巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子在復(fù)發(fā)性宮頸癌中的表達(dá)及其對(duì)預(yù)后的影響*

翁梅英， 洪順家， 鄭澄宇

(中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 廣州 510120)

巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子在復(fù)發(fā)性宮頸癌中的表達(dá)及其對(duì)預(yù)后的影響*

翁梅英， 洪順家△， 鄭澄宇

(中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 廣州 510120)

目的研究巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(macrophage migration-inhibitory factor, MIF)在復(fù)發(fā)性宮頸癌中的表達(dá)及其對(duì)預(yù)后的影響。方法2007年1月至2009年12月期間收集我院確診宮頸癌手術(shù)后復(fù)發(fā)患者87例，采用免疫組化方法檢測(cè)MIF的表達(dá)情況,并對(duì)患者進(jìn)行至少36個(gè)月的隨訪。結(jié)果復(fù)發(fā)性宮頸癌患者M(jìn)IF陽性率為75.7%(55/87)。MIF表達(dá)與宮頸癌分化程度和臨床分期相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；但是不同宮頸癌病理分型MIF表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。復(fù)發(fā)性宮頸癌MIF陽性者近期治療有效率為47.3%(26/55)，MIF陰性者近期治療有效率為63.6%(21/32)，二者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Kaplan-Meier 生存分析結(jié)果表明MIF表達(dá)陽性組平均生存時(shí)間為28.8個(gè)月，陰性組平均生存時(shí)間為38.4個(gè)月，log-rank檢驗(yàn)P<0.05。結(jié)論MIF陽性可能是影響宮頸癌復(fù)發(fā)和預(yù)后的危險(xiǎn)因素之一。

宮頸腫瘤； 復(fù)發(fā)； 預(yù)后； 巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子

宮頸癌屬于婦科最常見的惡性腫瘤，為僅次于乳腺癌的第二大女性惡性腫瘤，一直以來嚴(yán)重危害著女性健康。一般認(rèn)為組織學(xué)分級(jí)、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度和淋巴血管間隙侵犯均是目前影響宮頸癌預(yù)后的重要因素[1]。巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(macrophage migration-inhibitory factor，MIF) 屬于T淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，研究發(fā)現(xiàn)其能夠促進(jìn)惡性腫瘤發(fā)生，參與腫瘤發(fā)生發(fā)展的多個(gè)環(huán)節(jié)[2]。本研究旨在探討MIF在復(fù)發(fā)性宮頸癌中的表達(dá)狀況及其對(duì)預(yù)后的影響。

材 料 和 方 法

1研究對(duì)象

收集我院2007年1月至2009年12月期間確診宮頸癌收入院手術(shù)治療的患者，病例入選標(biāo)準(zhǔn)：按2007年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(Federation of Gynecology and Obstetrics, FIGO)推薦的臨床-診斷分期標(biāo)準(zhǔn)，ⅠB1期42例，ⅡA期(<4 cm)45例，均行改良根治性子宮切除術(shù)和盆腔淋巴結(jié)切除術(shù)。手術(shù)后隨訪宮頸癌復(fù)發(fā)：發(fā)現(xiàn)宮頸殘端腫塊，可伴發(fā)腰骶部疼痛，腿部放射性疼痛，下肢浮腫等局部壓迫癥狀；三合診捫及盆腔結(jié)節(jié)型腫塊，位置固定；計(jì)算機(jī)斷層掃描 (computed tomography, CT)、磁共振成像 (magnetic resonance imaging, MRI)或者彩超提示盆腹腔占位性腫塊或腫大的淋巴結(jié)。

2治療干預(yù)方法

2組患者確診術(shù)后宮頸癌復(fù)發(fā)后給予同期放化療，均予體外照射及腔內(nèi)近距離放射治療。同時(shí)給予順鉑化療5周期：順鉑每平方米體表面積30 mg，每周1次。

