黑莓（薩尼）和紅樹(shù)莓（哈瑞特斯）對(duì)凝血作用的影響

顧海鵬，王佳佳，顧雪竹，康文藝＊

（1.河南大學(xué) 中藥研究所，河南 開(kāi)封475004；2.中國(guó)中醫(yī)研究院 中藥研究所，北京100700）

黑莓（Rubus spp.blackberry）、紅樹(shù)莓（Rubus spp.raspberry）均為薔薇科（Rasaceae）懸鉤子屬聚合果類(lèi)植物。其果實(shí)具很高的藥用價(jià)值和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，可改善人體新陳代謝、清除自由基、延緩衰老、增強(qiáng)免疫力等功能，特別具有降低膽固醇、防治心臟疾病、抗癌（降低化療引起的毒副作用）和抗血栓的功效［1－4］，果實(shí)、種子、根及葉均可入藥。藥理研究［5－11］發(fā)現(xiàn)，黑

莓、紅樹(shù)莓均具有較強(qiáng)的抗氧化活性。樹(shù)莓具有抗炎、抗菌、抑癌、降糖、減肥、抗氧化等多種生物學(xué)作用。國(guó)內(nèi)外對(duì)黑莓、紅樹(shù)莓報(bào)道多集中在其抗氧化活性，僅有樹(shù)莓對(duì)2型糖尿病腎病的腎功能具有保護(hù)作用［12］，對(duì)黑莓的揮發(fā)性成分［13－14］研究報(bào)道及顧 姻［15］提到的懸鉤子屬植物藥用種類(lèi)的臨床使用范圍。關(guān)于黑莓、紅樹(shù)莓對(duì)凝血作用的影響未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

黑莓、紅樹(shù)莓在我國(guó)分布廣泛，資源豐富，其不僅具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，還具有特殊的功效，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)其利用價(jià)值，我們對(duì)其浸膏進(jìn)行了血液凝固活性的探究。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

TGL-16高速離心機(jī)（江蘇金壇中大儀器廠）；秒表計(jì)時(shí)器、LRH-150生化培養(yǎng)箱（上海一恒科技有限公司）；注射生理鹽水（山東齊都藥業(yè)有限公司，2012053107）；38g／L枸櫞酸鈉溶液、2.775g／L氯化鈣溶液、維生素k1注射液（天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司，1109051）；注射用燈盞花素（湖南恒生制藥有限公司，20110202）。

1.2 動(dòng)物與材料

獺兔，雄性，體質(zhì)量2.0～2.5kg，由河南大學(xué)藥學(xué)院中藥研究所提供（醫(yī)動(dòng)字09-1-2號(hào)）。

黑莓（薩尼）、紅樹(shù)莓（哈瑞特斯）于2011年8月采集于河南省新鄉(xiāng)市封丘縣種植基地，由河南大學(xué)中藥研究所李昌勤副教授鑒定為薔薇科（Rasaceae）懸鉤子屬聚合果類(lèi)植物黑莓（Rubus spp.blackberry）品種薩尼（Shawne）及紅樹(shù)莓（Rubus spp.raspberry）品種哈瑞特斯（Harrywaters）的果實(shí)。標(biāo)本保存于河南大學(xué)中藥研究所。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 黑莓、紅樹(shù)莓的提取 新鮮黑莓（薩尼）果實(shí)10.04kg、新鮮紅樹(shù)莓（哈瑞特斯）果實(shí)2.75kg，用甲醇室溫下浸泡2次，每次3d，合并提取濾液后濃縮，得到甲醇總浸膏?？偨喾稚⒂谒校来斡檬兔?、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓濃縮得到黑莓石油醚部位（幾乎沒(méi)有）、乙酸乙酯部位27.5g、正丁醇部位195.7g；紅樹(shù)莓（哈瑞特斯）石油醚部位109.2mg、乙酸乙酯部位8.2g、正丁醇部位100.2g。

