頂空氣相色譜法測(cè)定格拉司瓊中的殘留溶劑研究

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院（110001）田昕

北京康遠(yuǎn)制藥有限公司（100072）劉思飛 趙明 韓程亮Δ

格拉司瓊為選擇性5-HT3受體拮抗劑，主要用于惡性腫瘤化療以及放療過程中的鎮(zhèn)吐及其他相關(guān)病癥的治療。格拉司瓊為繼昂丹司瓊上市后的第二個(gè)5-HT3受體拮抗劑，與昂丹司瓊相比，格拉司瓊對(duì)受體的選擇性更高，止吐作用更強(qiáng)，劑量簡(jiǎn)單、作用更為持久。格拉司瓊或其鹽類物質(zhì)目前的主要給藥途徑為靜脈輸注、口服及外用劑型，現(xiàn)有文獻(xiàn)中未見格拉司瓊殘留溶劑的相關(guān)報(bào)道。

該產(chǎn)品按照其生產(chǎn)工藝要求，分別使用了甲醇、乙醇、二氯甲烷、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃共6種有機(jī)溶劑。參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心《化學(xué)藥物殘留溶劑研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》要求，同時(shí)參考有關(guān)文獻(xiàn)[1][2]，并經(jīng)大量試驗(yàn)研究，建立了同時(shí)測(cè)定格拉司瓊中甲醇、乙醇、二氯甲烷等上述6種殘留有機(jī)溶劑含量的頂空氣相色譜法。按照ICH及《中國(guó)藥典》2010版關(guān)于殘留溶劑的有關(guān)規(guī)定[1][3]，制定各溶劑的限度為：本品1g中含甲醇不得超過300μg，乙醇、異丙醇及乙酸乙酯不得超過500μg，二氯甲烷不得超過60μg，四氫呋喃不得超過72μg。根據(jù)該原料的溶解特征，筆者采用二甲基亞砜為溶媒，以1，4-二氧六環(huán)為內(nèi)標(biāo)，采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行試驗(yàn)，經(jīng)方法學(xué)考察結(jié)果表明各組分的分離度、重現(xiàn)性良好，試驗(yàn)方法合理，簡(jiǎn)單易行，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為格拉司瓊中甲醇、乙醇、二氯甲烷、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃殘留溶劑的有效測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

Agilent 6890N氣相色譜儀、Agilent 7689E頂空進(jìn)樣裝置配有Agilent操作控制及積分軟件；AND HA-202M電子分析天平。

甲醇（美國(guó)FISHER公司，批號(hào)：076535）；乙醇（北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司，批號(hào)：20070728）；異丙醇（北京化學(xué)試劑公司，批號(hào)：070508）；二氯甲烷（北京化學(xué)試劑公司，批號(hào)：40002694）；乙酸乙酯（上海試劑一廠，批號(hào)：97-03-01）；四氫呋喃（北京化學(xué)試劑公司，批號(hào)：20060628）；1，4-二氧六環(huán)（北京化工廠，批號(hào)：081001）；二甲基亞砜（天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20070615、20071105）均為色譜純。

格拉司瓊（批號(hào)：080107、080108、080109），由寧波天衡制藥有限公司提供。

內(nèi)標(biāo)溶液配制：精密稱取1，4-二氧六環(huán)300mg，置于200mL量瓶中，以二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

對(duì)照溶液配制：取色譜純甲醇、乙醇、二氯甲烷、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃適量，分別精密稱定，置于同一量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液溶解并稀釋制成每1mL約含甲醇75μg，乙醇、異丙醇、乙酸乙酯125μg，四氫呋喃18μg以及二氯甲烷15μg的均勻溶液作為對(duì)照溶液。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用色譜柱為DB-624交聯(lián)毛細(xì)管柱（30m×0.53mm.i.d，3μm），以氮?dú)鉃檩d氣，氫火焰離子化檢測(cè)器，進(jìn)樣口溫度為180℃，檢測(cè)溫度250℃。柱溫采用程序升溫：40℃保持8min后以10℃/min升至180℃，保持2min；流速為2.5mL/min。頂空進(jìn)樣（95℃預(yù)熱25min），進(jìn)樣體積為頂空瓶上部氣體1mL，分流比為1∶10。

2.2 分離度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照溶液1.0mL于頂空瓶中，按上述方法進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖；甲醇、乙醇、二氯甲烷、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃的分離度均大于1.5，取對(duì)照溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，所得待測(cè)各溶劑峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5.0%，符合《中國(guó)藥典》2010年版二部的相關(guān)規(guī)定。

