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    鼠平臺骨折術(shù)后活血補腎藥物對軟骨退變相關(guān)因子的影響

    2013-10-22 02:56:02林梓凌曾建春樊粵光黃永明孫鴻濤曾意榮趙京濤
    關(guān)鍵詞:骨關(guān)節(jié)炎軟骨活血

    林梓凌,曾建春,樊粵光,黃永明,孫鴻濤,曾意榮,趙京濤

    (廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科,廣州 510405)

    創(chuàng)傷性骨關(guān)節(jié)炎是骨性關(guān)節(jié)炎的一種類型[1],由骨關(guān)節(jié)創(chuàng)傷骨折后等原因引起。為探討運用中醫(yī)活血補腎方藥,能否有效影響關(guān)節(jié)骨折術(shù)后的軟骨損害病變相關(guān)因子,抑制軟骨退變,我們通過動物實驗進(jìn)行了以下觀察研究。

    1 實驗與用藥

    1.1 實驗準(zhǔn)備

    選擇成年雌性SD大鼠40只(廣州中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供),體質(zhì)量約0.35 ~0.45 kg,隨機分成正常組、中藥觀察組、對照觀察組和空白組,每組10只。

    1.2 動物造模

    除空白組外均進(jìn)行雙側(cè)造模。以質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.5% 的硫賁妥鈉(2 ml/kg體質(zhì)量)腹腔內(nèi)注射麻醉,術(shù)區(qū)消毒后,無菌狀態(tài)下于脛骨結(jié)節(jié)外側(cè)切開顯露脛骨近端,以微型骨鑿縱行劈開脛骨平臺外側(cè)髁。復(fù)位后,自大鼠脛骨平臺外側(cè)插入一枚事先消毒好直徑0.8mm的克氏針,平行關(guān)節(jié)面橫穿脛骨平臺,針尾彎曲埋于平臺皮下。術(shù)后不限制活動,10萬級無菌動物實驗室分籠飼養(yǎng),動物飼養(yǎng)室溫度為20±1℃,濕度為55±2%。

    1.3 藥物準(zhǔn)備

    中藥觀察組給予活血補腎方(關(guān)節(jié)康組方加減)[2]湯劑口服(廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院煎藥室提供)。原方由熟地、川牛膝、杜仲、丹參、川芎、獨活、紅花、木瓜、木香、補骨脂等藥物組成[2]。前5d加桃仁、赤芍、當(dāng)歸,原方熟地改為生地,5d后原方加骨碎補、枸杞子。

    對照觀察組給予口服西樂葆,每日1次??瞻捉M給予生理鹽水,每日1次。所有藥物均按體表面積折算動物的等效劑量,再用生理鹽水配成每天4ml溶液灌胃。

    1.4 檢測指標(biāo)及方法

    1.4.1 標(biāo)本采集 分別于術(shù)后3d、7d及21d大鼠眼角取血,離心后取上清液置-70℃保存待測。

    1.4.2 TNF-а水平及MMP-3濃度檢測 采用雙抗體夾心ELISA法,實驗步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。

    1.4.3 NO測定 用硝酸還原酶法,測定方法參照試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行。

    1.4.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用 SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,組間均數(shù)比較行t檢驗,P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義,用雙變量相關(guān)分析法分析患者與血清中MMP-3、TNF-а之間的關(guān)系。

    2 結(jié)果

    2.1 大鼠血清中TNF-а、MMP-3水平檢測結(jié)果

    表1、2顯示,3d中藥觀察組、空白組及對照觀察組血清TNF-а、MMP-3水平顯著高于空白組(P<0.01)。中藥觀察組、空白組及對照觀察組3d、7d和21dTNF-а水平有逐漸升高趨勢,兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);空白組3d、7d和21d MMP-3水平同樣呈逐漸升高趨勢,兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);但是中藥觀察組和對照觀察組MMP-3的3d和7d TNF-а水平雖然也有升高趨勢,兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義 (P>0.05),而7d和21d則差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。同時在7d和21d的對比中,空白組血清TNF-а、MMP-3水平顯著高于中藥觀察組 (P<0.01)。而對照觀察組在7d時與中藥觀察組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),與空白組比較差異明顯(P<0.01);反之,21d時對照觀察組與中藥觀察組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),與空白組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P >0.05)。