3MIF檢測(cè)方法

MIF在宮頸癌組織中的表達(dá)情況采用免疫組化方法進(jìn)行檢測(cè)，收集所有入選患者第1次手術(shù)時(shí)保留的蠟塊組織，5 μm切片，采用S-P免疫組織化學(xué)二步法染色，鼠抗人MIF單克隆抗體免疫組織化學(xué)染色試劑盒及小鼠抗人耐藥基因單克?、窨箍贵w均由Introvigen生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。空白對(duì)照為PBS代替Ⅰ抗，陰性對(duì)照采用正常鼠血清代替Ⅰ抗，陽性對(duì)照為已知陽性的宮頸癌切片。嚴(yán)格按照試劑盒操作手冊(cè)進(jìn)行染色，光鏡下進(jìn)行基因蛋白表達(dá)強(qiáng)度分級(jí)。MIF表達(dá)強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)采用陽性細(xì)胞比例評(píng)分和陽性強(qiáng)度評(píng)分兩項(xiàng)加權(quán)法：每高倍鏡視野陽性細(xì)胞<25%為1分，25%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分；陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度：淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分；將每一標(biāo)本兩項(xiàng)得分相乘得出總分，0～3分記為陰性(-)，4～8分記為陽性(+)，9～12分記為強(qiáng)陽性(++)[3]。

4治療效果評(píng)價(jià)

患者接受治療1月后隨訪進(jìn)行療效評(píng)估，近期療效采用WHO腫瘤治療標(biāo)準(zhǔn)判定療效予治療后1個(gè)月時(shí)進(jìn)行評(píng)價(jià)[4]：完全緩解(complete response，CR)，腫瘤全部消失，超過1個(gè)月；部分緩解(partial response，PR)，腫瘤縮小50%以上，時(shí)間≥4周；穩(wěn)定(no change，NC)，腫瘤體積增大<25%或縮小<50%；進(jìn)展(progressive disease，PD)，腫瘤體積增大>25%或出現(xiàn)新病灶。治療有效為CR+PR。對(duì)所有患者進(jìn)行的生存時(shí)間隨訪?；颊咧委煶鲈汉缶M(jìn)行為期至少36個(gè)月電話隨訪，記錄患者的生存時(shí)間，并進(jìn)行整理分析。

5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)，MIF表達(dá)與預(yù)后之間的關(guān)系采用Kaplan-Meier生存分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1患者一般情況

共入選符合標(biāo)準(zhǔn)的復(fù)發(fā)性宮頸癌患者87例，初次發(fā)病時(shí)年齡31～70歲，平均(43.2±10.2)歲。ⅠB1期42例，ⅡA期(<4 cm)45例。術(shù)后宮頸癌復(fù)發(fā)時(shí)間6～30月，平均(12.5±6.2)月。

2MIF表達(dá)與復(fù)發(fā)性宮頸癌臨床病理特征之間的關(guān)系

第1次手術(shù)標(biāo)本病理檢查結(jié)果鱗狀細(xì)胞癌77例，腺癌10例，低分化22例，高、中分化65例。免疫組織化學(xué)檢查結(jié)果表明復(fù)發(fā)性宮頸癌患者M(jìn)IF陽性率75.7%(55/87)。宮頸腺癌和鱗癌組織MIF表達(dá)分別見圖1、2。MIF表達(dá)與宮頸癌分化程度和臨床分期相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；但是不同宮頸癌病理分型MIF表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。

Figure 1. Analysis of MIF protein expression by immunohistochemistry in cervical adenocarcinoma(×200). A: negative MIF staining; B: positive MIF staining.

圖1免疫組化法分析MIF蛋白在宮頸腺癌中的表達(dá)

Figure 2. Analysis of MIF protein expression by immunohistochemistry in cervical squmaous-cell carcinoma(×200). A: negative MIF staining; B: positive MIF staining.

圖2免疫組化法分析MIF蛋白在宮頸鱗癌中的表達(dá)

3MIF表達(dá)與復(fù)發(fā)性宮頸治療的近期效果比較

復(fù)發(fā)性宮頸癌MIF陽性者近期治療有效率47.3%(26/55)，MIF陰性者近期治療有效率63.6%(21/32)，二者相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表1MIF表達(dá)與復(fù)發(fā)性宮頸癌臨床病理特征之間的關(guān)系

Table 1. Correlation between the expression of MIF and clinicopathological features.

CharacteristicsnMIF(+)PPathologicalpattern Squmaouscarcinoma7749(63.6%)>0.05 Adenocarcinoma106(60.0%)Differentiation Poor225(22.7%)<0.01 Well/moderate6550(76.9%)Clinicalstage ⅠB14217(40.5%)<0.01 ⅡA4538(84.4%)

表2MIF表達(dá)與復(fù)發(fā)性宮頸癌治療的近期效果比較

Table 2. Comparison of MIF expression and short-term therapeutic effects of recurrent cervical cancer.