2.3 線性范圍及標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱取甲醇75.0mg、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯各125.0mg、二氯甲烷15.0mg及四氫呋喃18.0mg，置于10mL容量瓶中，以內(nèi)標(biāo)溶液稀至刻度搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線儲(chǔ)備溶液。精密量取該溶液2.0mL置于10mL容量瓶中加內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。按比例精密稀釋成不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液6瓶，照上述方法進(jìn)行測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)，以各溶劑峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見附表1。

2.4 最小檢測(cè)限 按照信噪比3∶1，本方法溶液中乙甲醇、乙醇、二氯甲烷、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃的最小檢測(cè)限分別為0.01μg/mL、0.19μg/mL、0.02μg/mL、0.18μg/m、0.02μg/mL、0.003μg/mL。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照溶液各1.0mL，置于6個(gè)頂空瓶中，照上述方法測(cè)定，根據(jù)甲醇、乙醇、二氯甲烷、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃的峰面積計(jì)算RSD%分別為4.25%、4.28%、4.27%、3.33%、3.25%、2.92%，均小于5.0%。

附表1 線性范圍和回歸方程

附表2 格拉司瓊的平均回收率

附表3 三批格拉司瓊的殘留溶劑測(cè)定結(jié)果（%）

2.6 回收率試驗(yàn) 分別精密稱取格拉司瓊250mg3份于3個(gè)頂空瓶中，分別加入對(duì)照溶液1mL充分混勻，照上述方法進(jìn)行測(cè)定，通過積分確定其峰面積，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算試樣中甲醇、乙醇、二氯甲烷、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃的平均回收率，結(jié)果見附表2。

2.7 樣品測(cè)定 精密稱取格拉司瓊3批供試品各約250mg（每批兩份平行），分別于6個(gè)頂空瓶中，分別加入內(nèi)標(biāo)溶液1.0mL充分混勻，照上述方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果3批供試品中均未檢出異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃等有機(jī)溶劑殘留，甲醇和乙醇?xì)埩袅烤弦?guī)定，結(jié)果見附表3。

3 討論

3.1 預(yù)熱溫度及時(shí)間的選擇 本試驗(yàn)根據(jù)樣品的熱穩(wěn)定性以及溶解度分別選擇于75、85、95及105℃條件下預(yù)熱，經(jīng)過比較在溫度相對(duì)較低的條件下，樣品的回收率較低，而過高的溫度對(duì)于樣品的穩(wěn)定性以及低沸點(diǎn)的溶劑也會(huì)造成一定影響；而后，筆者對(duì)預(yù)熱時(shí)間進(jìn)行了選擇，分別預(yù)熱15、20、25、30min后進(jìn)行測(cè)定，最終選擇了95℃、預(yù)熱25min作為預(yù)熱條件。

3.2 內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的選擇 氣相色譜的測(cè)定過程中，使用外標(biāo)法定量容易造成多針進(jìn)樣、重現(xiàn)性不好、測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確等問題，故采用內(nèi)標(biāo)法對(duì)其進(jìn)行定量。經(jīng)過試驗(yàn)，分別考察了乙醇、丙酮以及1，4-二氧六環(huán)等多種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在該條件下1，4-二氧六環(huán)的出峰時(shí)間與其他溶劑出峰無干擾，最終確定1，4-二氧六環(huán)為本試驗(yàn)中的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)。

3.3 關(guān)于格拉司瓊殘留溶劑的測(cè)定 有文獻(xiàn)報(bào)道[4]，鹽酸格拉司瓊中的殘留溶劑測(cè)定方法，其采用外標(biāo)法測(cè)定鹽酸格拉司瓊中的甲醇、異丙醇、乙醚、甲苯等8種有機(jī)溶劑。鹽酸格拉司瓊為格拉司瓊鹽酸鹽形式，溶解特征與格拉司瓊有較大差異，主要用于靜脈給藥的注射液中；在口服以及外用等給藥途徑中，則主要以格拉司瓊原型作為原料制成相應(yīng)制劑。本文建立的格拉司瓊中殘留溶劑的測(cè)定方法能夠同時(shí)測(cè)定生產(chǎn)工藝中涉及的6種有機(jī)溶劑的殘留，所建立的方法準(zhǔn)確、可靠，可用于格拉司瓊中殘留溶劑的測(cè)定，保障藥品的安全、有效。