    2.2 大鼠血清NO濃度檢測結(jié)果

    表3顯示,3d中藥觀察組、空白組及對照觀察組血清NO濃度水平顯著高于空白組 (P<0.05)??瞻捉M3d、7d和21dNO濃度同樣呈逐漸升高趨勢,兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.05);但是中藥觀察組和對照觀察組NO濃度的3d和7d雖然也有升高趨勢,但兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義 (P>0.05),而7d和21d差異則有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。同時在7d和21d的比較中,空白組血清NO濃度顯著高于中藥觀察組 (P<0.05),而對照觀察組在7d時與中藥觀察組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),與空白組比較差異明顯(P<0.05);反之,21d時對照觀察組與中藥觀察組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),與空白組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P >0.05)。

    表1 血清TNF-а水平比較(pg/ml)

    表2 血清MMP-3水平比較(ng/ml)

    表3 大鼠血清中NO濃度比較

    3 討論

    高能量損傷骨折致關(guān)節(jié)軟骨的破壞及退變,是創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)炎的主要病理變化。

    脛骨平臺骨折屬中醫(yī)“骨折”范疇,而內(nèi)固定術(shù)后創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)炎的產(chǎn)生、功能障礙可歸屬痹證等范疇。骨折外傷,脈絡(luò)受阻,氣滯則痛,血瘀則腫,致使氣滯血瘀、氣血不通、榮養(yǎng)不利則關(guān)節(jié)屈伸不靈,活動受限。骨折恢復(fù)期肝腎氣血主之,肝腎虧虛、筋骨失養(yǎng)則恢復(fù)緩慢,失榮則痛,所謂“膝痛無有不因肝腎虛者”也,因此氣血瘀阻、肝腎虧虛乃是平臺骨折術(shù)后關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)愈合階段的主要表現(xiàn)。

    應(yīng)用活血補腎方藥治療骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)研究證實[3],軟骨退變有良好的防治作用。如活血藥當(dāng)歸、川芎和丹參能有效降低骨性關(guān)節(jié)炎中炎癥因子水平,保護(hù)和促進(jìn)軟骨細(xì)胞修復(fù),防治關(guān)節(jié)軟骨退變[4~8]。應(yīng)用活血補腎方藥在動物實驗中證明有一定的鎮(zhèn)痛作用,能減輕藥物損傷所致大鼠足跖腫脹的作用及部分抗炎功效[9]。

    在補腎藥物方面,汪青春等[10,11]發(fā)現(xiàn)補腎方藥對延緩軟骨降解效果較好,可增強SOD的活性,降低血清HA水平,抑制軟骨GAG的降解,輕度下調(diào)關(guān)節(jié)軟骨IL-、iNOS的基因表達(dá),對IL-6有輕度上調(diào)作用;且能增加軟骨細(xì)胞功能,對受破壞的軟骨修復(fù)似有一定作用。曾意榮等認(rèn)為[12],活血補腎復(fù)方中藥能顯著降低膝骨關(guān)節(jié)炎患者血清MMP-3的水平,間接預(yù)防II型膠原總量丟失,顯著降低膝骨關(guān)節(jié)炎患者血清IL-1水平,顯著降低膝骨關(guān)節(jié)炎患者血清透明質(zhì)酸水平,顯著提高超氧化物歧化酶活性,降低乳過氧化物酶活性,清除氧自由基。

