有氧運動對心梗大鼠左心室β3-AR和一氧化氮合酶表達(dá)的影響

陳 婷，呼德尓朝魯，張 可，田振軍

β3腎上腺素能受體（β3-AR）在心肌梗死（MI）后心血管功能的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用［25］。與熟知的β1／β2-AR發(fā)揮正性肌力作用相比，心室肌β3-AR-NOS通路可介導(dǎo)負(fù)性肌力作用［36］。以往研究認(rèn)為，MI后心臟交感神經(jīng)系統(tǒng)過度激活上調(diào)β3-AR［11］，可導(dǎo)致左心室（LV）及心肌細(xì)胞功能紊亂［35］。但近期研究表明，β3-AR是治療 MI等心臟疾病的潛在靶點。心肌過表達(dá)β3-AR可減輕LV肥大，保護(hù)心臟［36］，而β3-AR基因敲除可加重心臟病理性重塑。β3-AR的激活可作為一種保護(hù)機(jī)制來對抗 MI［32，1］。而且，過去認(rèn)為心肌β3-AR主要通過eNOS介導(dǎo)負(fù)性肌力。但最近研究發(fā)現(xiàn)，nNOS作為β3-AR的下游因子也可維持衰竭心臟NO及活性氧的平衡［36］。

業(yè)已表明，MI后心臟β-AR信號調(diào)節(jié)紊亂［38］可導(dǎo)致病理性心臟重塑，心功能惡化［28］。運動可持續(xù)保護(hù)心功能［30］，臨床上已把運動作為治療及預(yù)防 MI的重要干預(yù)手段［19］，其作用機(jī)制可能與β3-AR表征關(guān)系密切，但缺少實驗支持。過去10年內(nèi)研究多采用持續(xù)有氧運動（AE）改善 MI大鼠心功能［28，45］，提高M(jìn)I病人生存質(zhì)量［27，3］。2013年關(guān)于高強(qiáng)度間歇有氧運動（AIT）在心臟康復(fù)中的報道，以及高強(qiáng)度AIT和持續(xù)AE的比較研究關(guān)注度日益增高。高強(qiáng)度AIT在未來改善 MI癥狀［20］，預(yù)防和治療 MI疾病及中將發(fā)揮日益重要的作用［31］。因此，本研究采用中強(qiáng)度持續(xù)AE和高強(qiáng)度AIT兩種有氧運動方式，探討其對LV中β3-AR和其下游分子eNOS和nNOS表達(dá)，及對MI大鼠心臟功能的影響，為運動改善MI疾病，探索安全有效治療預(yù)防MI的運動康復(fù)方案提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組

實驗動物為3月齡雄性Sprague Dawley大鼠48只，體重190～210g，購于由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心，（動物質(zhì)量合格證號:陜醫(yī)動證字08-004號）。動物隨機(jī)分為正常對照組（C），心肌梗死組（MI），心梗＋中強(qiáng)度持續(xù)有氧運動組（ME1），心梗＋高強(qiáng)度間歇有氧運動組（ME2）。每組12只。動物室內(nèi)溫度為18℃～23℃，濕度為50%～60%。大鼠均采用國家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動物干燥飼料喂養(yǎng)，自由飲食，C組大鼠常規(guī)籠內(nèi)安靜飼養(yǎng)，MI組采用左冠狀動脈前降支（LAD）結(jié)扎法，建立 MI模型。ME1和ME2組進(jìn)行為期8wk的小動物跑臺運動。

1.2 主要儀器和試劑

主要儀器為PowerLab／8s生理信號采集處理系統(tǒng)，ALC-V8動物呼吸機(jī)，BM-Ⅱ型病理組織包埋機(jī)，生物組織攤烤片機(jī)，LEICA-RM 2126切片機(jī)，BX51奧林巴斯光學(xué)顯微鏡，Nikon Eclipse 55i熒光顯微鏡，低溫高速離心機(jī)，酶標(biāo)儀，Biorad電泳儀和轉(zhuǎn)移槽，凝膠成像儀等。主要試劑包括兔抗大鼠多克隆抗體β3-AR、eNOS和nNOS均購于Santa Cruz、cell signaling和Signalway公司。

