨蒿中所含的活性成分，槲皮素具有較好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用，用于治療慢性支氣管炎，此外還有降低血壓、增強(qiáng)毛細(xì)血管抵抗力、減少毛細(xì)血管脆性、降血脂、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈血流量的等作用，對(duì)冠心病及高血壓患者有輔助治療作用［6、7］。本文采用HPLC測定綠絨蒿中槲皮素的含量，因此為評(píng)價(jià)綠絨蒿藥材的質(zhì)量及研發(fā)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器:HHS－4型電熱恒溫水浴鍋，生產(chǎn)廠家:國華電器有限公司;LC－20AT高效液相色譜儀，生產(chǎn)廠家:日本島津。

1.2 試藥:綠絨蒿藥材由金訶藏藥股份有限公司提供，批號(hào):20120701，20120702，20120703;槲皮素對(duì)照品，批號(hào):100081－200406(供含量測定用);以上對(duì)照品購自中國藥品生物制品鑒定所;雙蒸餾水(自制);甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇－0.4%磷酸(50:50)為流動(dòng)相;檢測波長為360nm;流速1.0mL/min;理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備:取槲皮素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含槲皮素20μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備:取本品粉末0.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流1n，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，加入鹽酸5mL，置水浴中加熱1n，取出，迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

圖1 (A)槲皮素對(duì)照品

圖1 (B)綠絨蒿樣品的HPLC圖譜

2.3 線性關(guān)系實(shí)驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液 2、4、6、8、10、12μL注入液相色譜儀測定，按2.1項(xiàng)下的色譜條件測定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，以峰面積的積分值為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得槲皮素回歸方程為Y=47472X－1026，r=0.9999;結(jié)果表明，在上述色譜條件下，槲皮素在0.0396 ～0.2376μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn):精密吸取兩種對(duì)照品溶液各10μL，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，結(jié)果槲皮素對(duì)照品的RSD為0.26%(n=6)說明儀器性能良好。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn):精密吸取制備的供試品溶液10μL，于0、2、4、6、8、10h 進(jìn)樣，測定峰面積，結(jié)果在測定時(shí)間內(nèi)，供試品中槲皮素含量穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn):取同一批號(hào)樣品5份，分別按樣品溶液制備法制備，測定其槲皮素峰面積值，其結(jié)果樣品中槲皮素平均含量為1.41mg·g－1，RSD 為 1.03%(n=5)，表明分析方法重復(fù)性良好。

2.7 回收率實(shí)驗(yàn):精密吸取已知含量的樣品6份，分別精密加入槲皮素對(duì)照品溶液，按樣品制備方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見下表1

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表2 樣品中槲皮素的含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 綠絨蒿植物種類較多，對(duì)其化學(xué)成分的探索主要集中在生物堿成分［8］的分離鑒定上，但還未見植物黃酮類成分的研究，而質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究尚屬空白，本文以槲皮素作為含量測定指標(biāo)，按有關(guān)參考文獻(xiàn)［9］的提取，分離，得到了滿意的結(jié)果。

3.2 本實(shí)驗(yàn)方法簡單、快速，結(jié)果準(zhǔn)確，具有回收率高、精密度好、重現(xiàn)性好、分析快速等優(yōu)點(diǎn)，可以有效地控制綠絨蒿的質(zhì)量［10］。

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).藏藥［S］.第一冊(cè)，1995.

［2］青海省藏藥標(biāo)準(zhǔn)［S］.1992.

［3］鞏江，路鋒，姚默，等.柱果綠絨蒿抗氧化成分提取及其活性研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012，11

［4］張?jiān)?多刺綠絨蒿不同播種量試驗(yàn)［J］.青海農(nóng)林科技，2012，3

［5］高黎明，王小雄.藏藥全緣綠絨蒿化學(xué)成分的研究(I)［J］.西北師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，1997，33(3):49－52.

［6］徐建，王婷婷，楊波，張顯濤.HPLC測定榛子雄花中槲皮素和山萘素的含量［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，5

［7］李學(xué)堅(jiān)，胡文姬，鄧家剛，杜正彩.析因分析法研究槲皮素對(duì)芒果苷抗炎祛痰作用的影響［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012，01

［8］劉松渝.綠絨蒿屬植物的生物堿［J］.華西藥學(xué)雜志，1987，2(3):55 －58.

［9］國家藥典委員會(huì).中國藥典［S］.一部.中國醫(yī)藥出版社2010:204.

［10］陳燕，黃志芳，德吉，等.全緣綠絨蒿藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中國執(zhí)業(yè)藥師，2009，2(6):36－38.