針刺對(duì)阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及SOD、MDA 的影響

王定雪，司 玲，劉 靜，許建陽

阿爾茨海默病(Alzheimer＇s disease，AD)，又稱老年性癡呆，臨床以記憶力減退為主要癥狀，常伴有其他認(rèn)知功能損害，是老年人較為常見的疾病。AD 的病因機(jī)制較為復(fù)雜，目前還沒有完全掌握其病因機(jī)制。但是有研究認(rèn)為，在AD 的形成與發(fā)展過程中氧化應(yīng)激反應(yīng)起著重要的推動(dòng)作用［1］。為此，本研究采用D-半乳糖、亞硝酸鈉腹腔注射造模的方法，觀察針刺對(duì)AD 大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及SOD、MDA 的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 清潔級(jí)SD 雄性大鼠40 只，體重(200±20)g(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，隨機(jī)分為空白組、模型組、對(duì)照組、針刺組，各組10 只。

1.2 方法

1.2.1 AD 動(dòng)物模型制備 除空白組不進(jìn)行造模處理，其余3組大鼠采用腹腔注射D-半乳糖(120 mg/kg)和亞硝酸鈉(45 mg/kg)復(fù)合造模［2］的方法模擬AD，連續(xù)6周;以Morris 水迷宮［3］實(shí)驗(yàn)中模型組大鼠出現(xiàn)逃避潛伏期的時(shí)間延長，穿環(huán)次數(shù)顯著減少為造模成功。

1.2.2 治療方法 針刺組從造模后第21 天開始，通過針刺四關(guān)穴［4］、足三里進(jìn)行干預(yù)治療。每次行針3 min，留針10 min。針刺強(qiáng)度為中度，10 d為一療程，間歇2 d，治療3個(gè)療程。對(duì)照組給予鹽酸多奈哌齊混懸液0.45 mg/kg 灌胃，療程同針刺組。空白組、模型組不做任何干預(yù)治療。

1.2.3 測試指標(biāo) 在給予對(duì)照組、針刺組最后一次治療后，采用Morris 水迷宮測試4組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。待大鼠禁食24 h 后，將大鼠脫臼處死，迅速斷頭后將大鼠頭部置于冰袋上快速剝離腦殼取出大腦，用4℃的生理鹽水將腦組織沖洗干凈，剪碎，放置于勻漿器中，加入9 倍的4℃生理鹽水，制備成10%的組織勻漿，2500 r/min，離心10 min，取上清液置4℃?zhèn)溆?。取上清液按ELISA 方法測SOD 活性、MDA 含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用±s 表示，組間比較采用方差分析，方差齊性時(shí)采用LSD 進(jìn)行兩兩比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 針刺對(duì)AD 大鼠逃避潛伏期和穿環(huán)次數(shù)的影響 模型組與空白組比較，模型組大鼠的平均逃避潛伏期時(shí)間明顯延長(P＜0.01)，穿環(huán)次數(shù)減少(P＜0.01);說明采用D-半乳糖和亞硝酸鈉復(fù)合模擬AD 的方法成功。針刺組、對(duì)照組與模型組比較，平均逃避潛伏期的時(shí)間減少(P＜0.01);大鼠的穿環(huán)次數(shù)增多(P＜0.05);針刺組與對(duì)照組比較，在逃避潛伏期時(shí)間與穿環(huán)次數(shù)上無明顯差異。提示針刺能改善AD 大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力(表1)。

2.2 針刺對(duì)大鼠腦組織SOD 活性和MDA 的影響針刺組及對(duì)照組、空白組大鼠腦組織SOD 活性均高于AD 模型組(P＜0.01)，MDA 的含量明顯減少(P＜0.01);針刺組與對(duì)照組比較，SOD 的活性、MDA 的含量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示針刺可增強(qiáng)大鼠腦組織抗氧化的能力，減少氧化損傷(表2)。

表1 針刺對(duì)AD 大鼠逃避潛伏期和穿環(huán)次數(shù)的影響(n=10;)

表1 針刺對(duì)AD 大鼠逃避潛伏期和穿環(huán)次數(shù)的影響(n=10;)

注:與模型組比較，①P＜0.01;②P＜0.05

表2 針刺對(duì)AD 大鼠腦組織SOD 活性和MDA 的影響(n=10;)

表2 針刺對(duì)AD 大鼠腦組織SOD 活性和MDA 的影響(n=10;)