MIFnCRPRNCPD(+)558(14.5%)18(32.7%)*16(29.1%)13(23.7%)*(-)327(21.9%)14(44.8%)7(21.9%)4(12.5%)

*P<0.05vsMIF(-).

4MIF表達(dá)與復(fù)發(fā)性宮頸癌預(yù)后之間的關(guān)系

Kaplan-Meier 生存分析結(jié)果表明MIF表達(dá)陽性組平均生存時(shí)間為28.8個(gè)月，陰性組平均生存時(shí)間為38.4個(gè)月，log-rank檢驗(yàn)P<0.05，見圖3。

Figure 3. Kaplan-Meier analysis of the survival of recurrent cervical cancer patients with or without MIF expression.

圖3Kaplan-Meier法分析MIF表達(dá)與復(fù)發(fā)性宮頸癌患者生存期的關(guān)系

討 論

隨著我國(guó)宮頸癌預(yù)防知識(shí)的大力宣傳教育及早期篩查的開展普及，該病的早期診斷率升高，病死率已有明顯下降，同時(shí)宮頸癌診斷年齡也出現(xiàn)年輕化趨勢(shì)。婦女宮頸癌的預(yù)后影響因素眾多，目前確認(rèn)的包括臨床分期、脈管累及/間質(zhì)浸潤(rùn)深度和組織學(xué)分級(jí)。近年來宮頸癌發(fā)生發(fā)展的分子生物學(xué)機(jī)制成為國(guó)內(nèi)外研究熱點(diǎn)集中所在，研究發(fā)現(xiàn)來源于T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞因子MIF可能抑制腫瘤免疫，促進(jìn)血管生成，與多種腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移等相關(guān)[5]。在MIF研究的初期其被描述為一個(gè)具有廣泛作用的前炎癥因子，能夠通過多種途徑激活炎癥反應(yīng)，但是最新研究表明其在炎癥與腫瘤之間起到橋梁的作用，在腫瘤發(fā)病及轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要的作用[6]。研究發(fā)現(xiàn)MIF在肝癌、食管癌、肺癌、頭頸部鱗癌等多種腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，與多種腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系[7]。有研究證實(shí)CD74為MIF的作用受體，其細(xì)胞外結(jié)合域結(jié)合MIF位點(diǎn)后，能夠激活前列腺素E2的合成，促使細(xì)胞復(fù)制[8]。

我們的研究表明MIF宮頸癌組織中高表達(dá)，主要位于細(xì)胞漿內(nèi)，提示MIF與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展可能有關(guān)。同時(shí)復(fù)發(fā)性宮頸癌病例中MIF陽性率高于同期文獻(xiàn)報(bào)道宮頸癌者[9]，提示其可能為宮頸癌復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素。同時(shí)本研究還發(fā)現(xiàn)MIF的陽性表達(dá)與復(fù)發(fā)性宮頸癌組織分化程度及其臨床分期相關(guān)，低分化、臨床分期晚的病例其MIF陽性率越高，表明MIF能夠抑制機(jī)體針對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫控制，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞逃逸，而使惡性程度增高。我們的研究還發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)性宮頸癌MIF陰性患者再次接受抗腫瘤治療，其短期效果優(yōu)于MIF陽性病例；而且通過長(zhǎng)達(dá)3年的隨訪結(jié)果也表明，MIF陰性的復(fù)發(fā)性宮頸癌患者預(yù)期壽命更長(zhǎng)。

但是MIF影響宮頸癌預(yù)后的分子生物學(xué)具體機(jī)制尚未完全明確，有研究認(rèn)為MIF可能在腫瘤早期階段通過誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶2表達(dá)來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[10-11]?；|(zhì)金屬蛋白酶被認(rèn)為能夠通過降解細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)血管生成調(diào)節(jié)來促進(jìn)腫瘤發(fā)生進(jìn)展。

綜上所述，MIF陽性可能是影響宮頸癌復(fù)發(fā)和預(yù)后的危險(xiǎn)因素之一，其具體機(jī)制及可能的藥物干預(yù)靶點(diǎn)還有待進(jìn)一步研究。

[1] Westermann A, Mella O, Van Der Zee J, et al. Long-term survival data of triple modality treatment of stage IIB-III-IVA cervical cancer with the combination of radiotherapy, chemotherapy and hyperthermia:an update[J]. Int J Hyperthermia, 2012, 28(6):549-553.

