HPLC法測(cè)定復(fù)方青黛丸中歐前胡素的含量

高文平 馮澤海 劉 成 李 娟 陜西醫(yī)藥控股集團(tuán)天寧制藥有限責(zé)任公司（綏德718000）

復(fù)方青黛丸是由青黛、土茯苓、白芷、丹參、紫草等中藥組成的復(fù)方制劑。收載于《中國(guó)藥典》2010年版一部。具有清熱涼血，解毒消斑的功效。臨床上常用于治療血熱所致的白疕、血風(fēng)瘡；銀屑病進(jìn)行期、玫瑰糠疹等。筆者通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方青黛丸中歐前胡素的含量，以進(jìn)一步提高該藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥 儀器：Waters515型HPLC系統(tǒng)；Waters2487型雙通道此外檢測(cè)器；KQ250型超聲波清洗器（昆山市淀山湖檢測(cè)儀器廠）；BP211D型電子天平（賽多利士）。

試藥：歐前胡素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所11826—200410）；甲醇（色譜純）；乙晴（色譜純）；純化水；復(fù)方青黛丸（陜西醫(yī)藥控股集團(tuán)天寧制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：120618，111209，111106）

2 方法學(xué)考察 2.1 色譜條件 色譜柱：PromosiL C18 100?分析柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙晴－水（47∶53）；流速：1.0mL／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：300nm；理論塔板數(shù)17381。

2.2 溶液制備 2.2.1對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取歐前胡素對(duì)照品2.47mg置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成對(duì)照品貯備液（每1mL含歐前胡素49.4μg）。再精密量取對(duì)照品貯備液1mL置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得歐前胡素對(duì)照品溶液（每1mL含歐前胡素4.94μg）。

2.2.2 樣品溶液的制備：取本品適量，研細(xì)，取約5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率250w，頻率25kHz）60分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 實(shí)驗(yàn)方法 2.3.1 專(zhuān)屬性試驗(yàn)：取按標(biāo)準(zhǔn)處方量及制法制得不含白芷的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照溶液。精密吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液與陰性對(duì)照溶液各10μL，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照溶液在與對(duì)照品溶液和供試品溶液色譜峰相應(yīng)位置上無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明陰性對(duì)照品溶液對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)干擾，方法專(zhuān)屬性良好，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.3.2 線性關(guān)系考察：分別精密量取歐前胡素對(duì)照品貯備液（49.4μg／mL ）0.1、0.5、1、2、3mL于10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，相應(yīng)濃度（C）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為 A＝22833.6692C－2313.4912（r＝0.9998），線性范圍0.494～14.820μg／mL，結(jié)果表明峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度試驗(yàn)：精密吸取2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，歐前胡素峰面積的RSD為0.44%，表明精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品（120618）5份，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣依法測(cè)定歐前胡素含量。結(jié)果歐前胡素含量的RSD為1.24%，表明重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液（120618）與對(duì)照品溶液各10μL，分別于0、2、4、6、8、12h測(cè)定，結(jié)果峰面積積分值的RSD分別為1.64%與0.88%，表明供試品溶液與對(duì)照品溶液在12h基本內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6 回收率試驗(yàn)：取6份已知含量的樣品（120618），分別精密加入歐前胡素對(duì)照品溶液（濃度4.94μg／mL）適量，揮干，按正文方法進(jìn)行處理和測(cè)定，計(jì)算回收率，測(cè)得歐前胡素的平均回收率為99.05%（RSD ＝0.66%）。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 歐前胡素加樣回收率

2.3.7 樣品測(cè)定：照2.2.2項(xiàng)的處理方法，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀。測(cè)定3批樣品，結(jié)果3批樣品中（批號(hào)120618，111209，111106）歐前胡素的含量分別為：0.0474、0.0446、0.0439mg／g。

3 討論與結(jié)論 3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 歐前胡素在202、218、248、300nm處均有吸收，《中國(guó)藥典》（2010年版一部）“白芷”含量測(cè)定中檢測(cè)波長(zhǎng)選用了300nm，故也選用300nm作為歐前胡素的檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相的選擇 本試驗(yàn)曾參考文獻(xiàn)［1－4］先后試用甲醇－水體積比（55：45）、（60：40），乙腈－水體積比（52：48）、（47：53）等不同比例作為流動(dòng)相測(cè)定，結(jié)果乙腈－水（47：53）能將歐前胡素與其它雜質(zhì)峰較好的分離，故選用此流動(dòng)相。

3.3 樣品提取方法的選擇 試驗(yàn)中曾采用甲醇和乙醚作為提取溶媒，對(duì)比了超聲提取、回流提取、索氏提取等方法，結(jié)果甲醇超聲提取法結(jié)果優(yōu)于其他方法。

3.4 超聲時(shí)間的選擇 將供試品分別用50mL甲醇超聲處理15min，30min，45min，60min。結(jié)果表明，選擇超聲提取60min歐前胡素含量最高。

試驗(yàn)表明，本測(cè)定方法簡(jiǎn)單，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，靈敏、重現(xiàn)性好，可做為該制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版（一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：107.

［2］陸廷勇.HPLC法測(cè)定復(fù)方青黛膠囊中歐前胡素的含量［J］.齊魯藥事，2011，30（12）：688－689.

［3］唐福林，黎德南，韋翠吉，等.HPLC法測(cè)定克痢痧微丸中歐前胡素的含量［J］.廣西工學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，22（2）：78－80.

［4］高文平，李 拜，袁云剛.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方青黛丸中靛玉紅含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2007，16（17）：28.