液相色譜-串聯(lián)質譜法測定植物油中阿維菌素和甲維鹽殘留

壽林飛，張文童，虞 淼，梁赤周

(1.浙江省農(nóng)藥檢定管理所，浙江 杭州 310021;2.南通市白蟻防治所，江蘇 南通 226001)

阿維菌素是一類具有殺蟲、殺螨、殺線蟲活性的十六元大環(huán)內(nèi)酯化合物，甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(簡稱甲維鹽)是以阿維菌素為原料經(jīng)過化學結構修飾得到的一種高效生物殺蟲劑［1］。阿維菌素和甲維鹽屬于高效廣譜殺蟲劑，已經(jīng)廣泛應用于蔬菜、瓜果、水稻、棉花、油菜、中藥材等各種農(nóng)作物中。

食用植物油是生活必需品，常見的食用油多為植物油脂，多從油菜等油料作物提取壓榨獲得，包括大豆油、花生油、菜籽油、芝麻油、棕櫚油、橄欖油、芥花籽油和葵花籽油等［2］。隨著人們消費水平的升高，對食品安全問題的要求也越來越高，近年來，食品安全事故頻出。2010年海南爆出轟動全國的“毒豇豆”事件，2011年青島連現(xiàn)三起“韭菜中毒”事件，及至今年山東濰坊農(nóng)戶使用劇毒農(nóng)藥“神農(nóng)丹”進行生姜種植，加上近年來一直熱議不斷的“地溝油”事件，這些問題引發(fā)了社會廣泛關注，將消費者對食品安全的質疑推上了高潮。農(nóng)藥殘留問題也不僅局限在蔬菜水果上，越來越多的消費者將目光集中在了油料作物及制品上。目前我國植物油中農(nóng)藥殘留檢測、指標的設置和檢測技術與發(fā)達國家相比差距很大［3］，對于植物油中農(nóng)藥殘留的檢測研究較少。

阿維菌素類藥物多采用以衍生化為基礎的熒光［4-6］或紫外［7-8］高效液相色譜方法檢測，但其前處理較復雜，檢測的特異性和靈敏度也不強，也有采用液相色譜-串聯(lián)質譜檢測阿維菌素和甲維鹽，多集中在蔬菜［9-10］、水果［11］、稻米［12］、茶葉［13］等基質中的殘留檢測，尚未見采用液相色譜-串聯(lián)質譜檢測植物油中阿維菌素和甲維鹽殘留的相關報道。本研究采用氨基固相萃取柱(NH2)凈化液相色譜-串聯(lián)質譜檢測植物油中阿維菌素和甲維鹽殘留，方法前處理簡單，檢出限低，易于操作。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑和材料

液相色譜-串聯(lián)質譜:TSQ Quantum 配Survey液相操作系統(tǒng) (美國Thermo Fisher Scientific 公司);GPC 凝膠色譜凈化裝置 (德國LCTech 公司);自動濃縮儀(Büchi R205 型，瑞士步琪有限公司);超聲波清洗器(KQ-50 型，昆山市超聲儀器公司);旋渦混合器(QT-2 型，上海琪特分析儀器有限公司);乙腈和甲醇(色譜純，美國Merck公司);試驗用水為去離子水;Envi-NH2固相萃取柱(500 mg，3 mL，美國Supelco 公司);有機濾膜，0.45 μm;阿維菌素(純度≥99%)和甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(純度≥99.5%)標準品購自德國Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司。

標準儲備液:分別準確稱取標準品0.010 0 g，用甲醇溶解定容至50 mL (200 mg·L-1)，-18℃保存，試驗中按需稀釋。

1.2 試驗方法

準確稱取2 g (精確到0.01 g)植物油樣品，置于10 mL 刻度試管中，用8 mL 二氯甲烷超聲溶解，渦旋3 min，待凈化。氨基柱分別用甲醇+二氯甲烷(5 mL+95 mL)5 mL 和二氯甲烷5 mL 預淋，待預淋液到達柱吸附層表面時，加入凈化液，棄去，用甲醇+二氯甲烷(5 mL+95 mL)5 mL洗脫至5 mL 刻度試管，擠干，氮氣緩慢吹干，加入甲醇1 mL，超聲溶解，加入甲醇定容至2 mL，過0.22 μm 有機濾膜，液相色譜-串聯(lián)質譜法測定。