[2] Kang S, Nam BH, Park JY, et al. Risk assessment tool for distant recurrence after platinum-based concurrent chemoradiation in patients with locally advanced cervical cancer: a Korean gynecologic oncology group study[J]. J Clin Oncol, 2012, 30(19):2369-2374.

[3] 王 敏,彭宣榮,朱彥麗, 等. HuR、VEGF和COX-2表達(dá)及臨床病理因素與早期宮頸癌患者預(yù)后關(guān)系的分析[J]. 中國(guó)腫瘤臨床, 2010, 37(17):984-987, 990.

[4] 楊煒敏,游澤山,袁 力, 等.宮頸鱗癌組織中KAI1表達(dá)變化與宮頸癌復(fù)發(fā)及預(yù)后的相關(guān)性研究[J]. 中國(guó)病理生理雜志, 2010, 26(3):539-542.

[5] Simpson KD, Templeton DJ, Cross JV. Macrophage migration inhibitory factor promotes tumor growth and metastasis by inducing myeloid-derived suppressor cells in the tumor microenvironment[J]. J Immunol, 2012, 189(12):5533-5540.

[6] Yaddanapudi K, Putty K, Rendon BE, et al. Control of tumor-associated macrophage alternative activation by macrophage migration inhibitory factor[J]. J Immunol, 2013, 190(6):2984-2993.

[7] 熊 櫻, 梁立治,鄭 敏, 等. 血清CYFRA21-1與宮頸癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系[J].實(shí)用婦產(chǎn)科雜志, 2011, 27(9):674-677.

[8] Tawadros T, Alonso F, Jichlinski P, et al. Release of macrophage migration inhibitory factor by neuroendocrine-differentiated LNCaP cells sustains the proliferation and survival of prostate cancer cells[J]. Endocr Relat Cancer, 2013, 20(1):137-149.

[9] 譚 琛, 羅招陽. MIF和MMP-2在宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義[J]. 中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥, 2010, 5(27):35-36.

[10] 潘 琦, 陳福春, 武百強(qiáng), 等. 量子點(diǎn)免疫熒光技術(shù)檢測(cè)EMMPRIN、 MMP-2和P53蛋白在人肺癌組織中的表達(dá)意義[J]. 中國(guó)病理生理雜志, 2011, 27(3):488-493.

[11] 連俊芳, 吳素慧, 尚海霞, 等.巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子及其受體CD74在宮頸癌組織中的表達(dá)及意義[J]. 中國(guó)藥物與臨床, 2011, 11(7):755-757.

Expressionofmacrophagemigration-inhibitoryfactorinhumanrecurrentcervicalcancertissuesanditsprognosticsignificance

WENG Mei-ying, HONG Shun-jia, ZHENG Cheng-yu

(DepartmentofObstetricsandGynecology,SunYat-senMemorialHospitalofSunYat-senUniversity,Guangzhou510120,China.E-mail:shunjiahong@126.com)

AIM: To investigate the expression of macrophage migration-inhibitory factor (MIF) in human recurrent cervical cancer tissues and its influence on prognosis.METHODSEight-seven cases of recurrent cervical cancer were collected from January 2007 to December 2009 and followed up for at least 36 months. The MIF expression in cervical cancer tissues was tested by immunochemistry.RESULTSThe positive rate of MIF expression in recurrent cervical cancer was 75.7% (55/87). Compared with the patients with negative MIF expression, the patients with positive MIF expression showed worse response to antitumor therapy [47.3% (26/55) vs 63.6% (21/32),P<0.05] and shorter survival time (28.8 months vs 38.4 months,P<0.05).CONCLUSIONPositive MIF expression could be a risk factor in recurrence and prognosis of cervical cancer.

Uterine cervical neoplasms; Recurrence; Prognosis; Macrophage migration-inhibitory factors

R737.33

A

1000- 4718(2013)09- 1641- 04

2013- 05- 02

2013- 07- 26

廣東省科技計(jì)劃(No.2010B031600201)

△通訊作者 Tel: 020-81332583; E-mail: shunjiahong@126.com

10.3969/j.issn.1000- 4718.2013.09.018