注:與模型組比較，①P＜0.01

3 討 論

中國大約有600 萬AD 患者，占全球患者總數(shù)的1/4，65歲以上老年人AD 患病率高達(dá)10.1%［5］，且治療、護(hù)理費(fèi)用昂貴。隨著我國步入老齡化社會(huì)，將會(huì)有更多的人患病，給患者的家庭和社會(huì)帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。由于AD 的病因復(fù)雜，關(guān)于其發(fā)病機(jī)制的假說較多。有很多的研究表明，氧化應(yīng)激與AD 之間有著密切的聯(lián)系［6］，其中蛋白質(zhì)的氧化修飾在AD 的發(fā)病過程中發(fā)揮了重要作用［7］。在病理情況下，腦內(nèi)自由基的清除和產(chǎn)生平衡失調(diào)導(dǎo)致自由基堆積，從而對(duì)大腦產(chǎn)生氧化損傷［8］，進(jìn)而導(dǎo)致AD 的發(fā)生。反映氧化應(yīng)激造成大腦組織損傷較為常用的檢測指標(biāo)為MDA 及SOD［9］。MDA 是腦組織脂質(zhì)過氧化的代謝產(chǎn)物，能夠造成生物膜變性、破壞，從而影響蛋白質(zhì)的功能，表現(xiàn)出學(xué)習(xí)記憶能力的衰退。SOD 是機(jī)體清除自由基的關(guān)鍵酶，其主要作用是催化生物氧化產(chǎn)生超氧自由基，清除并阻止由氧自由基引發(fā)的連鎖反應(yīng)［10］。

本研究表明，模型組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降，且SOD 活性降低，MDA 含量增加，證明D-半乳糖和亞硝酸鈉造模成功。針刺組與模型組比較SOD活性增加、MDA 的含量減少，說明針刺具有抗氧化反應(yīng)和降低脂質(zhì)過氧化水平的作用。另外，行為學(xué)檢測結(jié)果表明，針刺在一定程度上改善了AD 大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能障礙，因而從一個(gè)側(cè)面提示可能隨著腦內(nèi)MDA 含量減少、SOD 活性增加，使得自由基對(duì)神經(jīng)元的損傷減少，從而改善和維持正常的學(xué)習(xí)記憶能力。

AD 屬中醫(yī)的癡呆、善忘、神疑的范疇［11］。中醫(yī)認(rèn)為該病病位在腦，病因病機(jī)多為本虛標(biāo)實(shí)，本虛主要為腎精虧損和氣血不足，標(biāo)實(shí)主要表現(xiàn)為痰瘀阻竅［12］。痰瘀不僅蒙蔽腦竅，而且阻礙正常氣血運(yùn)行，使腦氣不能與臟氣相接，腦失所養(yǎng)而成癡呆。選針刺四關(guān)穴(合谷、太沖)可以調(diào)節(jié)一身氣血的升降，起到上疏下導(dǎo)，開關(guān)宣竅，調(diào)暢氣機(jī)，活血通絡(luò)之功［13］。足三里具有健脾調(diào)胃，祛痰開竅的功效，從而使氣血生化有源，腦有所養(yǎng)。四關(guān)穴配足三里可以起到健腦開竅、祛痰活血的效果。

［1］賈建平，劉江紅.阿爾茨海默病發(fā)病機(jī)制及治療進(jìn)展［J］.中國現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志，2010，10(2):43-48.

［2］羅煥敏，陳子晟.一種新的老年癡呆動(dòng)物模型［J］.中國老年學(xué)雜志，2003，23(3):179-182

［3］Morris R G M，Garrud P，Rawlins J N P，et al.Place navigation impaired in rats with hippocampal lesions［J］.Nature，1982，297:681-683

［4］王 葳，李坤成，單保慈，等.針刺正常老年人“四關(guān)穴”的腦功能MRI 研究［J］.中國醫(yī)學(xué)影像技術(shù)，2006，22(6)829-831.

［5］李寶麗，唐 方.老年癡呆從腎虛論治機(jī)理探討［J］.山西中醫(yī)，2006，22(2):1-3.

［6］Smith M A，Rottkamp C A，Nunomura，et al.Oxidative stress in Alzheimer disease［J］.Biochim Biophys Acta，2000，1502(J):139-144.

［7］林玉坤，曾園山，屈澤強(qiáng)，等.氧化應(yīng)激與阿爾茨海默病［J］.解剖學(xué)研究，2009，31(1):67-70.

［8］Yan S D，Chen X，F(xiàn)u J，et al.RAGE and amyloid-beta peptide neurotoxicity in Alzheimer＇s disease ［J］.Nature.1996，382 (6593):685-691.

［9］喻南慧，黃勇攀，羅 俊.靈芝三萜類化合物對(duì)AD 模型大鼠腦組織中CAT、ACHE、SOD、MDA 的影響［J］.貴陽中醫(yī)學(xué)院報(bào)，2008，33(6):640-651.

［10］李鐘勇，張 鵬.美洛昔康對(duì)老年癡呆模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及腦組織SOD，MAO-B，MDA 的影響［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2011，28(2):99-103.

［11］蘇 芮，韓振蘊(yùn)，范吉平，等.中醫(yī)對(duì)老年性癡呆病因病機(jī)及中藥治療研究［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2011，26(9):1917-1920.

［12］胡起超，于 濤.老年性癡呆中醫(yī)證候及病因病機(jī)探析［J］.陜西中醫(yī)，2010，31(5):576-577.

［13］李東紅，段燦燦，郝石磊，等.針刺合谷、太沖對(duì)老年癡呆模型大鼠行為學(xué)及氧自由基的影響［J］.北京中醫(yī)藥，2010，29(4):311-313.