GC－MS分析桂枝茯苓膠囊及組方藥材揮發(fā)油成分

王書云，毛繪娟，蕭偉，李國(guó)玉，黃健，王金輝，

（1沈陽(yáng)藥科大學(xué)中藥學(xué)院，沈陽(yáng)110016；2江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，連云港222001；3石河子大學(xué)藥學(xué)院，石河子832002）

桂枝茯苓膠囊源于東漢張仲景《金匱要略》古方桂枝茯苓丸的改進(jìn)劑型，由桂枝、茯苓、丹皮、白芍和桃仁組成。該方以桂枝、茯苓為君藥，桂枝溫通血脈而運(yùn)氣血，茯苓利水消痰而益心脾，與桂枝相合，化瘀利水除瘕；桃仁破血化瘀，與桂枝相合，增化瘀結(jié)暢和氣血；丹皮散血行瘀，與茯苓相合，散血利水，消痞除痰；芍藥養(yǎng)血涼血，入絡(luò)破血行瘀，與桂枝、桃仁、丹皮相合，化瘀消以生新，兼防攻伐太過(guò)傷新血；與茯苓相合，利水而不傷陰。諸藥合用，達(dá)活血化瘀、消腫散結(jié)之功［1］。臨床主要用于治療子宮肌瘤［2］、子宮內(nèi)膜異位［3］、慢性盆腔炎［4］、卵巢囊腫［5］、乳腺增生［6］、痛經(jīng)［7］、輸卵管妊娠［8］、藥物流產(chǎn)后陰道出血［9］、不孕［10－11］等癥，是治療婦科疾病的首選良方。目前，對(duì)桂枝茯苓膠囊組方單味藥材桂枝、茯苓、丹皮、白芍和桃仁的揮發(fā)油成分研究都有文獻(xiàn)報(bào)道［12－16］。而桂枝茯苓膠囊制備工藝是取部分茯苓粉碎成細(xì)粉，丹皮提取揮發(fā)油，藥渣與桂枝、白芍、桃仁及剩余茯苓乙醇提取兩次，合并提取液濃縮，藥渣再水煎兩次，煎煮液濃縮后與醇濃縮液合并，再與茯苓細(xì)粉混勻，干燥，制粒，干燥，加入丹皮揮發(fā)油。為了比較桂枝茯苓膠囊和組方藥材中揮發(fā)油成分的種類及含量變化，探討桂枝茯苓膠囊提取后揮發(fā)油成分的變化關(guān)系，本文采用氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法，分別對(duì)組方的5種藥材單獨(dú)提取的揮發(fā)油、按處方配伍的混合藥材提取的揮發(fā)油和中成藥制劑桂枝茯苓膠囊提取的揮發(fā)油成分進(jìn)行分析。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

GCMS－QP5050A（JAPAN SHIMADZU）氣相質(zhì)譜聯(lián)用儀，98－1－B型電子調(diào)溫電熱套（天津市泰斯特儀器有限公司），揮發(fā)油提取器。環(huán)己烷（天津市富宇精細(xì)化工有限公司），無(wú)水硫酸鈉（天津市博迪化工有限公司），均為分析純。桂枝、茯苓、丹皮、白芍、桃仁藥材均由江蘇康緣藥業(yè)有限公司提供，桂枝茯苓膠囊，市售（批號(hào)：111022，江蘇康緣藥業(yè)有限公司）。

1.2 色譜條件

HP－5MS彈性石英毛細(xì)管柱（0.25mm×30m，0.25μm），進(jìn)樣口溫度，程序升溫：從70℃開始，保持3min，以10℃／min升溫速度升至100℃，保持10min，再以以10℃／min升溫速度升至280℃，保持5min，載氣為 He氣（99.99%），載氣流速為1 mL／min，進(jìn)樣口溫度為280℃，分流比為1∶30，進(jìn)樣量為1μL／0.2μL。

1.3 質(zhì)譜條件

電子轟擊離子源（EI），電子能量：70eV，接口溫度：230℃，掃描范圍：33～500，溶劑延遲：3min，NIST107標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜庫(kù)。

1.4 揮發(fā)油提取

1.4.1桂枝茯苓膠囊揮發(fā)油提取取200粒桂枝茯苓膠囊去掉膠囊外殼置2000mL圓底燒瓶，加三級(jí)水1500mL，浸泡30min，參照2005年版《中國(guó)藥典》［17］一部附錄ⅩD揮發(fā)油測(cè)定乙法（用環(huán)己烷代替二甲苯），提取的揮發(fā)油用無(wú)水硫酸鈉干燥，得揮發(fā)油0.7mL（含環(huán)己烷）。

