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    hMSH2和FHIT在宮頸癌中的表達及其相互關(guān)系

    2013-10-19 02:11:44天津市濱海新區(qū)大港醫(yī)院300270薛春芬
    首都食品與醫(yī)藥 2013年10期
    關(guān)鍵詞:浸潤性附表陽性細胞

    天津市濱海新區(qū)大港醫(yī)院(300270)薛春芬

    宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤之一,該病的發(fā)生是個涉及多基因改變、多步驟的累積過程[1],其分子機制至今仍未完全明確。hMSH2是MMR(mismatch repair)基因的一種,它的正常表達是維持MMR基因錯配修復功能的分子基礎。FHIT是目前公認的抑癌基因,其位點的異位和突變以及伴隨的蛋白表達缺失與人類多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。本研究檢測了宮頸癌、CIN及正常宮頸組織中FHIT和hMSH2的表達,旨在探討兩者在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展過程中可能起到的作用及其相關(guān)關(guān)系。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 收集我院存檔宮頸癌標本20例并采集2010年5月~2012年5月住院治療的15例宮頸癌和10例CIN患者病理標本,標本收集前病人均未經(jīng)放化療及免疫治療。所有患者均按宮頸癌HE病理切片診斷標準確診和FIGO分期標準分期?;颊吣挲g26~72歲,平均48.91歲。同時,選取2011年因子宮良性病變行子宮全切術(shù)的30例正常宮頸上皮和慢性宮頸炎組織作為對照。

    1.2 方法 采用免疫組織化學鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶鏈接法(SP法)。兔抗人FHIT多克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司,鼠抗人hMSH2單克隆抗體及SP試劑盒購自天津灝洋生物制品科技有限責任公司。所有標本均經(jīng)10%甲醛固定,石蠟包埋,3μm厚連續(xù)切片??乖⒉ㄐ迯?,一抗FHIT工作濃度1∶600,hMSH2工作濃度1∶100,具體步驟按試劑盒說明書進行。

    1.3 結(jié)果判定

    1.3.1 FHIT蛋白評定標準 FHIT蛋白的染色定位于細胞漿。①按染色強度評分:無色或淺黃色為1分;棕黃色為2分;棕褐色為3分。②按陽性細胞數(shù)所占百分比評分:<10%為1分;10%~50%為2分;>50%為3分。將染色強度評分與所測得的陽性細胞百分數(shù)評分相乘所得的積作為其最后得分,進行統(tǒng)計學檢驗。1~3分為(-),4~9分為(+)。

    1.3.2 hMSH2蛋白評定標準 hMSH2蛋白的染色定位于細胞核上。選取腫瘤細胞壞死較少的5個高倍鏡(×400)視野,計數(shù)500個以上的細胞,陽性細胞數(shù)大于總計數(shù)細胞的20%時記為(+)。

    1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS17.0軟件包對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理。

    2 結(jié)果

    2.1 hMSH2在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織中的表達 在正常宮頸組織中,hMSH2陽性表達9例,陽性表達率為30.0%;在CIN中,hMSH2陽性表達7例,陽性表達率為70.0%;在宮頸癌組織中,hMSH2陽性表達21例,陽性表達率為60.0%。CIN、宮頸癌和正常宮頸組織中,hMSH2陽性率依次降低,差異有顯著性(P<0.05),后兩者相比差異亦有顯著性(P<0.05),見附表1。

    附表1 hMSH2在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織中的表達

    2.2 FHIT在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織中的表達 在正常宮頸組織中,F(xiàn)HIT呈中度至強陽性表達,陽性表達率為100%;在CIN中,F(xiàn)HIT陽性表達率為60.0%;在宮頸癌組織中,F(xiàn)HIT(-)22例,(+)13例,陽性表達率為37.1%。在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中,F(xiàn)HIT陽性率依次降低,差異有顯著性(P<0.05);正常宮頸和宮頸癌組織比較,差異有顯著性(P<0.05),見附表2。

    附表2 FHIT在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織中的表達

    2.3 hMSH2蛋白表達與FHIT蛋白表達的關(guān)系在宮頸癌組織中,hMSH2蛋白表達與FHIT蛋白表達無相關(guān)性;在FHIT蛋白表達陽性組中,hMSH2蛋白陽性表達率為53.8%,而在FHIT蛋白表達陰性組中,hMSH2蛋白陽性表達率為63.6%,二者相比差異無顯著性(r s=-0.097,P>0.05),見附表3。

    附表3 hMSH2蛋白表達與FHIT蛋白表達的關(guān)系

    3 討論

    MMR(mismatch repair)基因是生物進化過程中的保守基因,具有修復DNA堿基錯配、增強DNA復制準確性、維持基因組穩(wěn)定性、降低自發(fā)突變的功能。hMSH2是MMR基因的一種,它的正常表達是維持MMR基因錯配修復功能的分子基礎。本實驗結(jié)果顯示,hMSH2在CIN中表達最高,而在浸潤性宮頸癌及正常宮頸組織中表達依次降低。在CIN病變中,hMSH2的高表達可能的原因是,與正常宮頸鱗狀上皮細胞相比,CIN病變中異常的細胞增生增多[2]。當復制率增高時,微衛(wèi)星序列(microsatellite sequences,MS)的突變率就增高,微衛(wèi)星序列的突變有可能成為hMSH2基因的活性輸入信號。相反,當疾病由CIN發(fā)展到浸潤性宮頸癌的過程中,hMSH2蛋白表達降低,這很可能是因為機體細胞突變以及hMSH2基因表達的下調(diào)。這可在一定程度上反映宮頸癌的惡性程度。

    FHIT是由Ohta等于1996年利用定位克隆技術(shù)和外顯子捕獲法發(fā)現(xiàn)的,定位于3p14.2區(qū)域,其位點的異位和突變以及伴隨的蛋白表達缺失與人類多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切,存在于多種與環(huán)境致癌因素密切相關(guān)的惡性腫瘤中[3]。本實驗結(jié)果顯示,F(xiàn)HIT蛋白在正常宮頸組中均有中至強陽性表達,其異常表達在CIN組中已經(jīng)存在,推測FHIT蛋白的表達缺失有可能是宮頸癌發(fā)生的相對早期的分子生物學事件。FHIT蛋白表達的缺失,有希望成為臨床預測宮頸癌前病變發(fā)展為浸潤性宮頸癌的有用的分子生物學標記物。

    本研究雖然發(fā)現(xiàn)宮頸癌組中hMSH2蛋白的表達和FHIT蛋白的表達都存在較高的異常,但是并未發(fā)現(xiàn)兩者之間存在顯著的相關(guān)性(rs=-0.097,P>0.05)。說明FHIT和hMSH2在促進宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中的作用可能是獨立的,故兩者之間的關(guān)系還有待進一步研究。

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