1.3 心梗模型制備

采用5%的戊巴比妥鈉（30mg／kg）腹腔麻醉大鼠，采用呼吸機(jī)連接自制面罩輔助呼吸，小動物呼吸機(jī)參數(shù)調(diào)至呼吸頻率為66次／min，潮氣量為10ml，吸呼比為2∶1，多道生理信號采集處理系統(tǒng)記錄大鼠肢導(dǎo)心電圖（ECG）。開胸暴露心臟，于左心耳根部和肺動脈圓錐左緣交界下2 mm處用5／0手術(shù)線結(jié)扎左冠狀動脈前降支（LAD），結(jié)扎后肉眼可見結(jié)扎遠(yuǎn)端心肌顏色逐漸變淺或變白，大鼠MI后心電圖出現(xiàn)S-T段抬高或T波倒置現(xiàn)象。由此斷定MI模型造模成功。然后逐層縫合關(guān)胸。ME1和ME2組大鼠在MI模型成功后1周開始訓(xùn)練。

1.4 動物運動方案

1.4.1 中強(qiáng)度持續(xù)有氧運動方案

運動方案參照Xu［43］等人的研究進(jìn)行。ME1組大鼠MI術(shù)后一周進(jìn)行跑臺運動。第一周為適應(yīng)性訓(xùn)練（10m／min，10min／d，共5d）。正式訓(xùn)練時，起始訓(xùn)練速度10m／min，時間為5min。之后以3m／min速度逐漸遞增至16 m／min，運動總時間為60min（運動強(qiáng)度60%～70%˙VO2max）。每周訓(xùn)練5d，連續(xù)訓(xùn)練8wk。

1.4.2 高強(qiáng)度間歇有氧運動方案

運動方案參考 Wisloff［42］訓(xùn)練模型略加改動。ME2組大鼠MI術(shù)后一周進(jìn)行跑臺運動。第一周為適應(yīng)性訓(xùn)練（15m／min，30min／d，共5d）。正式訓(xùn)練時，起始訓(xùn)練速度10m／min，時間為10min。之后進(jìn)行間歇性大強(qiáng)度有氧運動，速度為25m／min（運動強(qiáng)度85%～90%˙VO2max），運動7min；然后間歇3min，速度為15m／min（運動強(qiáng)度50%～60%˙VO2max），之后依次交替進(jìn)行，運動總時間為60min。每周訓(xùn)練5d，連續(xù)訓(xùn)練8wk。

1.5 血流動力學(xué)指標(biāo)測定

8wk運動結(jié)束后次日，采用多導(dǎo)生理記錄儀記錄心電圖，同步測試左室收縮壓（LVSP）、左室舒張末壓（LVEDP）、左室壓力最大上升速率（＋dp／dtmax）和最大下降速率（-dp／dt max）等心功能指標(biāo)。數(shù)據(jù)采集完畢后，迅速開胸摘取心臟，進(jìn)行后續(xù)實驗。

1.6 心臟樣品處理

每組隨機(jī)選取6只大鼠心臟，置于10%中性甲醛溶液固定24h后，流水沖洗、梯度乙醇脫水、二甲苯透明，石蠟包埋。連續(xù)切片（厚5μm），常規(guī)制片，用于Masson染色和免疫熒光實驗。另取6只大鼠心臟鋁箔紙包裹，速入液氮后，移至-80℃低溫冰箱保存，用于 Western Blot實驗。

1.7 免疫熒光實驗

切片脫蠟至水，PBS清洗，抗原修復(fù)后用山羊血清在濕盒中37℃封閉30min，滴加一抗（兔抗大鼠多克隆抗體β3-AR，1∶50），濕盒中4℃過夜，室溫復(fù)溫45min，PBS沖洗，滴加TRITC標(biāo)記的二抗（1∶200），37℃濕盒中孵育1 h，PBS沖洗，滴加DAPI避光孵育2min，PBS沖洗，封片劑封片。每次染色設(shè)置空白對照（PBS取代一抗和二抗）及陰性對照（PBS取代一抗）。采用熒光顯微鏡觀察，低倍鏡選位，400倍鏡下拍照。

