嗜酸乳桿菌抑菌能力的試驗

【摘 要】 選擇一株嗜酸乳桿菌優(yōu)良菌株為研究對象，用牛津杯法測定嗜酸乳桿菌對6種細菌的抑菌作用，根據抑菌圈的大小來判斷抑菌效果。實驗表明嗜酸乳桿菌對6種細菌起抑菌作用的并非菌體本身而是其代謝產物，且抑菌作用并非由于pH的變化引起的。

【關鍵詞】嗜酸乳桿菌；牛津杯法；抑菌圈；發(fā)酵液

文章編號：ISSN1006—656X（2013）09 -0100-01

【前言】嗜酸乳桿菌是人體腸道內的重要益生菌，能調節(jié)腸道微生態(tài)平衡，抑制病原微生物生長，緩解乳糖不耐癥，降低膽固醇和抑制腸道腹瀉等作用，被視為第三代酸乳發(fā)酵劑菌種[1]。研究嗜酸乳桿菌對不同病原菌的抑菌效果、探討其抑菌因素，對嗜酸乳桿菌產品的應用具有一定的意義。

一、材料與儀器

（一）材料：

（1）實驗菌株：嗜酸乳桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、副溶血性弧菌、八疊球菌、枯草芽孢桿菌（實驗室保存的菌株）

（2）培養(yǎng)基：PCA培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基、MRS培養(yǎng)基

13%牛奶培養(yǎng)基（用脫脂乳粉配制成13%水溶液，115℃10min滅菌）

（3）設備名稱、型號、廠家

YXQ-LS-50SL型高壓蒸汽滅菌鍋（上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠）

PYX-DHS型隔水式點熱恒溫培養(yǎng)箱（上海市躍進醫(yī)療器械廠）

JT-5003型精密電子天平（深圳市華恒儀器有限公司）

微生物實驗常規(guī)玻璃儀器

（二）實驗方法

（1）嗜酸乳桿菌發(fā)酵菌懸液、發(fā)酵液抑菌效果試驗

將加有溴鉀酚紫指示劑的PCA培養(yǎng)基分裝于試管中，每管約15mL，可確保每個平板的營養(yǎng)成分基本相同，添加指示劑有利于觀察抑菌圈，然后于121℃滅菌20min。分別吸取1mL指示菌的10-1稀釋液于冷卻至45-50℃培養(yǎng)基中，這一稀釋度生長的菌落能夠均勻的布滿整個平板，確保實驗的準確度，混勻后倒入9cm的滅菌平板中。培養(yǎng)基凝固后，在無菌條件下將3個滅菌的牛津杯均勻地放置在平板上，輕輕按壓，使其與平板培養(yǎng)基接觸面無空隙。在3個杯中分別加入0.1mL的嗜酸乳桿菌菌懸液、嗜酸乳桿菌培養(yǎng)上清液、MRS液體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h，測定抑菌圈直徑。每個樣品做兩個重復，結果取平均值。

（2）牛奶發(fā)酵物抑菌效果試驗

13%牛奶培養(yǎng)基，115℃10min滅菌，冷卻40℃左右，按5%的接種量接入嗜酸乳桿菌菌種，42℃恒溫培養(yǎng)約4h至牛奶凝固，即牛奶發(fā)酵物。用牛奶發(fā)酵物及其析出的上清液分別進行抑菌實驗，以13%牛奶培養(yǎng)基作對照，觀察抑菌效果。

（3）酸度對嗜酸乳桿菌抑菌作用影響試驗

嗜酸乳桿菌的發(fā)酵物pH值呈酸性，說明其代謝產物中含酸性物質，而pH值對細菌生長都有一定的影響，為了驗證嗜酸乳桿菌代謝產物的抑菌作用是否是由于pH變化引起的，用1mol/LHCL、1mol/LNaCL將MRS培養(yǎng)基、嗜酸乳桿菌培養(yǎng)上清液、牛奶發(fā)酵物析出液的pH進行調整，然后做抑菌實驗，觀察酸度是否影響抑菌作用。MRS培養(yǎng)基的pH調整到培養(yǎng)后的pH，嗜酸乳桿菌培養(yǎng)上清液pH調整到培養(yǎng)前的pH，牛奶發(fā)酵物析出液的pH調整到發(fā)酵前的pH。

嗜酸乳桿菌MRS培養(yǎng)液制備：將實驗室保存在牛奶培養(yǎng)基中的嗜酸乳桿菌以5%的接種量接種到MRS液體培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)18h，即為嗜酸乳桿菌MRS培養(yǎng)液。靜置乳酸菌培養(yǎng)液，待其菌體完全沉淀后取其上清液，再經0.22um膜過濾即為嗜酸乳桿菌培養(yǎng)上清液 。

實驗菌株培養(yǎng)液制備：將試管斜面保存的實驗菌株接種到LB培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)24h，為指示菌培養(yǎng)液。

二、結果

（一）嗜酸乳桿菌發(fā)酵液的抑菌結果

表1 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物對6種細菌的抑菌作用/mm（如下表）

由表1可知

1、嗜酸乳桿菌菌懸液和嗜酸乳桿菌培養(yǎng)上清液對6種細菌都有抑制作用；

2、二者的抑菌能力無明顯差別，說明起到抑菌作用的并非菌體本身而是其代謝產物；

3、調整pH值后的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)上清液、MRS培養(yǎng)基的抑菌結果與未調整的結果一致，說明其抑菌作用并非是pH值的變化引起的；同時也說明嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物pH值變化幅度均在這6種細菌的適應范圍內；

4、從抑菌圈直徑可以看出嗜酸乳桿菌培養(yǎng)菌懸液和嗜酸乳桿菌培養(yǎng)上清液對金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、八疊球菌的抑制能力較強，對大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的抑制能力相對弱些，對副溶血性弧菌的抑制能力最弱。

（二）嗜酸乳桿菌牛奶發(fā)酵物的抑菌結果

表2 嗜酸乳桿菌發(fā)酵物對6種細菌的抑菌作用/mm

1、牛奶發(fā)酵物及析出液對6種細菌具有一定的抑制作用，但抑菌效果比嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物差，這可能是由于發(fā)酵物與培養(yǎng)物的原培養(yǎng)基成分不同因而代謝產物成分不同、兩者培養(yǎng)發(fā)酵時間不同因而代謝產物數量也不同引起的，嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物培養(yǎng)18h大大超過牛奶發(fā)酵的時間約4h；

2、牛奶發(fā)酵物及析出液的抑菌效果無明顯差別，也說明牛奶發(fā)酵物中對細菌的抑制作用并非菌體而是其代謝產物；

3、調整pH值后的析出液、牛奶培養(yǎng)基抑菌效果與未調整的效果無明顯差別，也說明其抑菌作用并非是pH值的變化引起的；同時也說明嗜酸乳桿菌牛奶發(fā)酵物pH值變化幅度均在這6種細菌的適應范圍內。

三、結論

被視為第三代乳酸發(fā)酵劑的嗜酸乳桿菌，其真正起到抑菌作用的是它的代謝產物的某些物質而非菌體本身也不是代謝產物中酸的因素；嗜酸乳桿菌的代謝產物對不同細菌抑菌能力也不同；由嗜酸乳桿菌發(fā)酵的牛奶產品同樣具有抑制作用，所以多喝酸奶可調節(jié)腸道健康。

參考文獻：

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