34βE12、CK5/6、p63、SMA 在乳腺增生、不典型增生與原位癌鑒別診斷中的價(jià)值

劉國(guó)新 馬 沛 易建華

乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變(IDPL)是一類常見的危害女性健康的病變，乳腺非典型增生和早期原位癌的鑒別對(duì)于臨床治療方案的選擇具有提示意義，對(duì)乳腺非典型增生與早期原位癌，采用蘇木精-伊紅(HE)染色很難鑒別，需要采用免疫組化(IHC)染色才能鑒別。本研究采用免疫組化方法，檢測(cè)34βE12、CK5/6、p63、SMA在乳腺增生、不典型增生及原位癌組織中的表達(dá)情況，探討其在乳腺良惡性病變鑒別診斷中的價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料

收集2008年～2011年湖北鄖縣婦幼保健院及外院收治并確診的30例乳腺普通型增生(UDH)、30例非典型導(dǎo)管增生(ADH)、20例導(dǎo)管原位癌(DCIS)和20例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌(IDC)?？?4βE12、CK5/6、p63 和SMA單克隆抗體及試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)公司產(chǎn)品。

1.2 免疫組織化學(xué)染色

采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶(SP)法進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測(cè)，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代一抗作為陰性對(duì)照，已知陽性的乳腺組織切片作為陽性對(duì)照，操作步驟按SP試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 陽性判定標(biāo)準(zhǔn)

鏡下觀察切片中陽性著色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞比例，按許良中等評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)［1］進(jìn)行綜合判定。每張切片陽性細(xì)胞著色強(qiáng)度評(píng)分按無著色、黃色、棕黃色和棕褐色分別記為0、1、2、3分;陽性細(xì)胞數(shù)＜5%、5%～25%、26%～50%和＞50%，分別記為0、1、2和3分。根據(jù)上述2項(xiàng)指標(biāo)的乘積將最后結(jié)果分為4級(jí):0～1分為(－);2～4分為(+);5～7分為(++);≥8分為(+++)，其中(+)～(+++)為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 34βE12 表達(dá)

34βE12陽性顆粒分布于乳腺上皮細(xì)胞胞質(zhì)中，UDH組30例34βE12均呈陽性表達(dá)，均為(++)～(+++);ADH組30例34βE12均呈陽性表達(dá)，多為(++)～(+++);DCIS組20例中6例34βE12呈陽性表達(dá)，多為(+)，較UDH組及ADH組明顯下降(P＜0.05);IDS組20例中4例34βE12呈陽性表達(dá)，均為(+)，與UDH組及ADH組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

2.2 CK5/6 表達(dá)

CK5/6陽性顆粒分布于乳腺上皮細(xì)胞胞質(zhì)中，UDH組30例CK5/6均呈陽性表達(dá)，多為(++)～(+++);ADH組30例中4例CK5/6呈陽性表達(dá)，均為(+)，較UDH組明顯下降(P＜0.05);DCIS組20例中3例CK5/6呈陽性表達(dá)，均為(+);IDS組20例中1例CK5/6呈陽性表達(dá)，為(+)，見表1。

表1 34βE12、CK5/6、p63、SMA 在乳腺良惡性病變中的表達(dá)情況

2.3 p63 表達(dá)

p63陽性顆粒分布于肌上皮細(xì)胞的胞核，UDH組30例P63均呈陽性表達(dá)，多為(++)～(+++);ADH組30例p63均呈陽性表達(dá)，多為(+)～(++)，與UDH組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);DCIS組20例p63均呈陽性表達(dá)，多為(+)，與UDH組及ADH組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05);IDS組20例p63均呈陰性表達(dá)，與UDH組、ADH及DCIS組比較明顯下降(P＜0.05)，見表1。

2.4 SMA 表達(dá)

SMA陽性顆粒分布于肌上皮細(xì)胞的胞質(zhì)中，UDH組30例SMA均呈陽性表達(dá)，多為(++)～(+++);ADH組30例SMA均呈陽性表達(dá)，多為(+)～(++)，與 UDH組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);DCIS組20例SMA均呈陽性表達(dá)，多為(+)～(++)，與 UDH組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);IDS組20例中2例 SMA呈陽性表達(dá)，且為(+)，較UDH組、ADH組及 DCIS組明顯減少(P＜0.05)，見表1。

3 討論

乳腺增生、不典型增生及原位癌一直是鑒別診斷中的難點(diǎn)，大部分病例通過形態(tài)學(xué)能夠鑒別，但仍有部分病例需要通過免疫組織化學(xué)檢查進(jìn)一步明確診斷。