1.8 Western Blot實驗

采用RIPA試劑提取總蛋白質(zhì)，Bradford方法測定蛋白質(zhì)濃度。等量蛋白質(zhì)采用12%SDS聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳進(jìn)行分離，然后轉(zhuǎn)至NC膜上，麗春紅染膜，室溫?fù)u動封閉（3%BSA，TBST稀釋）30min后，分別加入兔抗β3-AR（1∶800）、eNOS（1∶500）、nNOS（1∶400）多克隆抗體，4℃過夜，室溫下洗膜后加入辣根過氧化物酶羊抗兔IgG抗體（Jackson，1∶10000）孵育30min，室溫下洗膜后用化學(xué)發(fā)光底物ECL（Millipore）進(jìn)行發(fā)光顯跡。內(nèi)參為GAPDH蛋白，計算目的蛋白與內(nèi)參蛋白條帶的積分光密度（Integral Optical Density，IOD）。

1.9 數(shù)據(jù)采集與統(tǒng)計學(xué)處理

組織切片經(jīng)光鏡觀察，采用Image Pro-plus 6.0軟件進(jìn)行測量分析。Western Blot實驗結(jié)果膠片用Image Quant TLv2005軟件分析處理，所得數(shù)據(jù)用 GraghPad Prism 6.0軟件轉(zhuǎn)換作圖。所有數(shù)據(jù)均運用SPSS 17.0for Windows軟件包進(jìn)行處理，采用單因素方差分析進(jìn)行顯著性差異分析。P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（D）表示。

2 實驗結(jié)果

2.1 心功能參數(shù)的變化

心功能參數(shù)結(jié)果顯示，MI組較C組LVEDP顯著升高（P＜0.01），LVSP和-dP／dt max顯著降低（P＜0.05）。與MI組比較，ME1組 LVEDP顯著降低（P＜0.01），-dP／dt max顯著升高（P＜0.05）。ME2組LVEDP顯著降低（P＜0.01），LVSP顯著升高（P＜0.05）。ME1組和 ME2組無顯著差異（表1）。

表1 本研究大鼠血流動力學(xué)參數(shù)變化一覽表Table 1 The Comparsion of Different Index of Hemodynamic in Rats

2.2 Masson染色觀察結(jié)果

Masson染色結(jié)果顯示，C組心肌細(xì)胞排列整齊，膠原纖維所占比例較少。與C組比較，MI后心肌組織結(jié)構(gòu)紊亂，膠原容積百分比（CVF）是反映心肌間質(zhì)纖維化的指標(biāo)，MI后CVF（62.55±12.35%，P＜0.01）較C組顯著增加（6.17±1.06%），膠原纖維顯著增多。ME1和 ME2組心肌組織結(jié)構(gòu)有一定程度改善，并顯著降低了MI后CVF（39.6±5.42%，37.92±8.83%，P＜0.01），表明8周有氧運動可抑制MI后膠原的過度增生。ME1組和ME2組無顯著差異（圖1）。

2.3 左心室β3-AR表達(dá)的觀察結(jié)果

β3-AR免疫熒光結(jié)果顯示，C組大鼠LV肌β3-AR陽性染色極少。MI組，ME1和ME2組均可見LV肌β3-AR陽性染色，呈亮紅色顆粒。主要位于心肌細(xì)胞膜表面，呈點狀分布（圖2）。

β3-AR的 Western Blot結(jié)果顯示，MI組大鼠LV中β3-AR蛋白表達(dá)較C組有增高趨勢，差異不顯著。ME1組β3-AR蛋白表達(dá)較 MI組顯著增加（P＜0.05）。ME2組β3-AR蛋白表達(dá)較MI組有增加趨勢。ME1組和ME2組無顯著差異（圖3-A）。

圖1 本研究大鼠心肌組織Masson染色（×400）Figure 1.Masson Dyeing Results in Rat Myocardium（×400）

圖2 本研究大鼠心肌β3-AR免疫熒光染色圖（×400）Figure 2 .Immunofluoresence Staining of Cardiacβ3-adrenergic Receptors（×400）

2.4 左心室eNOS和nNOS蛋白表達(dá)的Western Blot結(jié)果

Western Blot結(jié)果顯示，MI組大鼠LV中eNOS蛋白表達(dá)較C組有下降趨勢，nNOS蛋白表達(dá)顯著增加（P＜0.01）。ME1組eNOS和nNOS表達(dá)較 MI組均顯著增加（P＜0.05）。ME2組eNOS和nNOS表達(dá)較MI組均顯著增加（P＜0.01）。ME1組和 ME2組無顯著差異（圖3-B，C）。

