血清腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子水平與血管性癡呆的相關(guān)性研究

馮學(xué)敏， 劉曉冰， 張仁生， 周春奎

血管性癡呆(vascular dementia，VD)是指因多次腦卒中或長期慢性腦缺血等腦血管病變引起的腦損害所致的癡呆。腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)屬于神經(jīng)營養(yǎng)因子家族，支持多種神經(jīng)元生存、發(fā)育、分化及修復(fù)，在海馬有豐富的表達，參與學(xué)習(xí)和記憶過程［1］，近年來越來越多的證據(jù)表明BDNF與學(xué)習(xí)和記憶等認(rèn)知過程密切相關(guān)［2，3］，在改善認(rèn)知功能方面起著重要的作用。有動物試驗推測血清中BDNF的水平或許可反映腦中BDNF的水平［4］。但目前關(guān)于VD患者血清中BDNF濃度表達的報道較少。本文通過對3組中血清BDNF的水平進行比較，探討B(tài)DNF與VD的相關(guān)性。

1 資料和方法

1.1 研究對象

1.1.1 血管性癡呆組 收集2010年3月 ～2010年10月入住我院神經(jīng)內(nèi)科缺血性腦血管病患者，用簡易智能量表(Mini-Mental State Examnation，MMSE)檢測患者的智能并進行初篩，用美國精神病學(xué)會的精神障礙診斷和統(tǒng)計手冊(DSM-IV)標(biāo)準(zhǔn)診斷癡呆。所有VD患者的診斷均符合NINDS-AIREN標(biāo)準(zhǔn)。本組32例，男19例，女13例;年齡40～77歲，平均62.66±9.26歲;受教育年限平均5.94±2.71年;根據(jù)MMSE評分文盲(未受教育)≤17分、小學(xué)文化(受教育年限≤6年)≤20分、中學(xué)或以上(受教育年限﹥6年)≤24分，Hachinski缺血指數(shù)量表評分≥7分。

1.1.2 腦梗死組 同期住院腦梗死患者中，年齡、性別、受教育程度與VD組相匹配者35例，男19例，女16例;年齡46～77歲，平均61.49±8.78歲;受教育年限6.43±2.83年;經(jīng)臨床評估及體檢，無嚴(yán)重軀體疾病，MMSE評分文盲≥17分、小學(xué)文化≥20分、初中以上文化≥24分。

1.1.3 正常對照組 為本院同期健康體檢記憶及認(rèn)知功能正常者，共35例，其中男17例、女18例，年齡48～78歲，平均62.97±8.33 歲;受教育年限8.86±2.43 年。

1.2 方法 血液標(biāo)本采集及血清BDNF的測定:于非急性期進行神經(jīng)心理量表評定，并于評定后2d，抽取清晨空腹肘靜脈血4ml，置于促凝管中，室溫凝集60min，以1000r/min離心10min，取血清分裝于EP管中，置-80℃低溫冰箱凍存?zhèn)溆?。采用ELlSA法檢測血清BDNF，ELISA試劑盒購自美國R＆D生物公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 所得數(shù)據(jù)均用“社會科學(xué)統(tǒng)計軟件包”SPSS17.0作統(tǒng)計學(xué)處理。計數(shù)資料的比較用χ2檢驗，多組樣本均數(shù)的比較用單因素方差分析，兩兩比較用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 各組間相關(guān)病史及危險因素分析 高血壓病史3組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，說明高血壓病可能是VD的危險因素，糖尿病史、吸煙史、飲酒史比較，3組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)(見表1)。

2.2 3組血清中BDNF濃度比較 VD組、腦梗死組、正常組之間進行BDNF比較，統(tǒng)計采用單向方差分析(One-way ANOVA)。VD組血清中BDNF的平均濃度在3組中水平最低，腦梗死組血清中BDNF平均濃度在3組中水平最高。通過統(tǒng)計分析，VD組和正常組進行比較，P＞0.05，兩組間無統(tǒng)計學(xué)意義;VD組和腦梗死組進行比較，P＜0.05，兩組間有統(tǒng)計學(xué)意義;腦梗死組和正常組進行比較，P＞0.05，兩組間無統(tǒng)計學(xué)意義。(見表2、表3)

表1 3組相關(guān)病史及危險因素的比較

表2 3組血清中BDNF的ELISA實驗結(jié)果

表3 血清中BDNF在各實驗組間的比較

3 討論

眾多的研究均證實［5，6］，高血壓、高血糖與其正常者相比較，其VD的發(fā)生率明顯升高(P＜0.05)。本研究中，3組中伴隨疾病最多的是高血壓病，VD患者其高血壓構(gòu)成比分別與腦梗死組及正常組相比都具有明顯的差異。積極預(yù)防和控制高血壓可能會降低VD的發(fā)病率。但在本實驗中糖尿病在3組中并未見明顯的差異，考慮可能與本實驗樣本量小有關(guān)，若明確糖尿病與VD的相關(guān)性可能需進一步大樣本的研究。