    通過我們的動物實驗可見,關(guān)節(jié)骨折術(shù)后早期,運用活血補腎方藥的中藥觀察組血清MMP-3水平顯著低于對照組,可以認(rèn)為活血補腎方藥能在治療早期便有效抑制MMP-3水平的增高。而在中期,中藥觀察組血清TNF-а、MMP-3和NO的水平均顯著低于對照組,說明應(yīng)用活血補腎法的中藥觀察組對這期間相關(guān)檢測因子指標(biāo)的水平增長能有效抑制。TNF-a、MMP-3和NO等因子都是關(guān)節(jié)軟骨損害過程中重要的誘發(fā)、介導(dǎo)因子,它們在血清和關(guān)節(jié)液中的濃度水平高低,可反映關(guān)節(jié)軟骨退變發(fā)生、發(fā)展的進(jìn)程。因此,根據(jù)動物實驗室檢驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),中藥觀察組對關(guān)節(jié)骨折固定術(shù)后的血清TNF-a、MMP-3和NO水平增長能有效抑制,證明運用活血補腎方藥辨證施治用藥,能有效防治關(guān)節(jié)骨折術(shù)后軟骨退變進(jìn)程。

    綜上研究所示,辨證應(yīng)用活血補腎藥物對于抑制脛骨平臺骨折術(shù)后關(guān)節(jié)軟骨退變進(jìn)程的相關(guān)因子水平,防治創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生了積極有利的影響。

    [1] 許學(xué)猛,王羽豐,鄧晉豐,等.活血補腎膠囊影響兔膝關(guān)節(jié)退行性疾病骨內(nèi)高壓變化的實驗研究[J].中國中醫(yī)骨傷科雜志,2001,9(4):24-26.

    [2] 周斌,樊粵光,曾意榮.中藥關(guān)節(jié)康治療膝骨性關(guān)節(jié)炎的臨床研究[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2006,23(6):476-480.

    [3] 許學(xué)猛,王羽豐,鄧晉豐,等.活血補腎膠囊影響兔膝關(guān)節(jié)退行性疾病骨內(nèi)高壓變化的實驗研究[J].中國中醫(yī)骨傷科雜志,2001,9(4):24-26.

    [4] 王文璜,劉宏澤,衛(wèi)小春,等.川芎嗪防治膝關(guān)節(jié)軟骨退變的實驗研究[J].中國骨傷,2004,17(2):80-83.

    [5] 晏雪生,彭亞琴,明安萍.川芎嗪注射液對體外培養(yǎng)軟骨細(xì)胞影響的實驗研究[J].中國中醫(yī)骨傷科雜志,2002,10(1):51-54.

    [6] 呂紅斌,岳珍,王嘉美,等.四種中藥對體外培養(yǎng)兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞代謝的影響[J].中國運動醫(yī)學(xué)雜志,1995,14(3):135-138.

    [7] 王耶,劉建宇,宋艷,等.丹參和透明質(zhì)酸鈉注射液對骨性關(guān)節(jié)炎治療作用的實驗研究[J].中國生化藥物雜志,1998,19(5):248-251.

    [8] 王秀華,劉元祿,蘇姿兵,等.丹參關(guān)節(jié)內(nèi)注射對兔膝骨關(guān)節(jié)炎細(xì)胞因子 IL-I及 TNF的影響[J].中醫(yī)正骨,2003,15(10):1-4.

    [9] 王麗新,鄒衍衍,樊粵光.關(guān)節(jié)康片的抗炎鎮(zhèn)痛作用及毒性觀察[J].中藥新藥與臨床藥理,2005,16(6):417-420.

    [10] 汪青春,董蕙芳,沈墻芝,等.中藥對膝骨關(guān)節(jié)炎黑鼠血清SOD、HA、NO 水平的影響[J].中醫(yī)正骨,1999,11(5):6-8.

    [11] 汪青春,石印玉,沈墻芝,等.中藥對膝骨關(guān)節(jié)炎小鼠關(guān)節(jié)軟骨IL-I、NOS基因表達(dá)的影響[J].山西醫(yī)藥雜志,1999,28(5):381-384.

    [12] 曾意榮,樊粵光,吳凡,等.膝骨關(guān)節(jié)炎患者血清基質(zhì)金屬蛋白酶3、腫瘤壞死因子Q、白細(xì)胞介素1、透明質(zhì)酸、脂質(zhì)過氧化物含量及超氧化物歧化酶活性變化與活血補腎中藥的干預(yù)[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù),2008,12(28):2436-2439.

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