圖3 本研究大鼠心肌β3-AR，eNOS和nNOS表達(dá)的Western Blot結(jié)果示意圖（×400）Figure 3.Western Blot Results of Cardiacβ3-adrenergic Receptors，eNOS and nNOS Protein Expression（×400）

3 分析與討論

近年來，通過運動干預(yù)改善心血管疾病的研究逐漸增多。過去研究多采用持續(xù)AE改善 MI大鼠心功能［28，45］。近期關(guān)于高強(qiáng)度AIT在心臟康復(fù)中的研究，以及高強(qiáng)度AIT和持續(xù)AE的比較研究日益增多。2013年研究表明，AIT可改善MI大鼠病理性心臟重塑和線粒體功能紊亂［24］，且采用高強(qiáng)度AIT較持續(xù)AE能更有效增加心臟病人最大攝氧量［33］，改善有氧運動能力［34］，但兩種運動方式在改善左心室射血分?jǐn)?shù)［21］、心臟收縮功能及骨骼肌適應(yīng)能力［34］方面并無顯著差異。本研究結(jié)果證實，在8周有氧運動后ME1和ME2組CVF和LVEDP均較MI后顯著降低，ME1組-dP／dt max顯著升高，ME2組LVSP顯著增加，表明中強(qiáng)度持續(xù)AE和高強(qiáng)度AIT均可抑制MI后膠原過度增生，提高LV舒縮功能，保護(hù)MI大鼠心功能。且兩種運動方式在對心功能改善上無顯著差異。運動訓(xùn)練提升心功能的機(jī)制是多方面的［30］，包括運動導(dǎo)致的心臟生理性重塑［19］、心肌細(xì)胞再生［23］、血管重塑［17］、運動的抗炎效應(yīng)、對外周及中樞氧化應(yīng)激的抑制［2］、神經(jīng)體液調(diào)節(jié)平衡的恢復(fù)［7，15，37］等。本研究重點從心肌β3-AR角度探討運動對MI的保護(hù)。

傳統(tǒng)觀點認(rèn)為，β3-AR主要分布于白色及棕色脂肪細(xì)胞膜上，加速脂肪分解，調(diào)節(jié)能量代謝［14］。早期發(fā)現(xiàn)人類心臟中存在β3-AR。β3-AR興奮可發(fā)揮負(fù)性肌力作用，與β1／β2-AR的正性肌力相拮抗。MI后心臟交感神經(jīng)系統(tǒng)過度激活，β1／β2-AR對β-AR激動的反應(yīng)下降、β1-AR表達(dá)下調(diào)、β1／β2-AR脫敏／脫偶聯(lián)，導(dǎo)致β1／β2-AR的正性肌力作用受損［28］，而持續(xù)高濃度的兒茶酚胺（CA）導(dǎo)致β3-AR上調(diào)［11］，過去認(rèn)為衰竭心臟β3-AR激活導(dǎo)致LV及心肌細(xì)胞功能紊亂［35］。但近期研究表明，β3-AR是治療 MI等心臟疾病的潛在靶點。心肌過表達(dá)β3-AR可減輕LV肥大，保護(hù)心臟［36，41］。正常小鼠心臟敲除β3-AR后小鼠表現(xiàn)出輕度左室肥大，并隨年齡增長而惡化。壓力超負(fù)荷小鼠敲除β3-AR可抑制LV收縮功能，增加心肌纖維化，LV重塑［9］，并加劇NOS解偶聯(lián)，增加NOS來源的氧化應(yīng)激水平。心肌β3-AR的激活可作為一種保護(hù)機(jī)制來對抗MI［32］。文獻(xiàn)報道，運動訓(xùn)練可提高心血管疾病模型動物β-AR應(yīng)答性［29］、改善β-AR 脫敏［28］、增加 β1-AR 蛋白水平［15，5］、使β1／β2-AR的比例恢復(fù)正常［6，22］，保護(hù)心臟。目前運動與β3-AR表征研究備受關(guān)注，運動訓(xùn)練可增加缺血再灌注小鼠β3-AR表達(dá)［9］，而本研究發(fā)現(xiàn)，MI組，ME1和ME2組均可見LV肌β3-AR陽性染色，主要位于心肌細(xì)胞膜表面。與MI組相比，ME1組LV中β3-AR蛋白表達(dá)顯著增加，ME2組β3-AR表達(dá)有上升趨勢。本研究結(jié)果表明，MI大鼠通過中強(qiáng)度持續(xù)AE和高強(qiáng)度AIT兩種運動方式干預(yù)，心功能得到提升，與β3-AR上調(diào)密切相關(guān)。有氧運動通過心臟β3-AR的激活對抗 MI，β3-AR可能是心臟疾病康復(fù)運動效應(yīng)的潛在靶點。據(jù)文獻(xiàn)報道，β3-AR上調(diào)機(jī)制與β3／1-AR比例增加［36］，鈣瞬變峰值下降和L型鈣電流減少相關(guān)［11］。