1.4.2桂枝茯苓膠囊組方配伍混合藥材揮發(fā)油提取按2005年版《中國(guó)藥典》［17］成方制劑和單味制劑第559頁(yè)《桂枝茯苓膠囊》處方比例（1∶1∶1∶1∶1）稱取單味藥材桂枝、茯苓、白芍、丹皮、桃仁各80g置2000mL圓底燒瓶，加三級(jí)水1500mL，浸泡30 min，參照2005年版《中國(guó)藥典》［17］一部附錄ⅩD揮發(fā)油測(cè)定乙法（用環(huán)己烷代替二甲苯），提得的揮發(fā)油用無(wú)水硫酸鈉干燥，得揮發(fā)油1.6mL（含環(huán)己烷）。

1.4.3桂枝茯苓膠囊組方單味藥材揮發(fā)油提取分別稱取桂枝茯苓膠囊組方單味藥材桂枝、茯苓、白芍、丹皮、桃仁各400g置2000mL圓底燒瓶，加三級(jí)水1500mL，浸泡30min，參照2005年版《中國(guó)藥典》［17］一部附錄ⅩD揮發(fā)油測(cè)定乙法（用環(huán)己烷代替二甲苯），提得的揮發(fā)油用無(wú)水硫酸鈉干燥，分別得揮發(fā)油3.6、0.75、2.3、0.9、1.8mL（含環(huán)己烷）。

1.5 揮發(fā)油GC－MS測(cè)定

精密取上述揮發(fā)油1、0.2μL（注：由于揮發(fā)油中各成分含量差別懸殊，故分別選兩種不同的進(jìn)樣量來(lái)測(cè)定含量不同的化學(xué)成分）注入GC－MS，分別在上述相同色譜條件下進(jìn)行氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用分析。

2 結(jié)果

桂枝茯苓膠囊及組方單味藥材和組方配伍混合藥材揮發(fā)油成分分析結(jié)果見表1，揮發(fā)油總離子流圖見圖1。

表1 桂枝茯苓膠囊及組方單味藥材和組方配伍混合藥材揮發(fā)油主要化學(xué)成分Tab.1 The major components of volatile oil in Guizhi Fuling Capsule and its related combinations

續(xù)表1

續(xù)表1

圖1 揮發(fā)油GC－MS圖譜Fig.1 The GC－MS pictures of volatile oil in Guizhi Fuling Capsule and its related combinations

3 討論

組方配伍的混合藥材揮發(fā)油主要成分來(lái)自于桂枝、桃仁、丹皮和白芍，化學(xué)成分種類基本為單味藥材的加和，單味藥材揮發(fā)油成分的含量在混合藥材中發(fā)生了變化，混合藥材揮發(fā)油主要成分根據(jù)混合藥味配伍而表現(xiàn)得更為均衡，體現(xiàn)出藥味配伍不同于單味藥。按相同方法處理的桂枝茯苓膠囊的揮發(fā)油成分主要來(lái)自于桂枝和丹皮，化學(xué)成分種類明顯比單味藥材及混合藥材的少，說(shuō)明在桂枝茯苓膠囊工藝制備的過(guò)程中，選擇性地提取了揮發(fā)性成分。一些單味藥材中的揮發(fā)油成分由于含量低未在混合藥材揮發(fā)油中表現(xiàn)出來(lái)，如：Heptanal（0.65%）、Camphene（0.34%）、Nonanal（0.83%）、Nopinon（2.35）、（－）－cis－Myrtanol（2.62%）。混合揮發(fā)油主要成分為Benzaldehyde（19.85%）、Cinnamaldehyde（34.73%）、Paeonol（38.97%）分別來(lái)自于單味藥材桂枝、桃仁、白芍和丹皮揮發(fā)油的主要成分。膠囊揮發(fā)油主要成分Benzaldehyde（17.75%）和Paeonol（68.25%）分別來(lái)自于單味藥材桂枝和丹皮。通過(guò)單味藥材、配伍混合藥材和膠囊提取的揮發(fā)油成分及含量分析，為藥味配伍和制劑工藝制備及其質(zhì)量控制提供了理論依據(jù)。

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