紹興地區(qū)0～14歲兒童纖維結(jié)合蛋白參考區(qū)間建立

葛國興， 鐘亞萍， 梁美春

(紹興市人民醫(yī)院浙江大學(xué)紹興醫(yī)院，浙江紹興 312000)

纖維結(jié)合蛋白(fibronectin，F(xiàn)n)是一種具有廣泛生物學(xué)功能的雙鏈糖蛋白，與纖維膠原系統(tǒng)有特別的親和力，能與衰老破壞的細(xì)胞組織碎片、膠原碎片、纖維蛋白、纖維蛋白原、細(xì)菌等物質(zhì)結(jié)合，促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬這些免疫復(fù)合物［1］。我們對本地區(qū)0～14歲健康兒童作了Fn參考區(qū)間統(tǒng)計(jì)。

材料和方法

一、調(diào)查對象

收集紹興市人民醫(yī)院門診求診或體檢兒童，有兒內(nèi)科醫(yī)生協(xié)助篩選，按美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)C28-A2文件要求［2］，收集652名，年齡0～14歲，其中，男童439名，女童213名。納入對象為既往營養(yǎng)狀況正常、無肝腎心肺功能損害，近期無重大創(chuàng)傷或用藥史，檢查項(xiàng)目包括:(1)肝功能:總膽紅素、直接膽紅素、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、總蛋白、白蛋白、球蛋白、堿性磷酸酶、γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶;(2)腎功能:尿素氮、肌酐、尿酸;(3)血糖;(4)血脂:甘油三酯、膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇;(5)電解質(zhì):K+、Na+、Cl-、Ca2+、Mg2+、P-。

二、儀器與試劑

使用美國雅培公司Abbott Aeroset型全自動生化分析儀進(jìn)行檢測，質(zhì)控品為美國Beckman coulter公司生產(chǎn)的兩水平質(zhì)控。質(zhì)控靶值按室內(nèi)質(zhì)控要求自行測定、s，該值作為該批號質(zhì)控品相應(yīng)靶值(批號 M102411，靶值 141.0，s 7.5;M102412，靶值 253.0，s 10.0)。

三、樣本測定方法

年齡稍大兒童檢測前一天晚餐即不進(jìn)高脂膳食，受檢者空腹12 h，清晨坐位前臂靜脈取血3 mL;年齡較小嬰兒抽血前空腹3～6 h，平躺手臂或頭皮靜脈抽血，離心，分離血清，上機(jī)檢測。檢測方法:利用配套校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)后，分別測定，同時(shí)將質(zhì)控品作為常規(guī)標(biāo)本隨機(jī)加入測定序列中，按質(zhì)控規(guī)則判斷質(zhì)控結(jié)果，確保結(jié)果在控。

四、參考區(qū)間建立

按CLSI C28-A2要求，根據(jù)對原始數(shù)據(jù)Fn水平升高影響因素的分析，建立排除標(biāo)準(zhǔn)，再根據(jù)數(shù)據(jù)分布類型，選擇使用傳統(tǒng)統(tǒng)計(jì)法或穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)技術(shù)剔除離群值，得到Fn參考范圍建立的數(shù)據(jù)，確定參考區(qū)間。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用描述性統(tǒng)計(jì)分析對參考兒童的Fn值利用SPSSfor windows 17.0分別進(jìn)行男女標(biāo)本測定結(jié)果分布頻度分析與判斷，不同性別、年齡組間的比較采用方差分析(一般線性模型單變量分析，組間兩兩比較采用Bonferroni)，分別用百分位數(shù)法和正態(tài)近似法制定參考區(qū)間，α雙側(cè)=0.05。

結(jié) 果

Fn參考區(qū)間的建立:將0～14歲658名男性和女性兒童原始數(shù)據(jù)先進(jìn)行資料正態(tài)性檢驗(yàn)。

圖1 658例健康兒童反趨勢正態(tài)QQ曲線圖

從男性和女性兒童Fn原始數(shù)據(jù)反趨勢正態(tài)QQ圖可以看出，均有3點(diǎn)數(shù)據(jù)明顯高于+0.4標(biāo)準(zhǔn)偏差，明顯偏離群值，因此需要?jiǎng)h除后再進(jìn)行資料數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，得到652例符合要求數(shù)據(jù)。

圖2 658名健康兒童帶正態(tài)性曲線直方圖

652名兒童分別按特性分為3組:0～1歲、2～3歲、4～14歲統(tǒng)計(jì)學(xué)參考區(qū)間。

由表1可見，方差分析男性兒童和女性兒童組P均＞0.05，表明同性別不同年齡段兒童統(tǒng)計(jì)學(xué)差異不明顯，因此數(shù)據(jù)可以合并處理;而同年齡段男女性別比較P＞0.05，說明男女兒童差異不明顯。僅個(gè)別不同年齡段男女兒童比較有差異，從數(shù)據(jù)上看各兒童組正態(tài)近似法所得范圍的上下限均略低于百分位數(shù)法，由于資料是近似正態(tài)分布，故用百分位數(shù)較合適。