一氧化氮合酶在調(diào)節(jié)心功能中發(fā)揮關(guān)鍵作用［18，44］。心肌eNOS［10，16］及 nNOS［13］在 MI后心功能保護(hù)中發(fā)揮重要作用。eNOS缺失小鼠在MI后LV功能紊亂及重塑加劇，eNOS過表達(dá)小鼠可降低 MI后左室功能紊亂［26］。nNOS敲除小鼠在MI后兩天心功能受損，心肌收縮力降低［40］，心肌細(xì)胞鈣瞬變振幅，L型鈣通道活性及心臟收縮鈣離子水平顯著增加，且室性心律失常發(fā)生率增高，并更易患心室纖顫［8］。以前研究認(rèn)為，心臟中β3-AR主要通過eNOS-NO介導(dǎo)其負(fù)性肌力作用。但近期研究表明，nNOS是除了eNOS以外，β3-AR 的下游因子［36］。MI后心肌eNOS分布不變而密度降低，nNOS表達(dá)及活性增加［12］。nNOS從肌漿網(wǎng)蘭尼堿受體（RyR）易位到肌細(xì)胞膜與小窩蛋白3相互作用［4］，從而替代eNOS，通過Gi蛋白-nNOSNO通路，發(fā)揮負(fù)性肌力作用［25］。文獻(xiàn)報道，β3-AR激動劑可通過上調(diào)eNOS和nNOS［36］，抑制氧化應(yīng)激和病理性心臟重塑［32］，對心肌產(chǎn)生保護(hù)效應(yīng)。運動訓(xùn)練通過刺激β3-AR，增加eNOS生成，保護(hù)心肌免受缺血再灌注損傷［9］。本研究發(fā)現(xiàn)，MI后LV中eNOS蛋白表達(dá)有下降趨勢，nNOS表達(dá)顯著增加。而8wk有氧運動后，ME1和ME2組eNOS和nNOS蛋白表達(dá)較MI組均顯著增加。該結(jié)果表明，中強(qiáng)度持續(xù)AE和高強(qiáng)度AIT兩種運動方式均可上調(diào)eNOS及nNOS蛋白表達(dá)，有氧運動通過激活心臟β3-AR保護(hù)心肌免受MI損傷，與下游分子eNOS及nNOS蛋白表達(dá)增加有關(guān)。據(jù)文獻(xiàn)報道，運動激活eNOS保護(hù)心臟的機(jī)制，與運動后血清及心臟中的NO代謝物-亞硝酸鹽和亞硝基硫醇增加相關(guān)。當(dāng)NO代謝物恢復(fù)到正常水平時，運動對心臟的保護(hù)作用也消失［9］。nNOS可抑制黃嘌呤氧化酶，降低超氧陰離子水平。運動后nNOS上調(diào)對心臟的保護(hù)機(jī)制可能與其維持了心臟NO及活性氧的平衡有關(guān)［25，39］。

