p53和Ki67在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其臨床意義

葉 斌 王西川 雷 蕾 游莉斯

結(jié)直腸癌是常見的惡性腫瘤之一。近年來，大腸癌的發(fā)病率在我國呈逐年上升趨勢，在上海已超過胃癌成為第二常見的惡性腫瘤［1］。

結(jié)直腸癌患者的生存率取決于腫瘤的檢出時間，晚期大腸癌患者5年生存率為7%，而早期患者5年生存率則可高達(dá)92%。然而超過57%的患者確診時癌細(xì)胞已轉(zhuǎn)移［2］。結(jié)直腸癌標(biāo)志物的檢測可反映腫瘤的生物學(xué)特性，對診斷、治療及預(yù)后具有重要意義。p53基因是重要的抑瘤基因，分為野生和突變2種亞型，是細(xì)胞增生的主要負(fù)調(diào)控子，該基因的突變或缺失是導(dǎo)致許多腫瘤發(fā)生的原因。Ki67是1種細(xì)胞增殖核抗原，是1種周期相關(guān)基因，其表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、分期、轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究采用免疫組化方法檢測結(jié)直腸管狀腺瘤和結(jié)直腸癌組織中p53蛋白和Ki67的表達(dá)情況，以探討其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集我院普外科2007年4月～2010年7月的71例結(jié)直腸癌手術(shù)標(biāo)本，其中男性40例，女性31例，年齡32～86歲，中位年齡68歲;同時收集結(jié)直腸管狀腺瘤手術(shù)標(biāo)本16例用于對照，其中男性9例，女性7例，年齡37～78歲，中位年齡64歲。標(biāo)本均經(jīng)組織病理檢查確診;患者術(shù)前均未接受過放化療。結(jié)直腸癌患者臨床分期按2007版AJCC頒布的結(jié)直腸癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn):Ⅰ期12例，Ⅱ期23例，Ⅲ期32例，Ⅳ期4例。結(jié)直腸癌分化程度:高分化腺癌24例，中分化腺癌35例，低分化腺癌12例。結(jié)直腸癌浸潤深度:浸潤達(dá)漿膜層者31例，浸潤未達(dá)漿膜層者40例。周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況:發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者35例，未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者36例。

1.2 方法

采用免疫組化PV-9000法。所有抗體均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。石蠟包埋，制成4 μm厚的切片。脫蠟、水化組織切片;高壓鍋抗原熱修復(fù);3%H2O2去離子水孵育以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶;滴加一抗，4℃過夜;PBS沖洗，滴加聚合酶輔助劑，37℃孵育20 min;PBS沖洗后滴加辣根酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG多聚體，37℃孵育30 min;應(yīng)用DAB溶液顯色;自來水沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片。

1.3 結(jié)果判斷

于顯微鏡下觀察，每例觀察2張切片，每張切片隨機(jī)選擇10個高倍視野，每個視野計(jì)數(shù)100個腫瘤細(xì)胞，取其平均值為細(xì)胞的陽性率。p53及Ki67的結(jié)果判斷:細(xì)胞核呈現(xiàn)清晰的棕黃色顆粒為陽性，按陽性細(xì)胞所占的比例及顯色深度分為，陽性細(xì)胞數(shù)所占比例＜10%為陰性(－);10%～25%為弱陽性(+)，顯色淺，顆粒細(xì);26%～50%為中度陽性(++)，顯色較深;＞50%為強(qiáng)陽性(+++)，顯色深，顆粒粗。

1.4 統(tǒng)計(jì)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 癌組織與腺瘤組織中p53和Ki67的表達(dá)及比較

免疫組化結(jié)果顯示，p53蛋白和Ki67主要表達(dá)于細(xì)胞核。71例結(jié)直腸癌標(biāo)本中p53蛋白和Ki67表達(dá)陽性率分別為40.85%(29/71)和77.46%(55/71);16例結(jié)直腸管狀腺瘤標(biāo)本中p53蛋白和Ki67表達(dá)陽性率分別為6.25%(1/16)和25.00%(4/16);兩者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

2.2 結(jié)直腸癌組織中p53和Ki67蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

71例結(jié)直腸癌中，p53蛋白的陽性表達(dá)與臨床分期、浸潤深度、組織學(xué)分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。Ki67的陽性表達(dá)與組織學(xué)分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P＞0.05);但與臨床分期和浸潤深度有關(guān)(P＜0.05)(表2)。

表1 結(jié)直腸癌組織和腺瘤組織中p53和Ki67蛋白的表達(dá)(例，%)

表2 結(jié)直腸癌組織中p53和Ki67蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

2.3 結(jié)直腸癌組織中p53和Ki67蛋白表達(dá)之間的關(guān)系

71例結(jié)直腸癌中，p53和Ki67蛋白同為陽性者26例，同為陰性者13例，兩者之間呈顯著相關(guān)(γ=0.508，P=0.000)，見表3。

表3 p53和Ki67在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析(例)

3 討論

p53基因是1個非常重要的抑癌基因。它與細(xì)胞周期蛋白(cyclins)結(jié)合形成復(fù)合體，抑制依賴細(xì)胞周期蛋白的相關(guān)激酶(CDKs)活性，使細(xì)胞停滯在G1期或引起細(xì)胞程序性死亡［3］。p53基因大約有50%［4］的突變率，當(dāng)p53基因發(fā)生突變時，可導(dǎo)致穩(wěn)定的蛋白質(zhì)不能完成抑制細(xì)胞增殖的作用，并且促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，侵襲力增強(qiáng)，使p53基因由抑癌基因轉(zhuǎn)為原癌基因［5］。本研究結(jié)果顯示，p53蛋白在結(jié)直腸癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于腺瘤組織，結(jié)果基本與李靜等［6］相符。袁家賓等［7］報道，p53 蛋白與 Dukes分期相關(guān)，C期的陽性表達(dá)顯著高于A期和B期(P＜0.05)。本研究中，蛋白p53在Ⅲ、Ⅳ期的陽性表達(dá)顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期(P＜0.05)，與上述報道相符。而且p53蛋白表達(dá)在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。上述結(jié)果提示p53突變與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，惡性細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

Ki67是應(yīng)用廣泛的增殖細(xì)胞標(biāo)志之一，在細(xì)胞凋亡中S、G2、M期均有表達(dá)，主要定位于細(xì)胞核，在有絲分裂中起著維持DNA結(jié)構(gòu)的重要作用［8］。有研究顯示Ki67參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展［9］，可作為診斷、預(yù)測療效和預(yù)后等方面的標(biāo)志物。

本組病例中，結(jié)直腸腺癌Ki67的陽性表達(dá)率高于腺瘤(P＜0.05)。Ki67的陽性表達(dá)在不同臨床分期和浸潤深度的結(jié)直腸癌標(biāo)本中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而在結(jié)直腸腺癌的不同組織學(xué)類型組、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。提示Ki67對鑒別診斷腺癌和腺瘤有重大意義。國外有學(xué)者研究指出:癌細(xì)胞分化程度越低，以及伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Ki67表達(dá)越強(qiáng)［8，10］。本結(jié)果似有不同，有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，結(jié)直腸癌中p53及Ki67基因表達(dá)上調(diào)，與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，將兩者作為生物標(biāo)志物進(jìn)行聯(lián)合檢測，有利于對結(jié)直腸癌患者惡性程度及預(yù)后的評估。

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