34βE12是由細(xì)胞角蛋白1、5、10和14按一定比例混合而成的高分子量細(xì)胞角蛋白組合。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示其在 UDH、ADH中均呈中-高強(qiáng)度著色，而在DCIS、IDC 中大部分呈陰性表達(dá)，這與 Lacroix-Triki［2］的研究一致。由此可見，34βE12可作為乳腺病變鑒別診斷中的標(biāo)記物，上皮細(xì)胞34βE12表達(dá)缺失時(shí)高度提示為癌;大量上皮細(xì)胞表達(dá)34βE12，且為細(xì)胞膜強(qiáng)陽性時(shí)，則應(yīng)多考慮為良性病變。

CK5/6是1種基底細(xì)胞的標(biāo)記物，在正常組織中，鱗狀上皮和導(dǎo)管上皮的基底細(xì)胞以及部分鱗狀上皮生發(fā)層細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞和間皮細(xì)胞呈陽性表達(dá)。本組資料中顯示，除了基底層細(xì)胞呈陽性外，腺腔內(nèi)部分細(xì)胞也呈陽性，ADH中間型細(xì)胞則減少，表現(xiàn)為腺腔內(nèi)表達(dá)CK5/6的細(xì)胞減少。在部分腫瘤性病變的導(dǎo)管中心可見一些梭形小細(xì)胞呈CK5/6陽性表達(dá)，考慮為殘存的導(dǎo)管上皮細(xì)胞，而不是腫瘤細(xì)胞［3］。CK5/6在UDH中均為陽性表達(dá)，這與Rabban［4］的研究結(jié)果一致。而在ADH、DCIS及IDS中大部分呈陰性表達(dá)，說明在普通型增生和腫瘤增生性組織中CK5/6表達(dá)存在明顯差異。

p63基因位于染色體3q27片段，與p53屬同源基因，均為腫瘤抑制基因［5，6］，有文獻(xiàn)［7］表明它是所有肌上皮抗體中唯一標(biāo)記核陽性的，在血管平滑肌和肌纖維母細(xì)胞等間質(zhì)細(xì)胞中不表達(dá)，在良性病變中接近100%的陽性表達(dá)。本組研究顯示，在UDH、ADH及DCIS組織中p63均呈陽性表達(dá)，而在IDS組織中均呈陰性表達(dá)，由此認(rèn)為p63是乳腺肌上皮較好的標(biāo)記物，有較強(qiáng)的特異性和敏感性，對(duì)乳腺病變的診斷起到很好的輔助作用。

SMA是1種標(biāo)記平滑肌的肌動(dòng)蛋白，可以與平滑肌肌動(dòng)蛋白α異構(gòu)體反應(yīng)，本組實(shí)驗(yàn)顯示SMA在UDH、ADH及部分DCIS的腺上皮周圍呈明顯的彌漫陽性著色，而在IDC中未見明顯陽性表達(dá)，但SMA同時(shí)也在間質(zhì)肌纖維母細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞中表達(dá)。盡管這可以作為很好的內(nèi)對(duì)照，但也是SMA抗體的缺點(diǎn)，它易出現(xiàn)背景染色，影響診斷。所以認(rèn)為SMA是1種敏感性較好但特異性較差的標(biāo)記物。

綜上所述，我們?cè)趯?shí)際工作中最好聯(lián)合運(yùn)用34βE12、CK5/6、p63、SMA 這4 種抗體，同時(shí)一定要以光鏡下形態(tài)學(xué)的觀察為基礎(chǔ)，這樣才能明確診斷，為臨床提供可靠的診療依據(jù)。

［1］許良中，楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)〔J〕.中國(guó)癌癥雜志，1996，6(4):229.

［2］Lacroix-Triki M，Mery E，Vaigt JJ，et al.Value of cytokeratin 5/6 immunostaining using D5/6 B4 antibody in the spectrum of proliferative intraepithelial lesions of the breast:a comparative study with 34βE12 antibody〔J〕.Virchows Arch，2003，442:548.

［3］Otterbach F，Bankfalvi A，Bergner S，et al.Cytokeration5/6 immunohistochemistry assists the differential diagnosis of atypical proliferations of the brest〔J〕.Histopathology，2000，37(3):232.

［4］Rabban JT，Koemer FC，Lerwill MF.Solid papillary ductal carcinoma in situ versus cytokeratin 5/6〔J〕.Hum Pathol，2006，37(7):787.

［5］Strano S，Rossi M，F(xiàn)ontemaggi G，et al.From P63 to P53 across P73〔J〕.FEBS Lett，2001，490(3):163.

［6］Barbareschi M，Pecciarini L，Cangi MG，et al.P63，a P53 homologue，is a selective nuclear marker of myoepithelial cells of the human breast〔J〕.Am J Surg Pathol，2001，25(8):1054.

［7］Tse GM，Tan PH，Moriya T.The role of immunohistochemistry in the differential diagnosis of papillary lesions of the breast〔J〕.J Clin Pathol，2009，62(5):407.