1.3 色譜質譜條件

色譜柱:Phenomenex Luna C18(150 mm×2.0 mm，5 μm);柱溫:30℃。進樣量:10 μL;流動相:甲醇和含0.1%甲酸2 mmol·L-1乙酸胺水溶液85∶15 (V∶V);流速:0.3 mL·min-1。甲維鹽和阿維菌素保留時間分別為1.2 和3.7 min。

掃描方式:電噴霧正離子掃描;檢測方式:選擇反應監(jiān)測;噴霧電壓:4 200 V;毛細管溫度:350℃;碰撞氣氬氣:1.5 mTorr。定量離子對、定性離子對、碰撞能量等參數(shù)見表1。

表1 質譜多重反應監(jiān)測(MRM) 條件

2 結果與討論

2.1 GPC 凈化方法

試驗先利用GPC 凈化方法。凈化條件為:凝膠色譜柱:320 mm×25 mm;填料:Bio-Beads S-X3 凝膠填料40～80 μm (200～400 目);洗脫溶劑:環(huán)己烷-乙酸乙酯(1∶1，V∶V);流速:5 mL·min-1;洗脫程序:前600 s 流出液棄去，收集后續(xù)的洗脫液，每120 s 收集1 管，共收集10 管，棄去繼續(xù)淋洗的400 s;進樣量:阿維菌素和甲維鹽混合標準溶液(1 mg·L-1)5 mL。收集的洗脫液(轉移至平底燒瓶)于40℃水浴中減壓旋轉蒸發(fā)近干，N2吹干，甲醇溶解定容至5 mL，過膜，液相色譜-串聯(lián)質譜法測定。結果表明，阿維菌素和甲維鹽主要在第3 管，第1 管未檢出，第2，4 管有少量檢出。但當作植物油添加回收試驗時發(fā)現(xiàn)，對于阿維菌素和甲維鹽等大分子農(nóng)藥殘留，GPC 凈化時則隨部分油脂流出，導致凈化液無法吹干，達不到凈化的效果。

2.2 固相萃取柱凈化方法

固相萃取柱進行樣品的凈化已得到廣泛應用，張艷等［5］采用丙磺酸強陽離子交換萃取柱進行甲維鹽的測定，但對阿維菌素不合適。章虎等［4］考察了Carb-NH2復合柱和氨基固相萃取柱用于凈化阿維菌素和甲維鹽的淋洗方法，結果表明，采用Carb-NH2復合柱時甲維鹽需要45 mL，阿維菌素需要50 mL 才能有較好的回收率(＞95%)，因而復合柱作為凈化柱，試驗可操作性不強;采用氨基柱時，用97∶3 (二氯甲烷∶甲醇)作為洗脫液，洗脫體積為10 mL，甲維鹽和阿維菌素回收率為98%和97%。進一步優(yōu)化洗脫溶劑，發(fā)現(xiàn)用95∶5 (二氯甲烷∶甲醇)作為洗脫液，洗脫體積為5 mL，甲維鹽和阿維菌素回收率即可達到95%以上。同時，相比GPC 凈化，采用氨基固相萃取柱時，操作簡單，凈化效果更好。

2.3 線性范圍

阿維菌素和甲維鹽用甲醇稀釋得到一系列標準溶液，濃度分別為5，10，20，50，100 和500 μg·L-1，進液相色譜-串聯(lián)質譜檢測。以濃度X (μg·L-1)為橫坐標，峰面積響應值Y 為縱坐標，對標準溶液測定值進行線形回歸，所得回歸方程，阿維菌素為:Y=16 752 X+1 086，r=0.997 5，甲維鹽為:Y=59 204 X+2 269，r=0.998 6?？梢姳痉椒ㄓ兄己玫姆€(wěn)定性。