目前，關(guān)于運動訓(xùn)練干預(yù)改善心血管疾病的研究，關(guān)注度逐漸傾向于高強(qiáng)度AIT，其在未來改善MI癥狀，預(yù)防和治療MI疾病中將發(fā)揮日益重要的作用［20］。傳統(tǒng)觀點認(rèn)為，MI患者進(jìn)行高強(qiáng)度AIT運動存在一定危險性，但Meta分析統(tǒng)計在7項研究報告中，其中6項報道了高強(qiáng)度AIT的安全性，并未發(fā)現(xiàn)造成嚴(yán)重心臟不良事件，未增加心臟疾病患者急性MI或猝死的危險。受試患者進(jìn)行高強(qiáng)度AIT的完成率（90%）與持續(xù)有氧運動（91%）完成率基本一致。需要強(qiáng)調(diào)的是，在運動方案實施過程中，所有低射血分?jǐn)?shù)的心衰患者都必須進(jìn)行心肺運動試驗測試，并且經(jīng)過嚴(yán)格詳細(xì)的評估和運動指導(dǎo)監(jiān)督［21］。

4 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)中強(qiáng)度持續(xù)有氧運動和高強(qiáng)度間歇有氧運動均可通過增加左心室β3-AR表征，上調(diào)其下游因子eNOS及nNOS表達(dá)，進(jìn)而抑制心梗后膠原過度增生，保護(hù)心梗大鼠心功能，且兩種運動方式在對心功能提升上無顯著差異。病理心臟通過運動干預(yù)后心功能改善與β3-AR上調(diào)關(guān)系密切。β3-AR表征研究使得對β-AR的認(rèn)識提高到一個新階段，進(jìn)一步探討心臟運動康復(fù)與β3-AR表征研究，將為心臟運動康復(fù)手段篩選提供新思路。

［1］ARAGON J P，CONDIT M E，BHUSHAN S，et al.Beta3-adrenoreceptor stimulation ameliorates myocardial ischemia-reperfusion injury via endothelial nitric oxide synthase and neuronal nitric oxide synthase activation［J］.J Am Coll Cardiol，2011，58（25）:2683-2691.

［2］BARBOSA V A，LUCIANO T F，VITTO M F，et al.Exercise training plays cardioprotection through the oxidative stress reduction in obese rats submitted to myocardial infarction［J］.Int J Cardiol，2012，157（3）:422-424.

［3］BELARDINELLI R，GEORGIOU D，CIANCI G，et al.10-year exercise training in chronic heart failure:a randomized controlled trial［J］.J Am Coll Cardiol，2012，60（16）:1521-1528.

［4］BENDALL J K，DAMY T，RATAJCZAK P，et al.Role of myocardial neuronal nitric oxide synthase-derived nitric oxide in beta-adrenergic hyporesponsiveness after myocardial infarction-induced heart failure in rat［J］.Circulation，2004，110（16）:2368-2375.

［5］BIDASEE K R，ZHENG H，SHAO C H，et al.Exercise training initiated after the onset of diabetes preserves myocardial function:effects on expression of beta-adrenoceptors［J］.J Appl Phys，2008，105（3）:907-914.

［6］BILLMAN G E，KUKIELKA M，KELLEY R，et al.Endurance exercise training attenuates cardiac beta2-adrenoceptor responsiveness and prevents ventricular fibrillation in animals susceptible to sudden death ［J］.Am J Phys Heart Circ Phys，2006，290（6）:H2590-2599.

［7］BITO V，D E WAARD M C，BIESMANS L，et al.Early exercise training after myocardial infarction prevents contractile but not electrical remodelling or hypertrophy［J］.Cardiovasc Res，2010，86（1）:72-81.

［8］BURGER D E，LU X，LEI M，et al.Neuronal nitric oxide synthase protects against myocardial infarction-induced ventricular arrhythmia and mortality in mice［J］.Circulation，2009，120（14）:1345-1354.

［9］CALVERT J W，CONDIT M E，ARAGON J P，et al.Exercise protects against myocardial ischemia-reperfusion injury via stimulation of beta（3）-adrenergic receptors and increased nitric oxide signaling:role of nitrite and nitrosothiols［J］.Circ Res，2011，108（12）:1448-1458.

［10］CHEN L L，ZHU TB，YIN H，et al.Inhibition of MAPK signaling by eNOS gene transfer improves ventricular remodeling after myocardial infarction through reduction of inflammation［J］.Mol Biol Rep，2010，37（7）:3067-3072.

［11］CHENG H J，ZHANG Z S，ONISHI K，et al.Upregulation of functional beta（3）-adrenergic receptor in the failing canine myocardium［J］.Circ Res，2001，89（7）:599-606.