1.3.2 對(duì)家兔體外血漿復(fù)鈣時(shí)間的影響 取家兔耳緣靜脈血3.6mL，置含38g／L枸櫞酸鈉400μL的4mL離心管中，混勻，1 000r／min離心15min，取上清液備用。設(shè)定樣品組、燈盞花素組、維生素k1組、空白組。取1.5mL道夫管，樣品組加入血漿、乙酸乙酯、正丁醇溶液各0.1mL；維生素k1組加入血漿、維生素k1注射液各0.1mL；燈盞花素組加入血漿、燈盞花素注射液各0.1mL；空白組加入血漿、空白溶劑各0.1mL，于37℃溫育1min后分別向每管加入2.775g／L CaCl2溶液0.1mL計(jì)時(shí)，直到檢測(cè)到纖維蛋白絲時(shí)停止計(jì)時(shí)。維生素K1、燈盞花素組重復(fù)3次，樣品組重復(fù)6次，求算術(shù)平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，即為血漿復(fù)鈣時(shí)間。結(jié)果采用算術(shù)平均值和標(biāo)準(zhǔn)差表示，數(shù)值統(tǒng)計(jì)采用SPSS 17.0軟件單因素方差分析法（One-Way ANOVA）比較其顯著性差異。

2 結(jié)果與討論

黑莓（薩尼）、紅樹(shù)莓（哈瑞特斯）提取物對(duì)體外血漿復(fù)鈣時(shí)間的影響結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 黑莓（薩尼）、紅樹(shù)莓（哈瑞特斯）提取物對(duì)體外血漿復(fù)鈣時(shí)間的影響（ˉx±s，s）

由表1可以看出，與空白組比較，黑莓（薩尼）、紅樹(shù)莓（哈瑞特斯）正丁醇部位和紅樹(shù)莓（哈瑞特斯）乙酸乙酯部位可較顯著延長(zhǎng)體外血漿復(fù)鈣時(shí)間（0.001＜P＜0.01）；黑莓（薩尼）乙酸乙酯部位可極顯著縮短體外血漿復(fù)鈣時(shí)間（P＜0.001）。由表中數(shù)值看出，黑莓（薩尼）和紅樹(shù)莓（哈瑞特斯）正丁醇部位及紅樹(shù)莓（哈瑞特斯）乙酸乙酯部位均與各組燈盞花素血漿復(fù)鈣時(shí)間接近，可提示其具有抗凝血功效。黑莓（薩尼）乙酸乙酯部位血漿復(fù)鈣時(shí)間與其維生素k1接近，可提示其具有止血作用。

血液凝固過(guò)程是血漿中凝血因子受到內(nèi)源性或外源性激活引起的一系列化學(xué)連鎖反應(yīng)，血漿復(fù)鈣時(shí)間反應(yīng)的是內(nèi)源性凝血系統(tǒng)功能。維生素k1為人體合成凝血因子的重要來(lái)源，臨床可用于治療維生素k1缺乏性出血及逆轉(zhuǎn)抗凝血藥物過(guò)量引起的出血癥。燈盞花素為中藥提取制劑，有效成分為野黃芩苷，主要有抗凝血、抗血栓形成，改善血液流變性及微循環(huán)，增加腦血流量，抗心肌缺血，提高機(jī)體耐缺氧能力等作用。因此，我們以維生素k1注射液和燈盞花素注射液作為陽(yáng)性對(duì)照組與黑莓（薩尼）和紅樹(shù)莓（哈瑞特斯）提取物對(duì)血液凝固作用的活性作比較。

3 結(jié)論

由體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，黑莓（薩尼）和紅樹(shù)莓（哈瑞特斯）乙酸乙酯、正丁醇部位均具有較好的體外抗凝血功效或止血作用。篩選黑莓（薩尼）和紅樹(shù)莓（哈瑞特斯）提取物的活性部位，對(duì)分離其凝血或抗凝血活性有效成分具有一定的指向性，對(duì)于開(kāi)發(fā)懸鉤子屬植物藥用價(jià)值有重要意義。

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