2.4 回收率和精密度

在未檢出阿維菌素和甲維鹽的大豆油、花生油和菜籽油樣品中分別添加不同含量水平的2種農(nóng)藥混合標準液，渦旋混合2 min，靜置30 min。使添加濃度分別為0.01，0.02 和0.05 mg·kg-1，每個水平做5 次平行試驗，按照1.2 所述步驟處理后進樣，計算加標回收率和相對標準偏差(RSD)(表2)。

表2 方法添加回收率和精密度(n=5)

表2 顯示，回收率范圍為76.6%～93.5%，RSD為2.7%～9.0%，符合農(nóng)藥殘留分析方法的要求。

2.5 靈敏度

在試驗色譜條件下，分析添加濃度為0.01 mg·kg-1，進樣濃度為0.01 mg·L-1樣品中阿維菌素和甲維鹽的色譜圖，以噪音信號的3 倍和10 倍計算本方法的檢測限和定量限。阿維菌素的檢出限為0.002 mg·kg-1，定量限為0.005 mg·kg-1。甲維鹽的檢出限為0.000 3 mg · kg-1，定量限為0.001 mg·kg-1。

3 小結

采用氨基固相萃取柱凈化，建立了快速測定植物油中阿維菌素和甲維鹽殘留分析方法，具有良好的靈敏度、回收率和重復性。

［1］馬海芹，丁佩.阿維菌素的研究應用、存在問題及對策［J］.農(nóng)藥科學與管理，2009，30 (10):20-23.

［2］李娜.食用油安全問題淺析［J］.中國糧食經(jīng)濟，2008，(3):17-18.

［3］宋丹陽，宮兆晶，李培武，等.我國油料中農(nóng)藥殘留限量與檢測技術現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢［J］.中國油料作物學報，2006，28 (3):375-379.

［4］章虎，錢鳴蓉，董程，等.液相色譜法同時測定稻米中阿維菌素和甲維鹽殘留［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學，2010 (6):1358-1361.

［5］張艷，吳銀良，胡繼業(yè)，等.高效液相色譜熒光檢測法測定蔬菜中殘留的甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽［J］.色譜，2008，26 (1):110-112.

［6］孫明娜，萬宇，朱傳明，等.液相色譜-熒光法測定甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽在甘藍和土壤中的殘留［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學，2008，36 (18):7533-7534.

［7］李保同，裴春梅.阿維菌素在小白菜和土壤中的殘留分析及動態(tài)研究［J］.現(xiàn)代農(nóng)藥，2009，8 (4):27-30.

［8］徐浩然，楊仁斌，付強，等.高效液相色譜法測定土壤中阿維菌素殘留［J］.環(huán)境科學與管理，2010，35 (4):35-37.

［9］柳菡，徐錦忠，丁濤，等.蔬菜中26種農(nóng)藥殘留的高效液相色譜-串聯(lián)質譜法測定［J］.分析測試學報，2009，28(2):181-185.

［10］丁慧瑛，謝文，周召千，等.蔬菜中11種苯甲酰脲類農(nóng)藥殘留的液相色譜-串聯(lián)質譜法測定［J］.分析測試學報，2009，28 (8):970-974.

［11］李增梅，鄧立剛，趙淑芳，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質譜法研究阿維菌素在蘋果和土壤中的殘留消解動態(tài)［J］.分析化學，2010，38 (10):1505-1509.

［12］何紅梅，趙華，張春榮，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質譜法測定水稻基質中阿維菌素殘留量［J］.分析化學，2012，40 (1):140-144.

［13］楊方，楊守深，林永輝，等.超高效液相色譜-電噴霧電離串聯(lián)質譜聯(lián)用法檢測茶葉中阿維菌素類藥物殘留［J］.色譜，2009，27 (2):153-157.