［12］DAMY T，RATAJCZAK P，SHAH A M，et al.Increased neuronal nitric oxide synthase-derived NO production in the failing human heart［J］.Lancet，2004，363（9418）:1365-1367.

［13］DAWSON D，LYGATE C A，ZHANG M H，et al.nNOS gene deletion exacerbates pathological left ventricular remodeling and functional deterioration after myocardial infarction［J］.Circulation，2005，112（24）:3729-3737.

［14］DE LUIS DA，ALLER R，IZAOLA O，et al.Relation of

Trp64Arg polymorphism of beta 3-adrenergic receptor gene to adipocytokines and fat distribution in obese patients［J］.Ann Nutr Metab，2008，52（4）:267-271.

［15］DE WAARD M C，VAN DER VELDEN，J BITO V，et al.Early exercise training normalizes myofilament function and attenuates left ventricular pump dysfunction in mice with a large myocardial infarction［J］.Circ Res，2007，100（7）:1079-1088.

［16］DE WAARD M C，VAN DER VELDEN J，BOONTJE N M，et al.Detrimental effect of combined exercise training and eNOS overexpression on cardiac function after myocardial infarction［J］.Am J Phys Heart Circ Phys，2009，296（5）:H1513-1523.

［17］DUNCKER D J，BACHE R J.Regulation of coronary blood flow during exercise［J］.Physiol Rev，2008，88（3）:1009-1086.

［18］FORSTERMANN U，SESSA WC.Nitric oxide synthases:regulation and function［J］.Eur Heart J，2012，33（7）:829-837，837a-837d.

［19］GIALLAURIA F，ACAMPA W，RICCI F，et al.Exercise training early after acute myocardial infarction reduces stress-induced hypoperfusion and improves left ventricular function［J］.Eur J Nucl Med Mol Imaging，2013，40（3）:315-324.

［20］GODFREY R，THEOLOGOU T，DELLEGROTTAGLIE S，et al.The effect of high-intensity aerobic interval training on postinfarction left ventricular remodelling［EB／OL］.https:／／kclpure.kcl.ac.uk／portal／en／publications／the-effect-of-highintensity-aerobic-interval-training-on-postinfarction-left-ventricular-remodelling（889a7a79-9803-4aa4-97ca-1ed35601ab76）.html.

［21］HAYKOWSKY M J，TIMMONS M P，KRUGER C，et al.Meta-analysis of aerobic interval training on exercise capacity and systolic function in patients with heart failure and reduced ejection fractions［J］.Am J Cardiol，2013，111（10）:146-149.

［22］HOLYCROSS B J，KUKIELKA M，NISHIJIMA Y，et al.Exercise training normalizes beta-adrenoceptor expression in dogs susceptible to ventricular fibrillation［J］.Am J Phys Heart Circ Phys，2007，293（5）:H2702-2709.

［23］KAJSTURA J，URBANEK K，PERL S，et al.Cardiomyogenesis in the adult human heart［J］.Circ Res，2010，107（2）:305-315.

［24］KRALJEVIC J，MARINOVIC J，PRAVDIC D，et al.Aerobic interval training attenuates remodeling and mitochondrial dysfunction in post-infarction failing rat heart［J］.Cardiovasc Res，2013，99（1）:55-64.

［25］KULANDAVELU S，HARE J M.Alterations in beta3-adrenergic cardiac innervation and nitric oxide signaling in heart failure［J］.J Am Coll Cardiol，2012，59（22）:1988-1990.

［26］LANDMESSER U，ENGBERDING N，BAHLMANN F H，et al.Statin-induced improvement of endothelial progenitor cell mobilization，myocardial neovascularization，left ventricular function，and survival after experimental myocardial infarction requires endothelial nitric oxide synthase［J］.Circulation，2004，110（14）:1933-1939.

［27］LEE H Y，KIM J H，KIM B O，et al.Regular exercise training reduces coronary restenosis after percutaneous coronary inter-vention in patients with acute myocardial infarction［J］.Int J Cardiol，2012，167（6）:2617-2622.

［28］LEOSCO D，RENGO G，IACCARINO G，et al.Exercise promotes angiogenesis and improves beta-adrenergic receptor signalling in the post-ischaemic failing rat heart［J］.Cardiovasc Res，2008，78（2）:385-394.