缺血性腦血管病引起的癡呆是VD的主要形式，有研究表明在腦缺血早期，BDNF表達增高，其特異的功能受體TrKB表達也明顯上升，BDNF與TrkB相結(jié)合，產(chǎn)生相應(yīng)的效應(yīng)分子而對缺血的神經(jīng)元起保護作用［7，8］。Yamasaki等［9］也發(fā)現(xiàn)，腦缺血早期在海馬放射層BDNF的表達顯著增加。同時有研究發(fā)現(xiàn)［10，11］對缺乏BDNF基因的小鼠進行研究，發(fā)現(xiàn)其梗死灶面積明顯大于對照組，而提高內(nèi)源性BDNF水平可明顯減輕腦缺血后的神經(jīng)元損傷程度。向腦缺血大鼠側(cè)腦室內(nèi)注射BDNF，可明顯減少腦梗死灶的體積，促進感覺及運動功能的恢復(fù)［12］。

這些實驗結(jié)果提示腦缺血后BDNF反應(yīng)性增強對機體早期神經(jīng)元缺血、缺氧產(chǎn)生保護作用。Schabitz等［13］發(fā)現(xiàn)，BDNF顯著下調(diào)半暗帶的凋亡前體蛋白Bax的表達，并上調(diào)該區(qū)域抗凋亡蛋白Bcl-2的表達，抑制半暗帶腦細(xì)胞的凋亡，促進半暗帶腦細(xì)胞的存活。研究認(rèn)為caspase家族是凋亡的執(zhí)行者，BDNF能通過阻止caspase-3的活性而抑制細(xì)胞凋亡［14］。有動物實驗發(fā)現(xiàn)［15］，BDNF 在 VD 小鼠早期表達增多，后期表達持續(xù)降低。但Yasutake等［16］研究發(fā)現(xiàn)，AD患者外周血清中BDNF水平與正常對照組有明顯差異，而VD患者與正常對照組未見明顯差異。也有實驗［17］發(fā)現(xiàn)血管性認(rèn)知障礙患者與正常對照組外周血清中BDNF水平無明顯差異。

本文研究發(fā)現(xiàn)VD組患者血清BDNF濃度雖低于正常對照組，但無顯著性差異，與上述得出的結(jié)論一致。本研究發(fā)現(xiàn)，腦梗死組和正常組相比，雖然腦梗死組血清BDNF濃度稍高于正常組，但并無顯著性差異。薛永等［18］也發(fā)現(xiàn)腦梗死患者血清BDNF水平與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義。此結(jié)果與相關(guān)動物實驗結(jié)果并不完全相符合，腦梗死后人腦組織病理學(xué)檢查及BDNF在腦組織中表達情況國內(nèi)外罕見報道，腦梗死后人腦組織病理學(xué)檢查人體血清BDNF水平與腦梗死時大腦組織內(nèi)BDNF含量和時相變化是否一致仍需進一步研究。

在本研究中，3組中血清BDNF濃度水平在VD組最低，腦梗死組最高，對3組血清BDNF濃度水平進行統(tǒng)計學(xué)分析顯示:VD組和腦梗死組分別與正常對照組相比無顯著性差異，但VD組與腦梗死組相比有顯著性差異，我們考慮是否為腦梗死初期由于神經(jīng)元受損導(dǎo)致BDNF水平反應(yīng)性增高，但隨著神經(jīng)元受損的進一步加重以及BDNF的產(chǎn)生減少，導(dǎo)致腦梗死進展為血管性癡呆時BDNF下降，提示BDNF可能參與了腦梗死進展為血管性癡呆的病理生理過程。由于本研究標(biāo)本量較小，且可能有其他混雜因素影響，如患者在不同時間段的標(biāo)本是否有差異，不同檢測系統(tǒng)之間以及不同實驗方法之間的可比性等有待進一步探討。由于目前對血清中BDNF水平是否能表示腦組織中BDNF水平尚無明確定論，BDNF在血管性癡呆患者中表達及其作用有待更深入細(xì)致的研究。同時對于BDNF在腦梗死進展為血管性癡呆過程中如何發(fā)揮作用仍需大量的實驗去研究，其含量從腦梗死進展為血管性癡呆降低的機制以及是否可以通過外源性給予BDNF阻斷腦梗死進展為血管性癡呆需進一步的探討。

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