從圖3觀察各年齡段男性和女性兒童Fn水平趨勢可見，女性兒童高于其男性兒童期，男性兒童在總體均數(shù)線下側(cè)，女性兒童在上側(cè)，由于同性別各年齡段方差基本一致(P＞0.05)因此其參考區(qū)間男童和女童相應(yīng)各年齡段可以分別合并統(tǒng)計(jì)。

表1 紹興地區(qū)0～14歲兒童Fn參考區(qū)間(μg/mL)

圖3 男性、女性兒童各年齡段Fn水平變化趨勢

討 論

Fn廣泛存在于細(xì)胞表面、血漿、細(xì)胞外液、結(jié)締組織及大部分基底膜，F(xiàn)n可在細(xì)胞表面形成一個(gè)堅(jiān)固的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，在伸展和新生細(xì)胞及其鄰近的下層組織間起橋梁黏附作用，使細(xì)胞與細(xì)胞之間以及細(xì)胞與其他基質(zhì)間相互黏附，從而具有調(diào)節(jié)細(xì)胞附著、移行和分化的作用［3-4］。因此，F(xiàn)n對保持人體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定起重要的作用;Fn、腺苷脫氨酶(ADA)在肝硬化診斷中有應(yīng)用價(jià)值，F(xiàn)n是一組高分子蛋白，以可溶解形式存在于血漿和體液中，主要反映在肝硬化和肝纖維化，如酒精性肝炎其Fn明顯降低［5］。很多研究表明Fn在感染、腫瘤、腎病、肝病、結(jié)締組織病等多種疾病中Fn均會發(fā)生變化。

參考區(qū)間是解釋檢驗(yàn)結(jié)果正常與否的依據(jù)。受生物學(xué)特性的影響，如年齡、性別、種族、居住地及妊娠等;受檢驗(yàn)方法的影響，不同方法的參考區(qū)間可不同［6］。因此，各臨床實(shí)驗(yàn)室有必要驗(yàn)證自己的參考范圍，簡單地引用文獻(xiàn)或直接采用廠商給定的參考區(qū)間是不可取的。

我們對本地區(qū)652名0～14歲健康兒童做了統(tǒng)計(jì)分析，按年齡段0～1歲、2～3歲、4～14歲分3組，得到健康兒童Fn參考范圍，男童為131.9～270.8 μg/mL、132.9～284.8 μg/mL、132.5～270.3 μg/mL ，合并后為132.8～272.2 μg/mL;女童為142.6.5～306.4 μg/mL、135.6～284.2 μg/mL、136.0～264.0 μg/mL，合并后為137.5～285.4 μg/mL。數(shù)據(jù)上看同年齡段不同性別兒童統(tǒng)計(jì)學(xué)差異不明顯，而個(gè)別年齡段(男童0～1歲，女童2～3歲相互比較，P＜0.01)，因此對0～14歲男女兒童作了分開報(bào)道，理論上嬰幼兒性別均未發(fā)育，F(xiàn)n指標(biāo)與性激素并無關(guān)聯(lián)，我們分析個(gè)別不同年齡段有差異可能是抽樣誤差造成或不同年齡組間由于嬰幼兒器官系統(tǒng)發(fā)育未成熟而造成，有待更多文獻(xiàn)研究。本試劑產(chǎn)品說明書的參考區(qū)間為180～280μg/mL，無性別與年齡分組，從我們數(shù)據(jù)上觀察兒童參考區(qū)間下限明顯低于說明書，若沿用原廠家參考區(qū)間可能使部分健康兒童被誤判。本研究發(fā)現(xiàn)，原始數(shù)據(jù)Fn水平呈偏態(tài)分布，推薦使用百分位數(shù)法計(jì)算結(jié)果;若推薦臨床使用，則Fn參考區(qū)間在試行一段時(shí)間后，需做進(jìn)一步驗(yàn)證和評價(jià)［2］。

［1］梁海珊，陳?；ǎ铉鴱?qiáng).消化道腫瘤患者血清纖維結(jié)合蛋白的測定［J］.山東醫(yī)藥，2007，47(32):109-110.

［2］National Committee for Clinical Laboratory Standards.How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory［S］.C28-A2，NCCLS，2000.

［3］崔玉寶，周 鷹，朱巨錦，等.血漿冷沉淀制品佐治肛瘺的臨床觀察［J］.中華現(xiàn)代全科醫(yī)學(xué)雜志，2002，2(4):10-12.

［4］劉薇娜，崔玉寶，周 鷹，等.冷沉淀用于肛腸疾病外科術(shù)后的創(chuàng)面愈合［J］.中國輸血雜志，2002，15(6):385-386.

［5］鄭曉豐.m-AST、RBP、PA、ADA和FN在肝臟疾病診斷中的臨床評價(jià)［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2009，24(12):886-888.

［6］馮仁豐.臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)［M］.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2007:212.