［29］MACDONNELL S M，KUBO H，CRABBE D L，et al.Improved myocardial beta-adrenergic responsiveness and signaling with exercise training in hypertension［J］.Circulation，2005，111（25）:3420-3428.

［30］MANN N，ROSENZWEIG A.Can exercise teach us how to treat heart disease［J］.Circulation，2012，126（22）:2625-2635.

［31］MEYER P，GAYDA M，JUNEAU M，et al.High-intensity aerobic interval exercise in chronic heart failure［J］.Curr Heart Fail Rep，2013，10（2）:130-138.

［32］MOENS A L，LEYTON-MANGE J S，NIU X，et al.Adverse ventricular remodeling and exacerbated NOS uncoupling from pressure-overload in mice lacking the beta3-adrenoreceptor［J］.J Mol Cell Cardiol，2009，47（5）:576-585.

［33］MOHOLDT T，AAMOT I L，GRANOIEN I，et al.Aerobic interval training increases peak oxygen uptake more than usual care exercise training in myocardial infarction patients:a randomized controlled study［J］.Clin Rehabil，2012，26（1）:33-44.

［34］MOREIRA J B，BECHARA L R，BOZI L H，et al.High-versus moderate-intensity aerobic exercise training effects on skeletal muscle of infarcted rats［J］.J Appl Phys，2013，114（8）:1029-1041.

［35］MORIMOTO A，HASEGAWA H，CHENG H J，et al.Endogenous beta3-adrenoreceptor activation contributes to left ventricular and cardiomyocyte dysfunction in heart failure［J］.Am J Phys Heart Circ Phys，2004，286（6）:H2425-2433.

［36］NIU X，WATTS V L，CINGOLANI O H.Cardioprotective effect of beta-3adrenergic receptor agonism:role of neuronal nitric oxide synthase［J］.J Am Coll Cardiol，2012，59（22）:1979-1987.

［37］PATEL K P，ZHENG H.Central neural control of sympathetic nerve activity in heart failure following exercise training［J］.Am J Phys Heart Circ Phys，2012，302（3）:H527-537.

［38］PERRINO C，NAGA PRASAD S V，SCHRODER J N，et al.Restoration of beta-adrenergic receptor signaling and contractile function in heart failure by disruption of the betaARK1／phosphoinositide 3-kinase complex［J］.Circulation，2005，111（20）:2579-2587.

［39］ROOF S R，TANG L，OSTLER J E，et al.Neuronal nitric oxide synthase is indispensable for the cardiac adaptive effects of exercise［J］.Basic Res Cardiol，2013，108（2）:332.

［40］SARAIVA R M，MINHAS K M，RAJU S V，et al.Deficiency of neuronal nitric oxide synthase increases mortality and cardiac remodeling after myocardial infarction:role of nitroso-redox equilibrium［J］.Circulation，2005，112（22）:3415-3422.

［41］TAVERNIER G，TOUMANIANTZ G，ERFANIAN M，et al.beta3-Adrenergic stimulation produces a decrease of cardiac contractility ex vivo in mice overexpressing the human beta3-adrenergic receptor［J］.Cardiovasc Res，2003，59（2）:288-296.

［42］WISLOFF U，LOENNECHEN J P，CURRIE S，et al.Aerobic exercise reduces cardiomyocyte hypertrophy and increases contractility，Ca2＋sensitivity and SERCA-2in rat after myocardial infarction［J］.Cardiovasc Res，2002，54（1）:162-174.

［43］XU X，WAN W，JI L，et al.Exercise training combined with an-giotensin II receptor blockade limits post-infarct ventricular remodelling in rats［J］.Cardiovasc Res，2008，78（3）:523-532.

［44］ZHANG Y H，CASADEI B.Sub-cellular targeting of constitutive NOS in health and disease［J］.J Mol Cell Cardiol，2012，52（2）:341-350.

［45］ZHENG H，SHARMA N M，LIU X，et al.Exercise training normalizes enhanced sympathetic activation from the paraventricular nucleus in chronic heart failure:role of angiotensin II［J］.Am J Phys Regul Integr Comp Phys，2012，303（4）:R387-394.