幽門螺桿菌相關(guān)性胃潰瘍與胃癌中NF-κB、TFF3的表達(dá)及意義

張 蓉，閆再宏，張俊英

中國石油中心醫(yī)院消化科，河北 廊坊 065000

胃癌居消化道腫瘤死亡原因的首位，是我國最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重影響人類的健康。許多研究已證明幽門螺桿菌(H.pylori)感染與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)，同時(shí)H.pylori亦是消化性潰瘍的一個(gè)重要致病因素。近年來分別研究核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)和三葉因子3(TFF3)在胃癌中的表達(dá)已成為熱點(diǎn)之一。目前對(duì)NF-κB和TFF3在胃癌中的相互關(guān)系研究甚少。本課題采用免疫組織化學(xué)染色，聯(lián)合檢測H.pylori感染和NF-κB、TFF3在幽門螺桿菌相關(guān)性胃潰瘍與胃癌中的表達(dá)情況，進(jìn)一步討論他們?cè)谖赴┌l(fā)生發(fā)展中的作用及相互關(guān)系，為胃癌的早期診斷和臨床防治提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2010年－2012年胃鏡活檢及胃癌根治術(shù)后標(biāo)本蠟塊共130例，其中男98例，女32例，年齡20～80歲，平均年齡(57.1±10.2)歲。其中胃潰瘍組(GU)60例，胃癌組(GC)70例。所有患者術(shù)前或檢查1個(gè)月無鉍劑、抗生素、糖皮質(zhì)激素及非甾體類抗炎藥史，所有病例均經(jīng)過胃鏡及病例共同診斷。

1.2 試劑與方法 采用免疫組化SACB法檢測，兔抗人NF-κBp65多克隆抗體、兔抗人TFF3多克隆抗體、檸檬酸抗原修復(fù)緩沖液、DAB染色劑等購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，切片染色前根據(jù)抗體要求行檸檬酸緩沖液高溫，高壓抗原修復(fù)，余具體操作過程按試劑盒說明書完成，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。用已知胃癌陽性切片作陽性對(duì)照。H.pylori診斷采用Giemsa染色檢測和快速尿素酶方法結(jié)合13C尿素呼氣試驗(yàn)，其中兩項(xiàng)陽性者判斷為幽門螺桿菌感染陽性。胃H.pylori檢測試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。ZC-202型13C質(zhì)譜儀購自合肥眾成生物工程設(shè)備有限公司。

1.3 結(jié)果判定 免疫組化染色陽性結(jié)果表現(xiàn)為以胞質(zhì)和(或)胞核出現(xiàn)淡黃色或棕黃色、棕褐色顆粒為陽性。采用雙盲法，有2名病理醫(yī)生獨(dú)立評(píng)分。在排除非特異性染色及邊緣效應(yīng)前提下，高倍鏡下觀察并判定染色強(qiáng)度:無著色0分，染色弱1分，染色清晰2分，染色強(qiáng)3分。每例觀察5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞:陽性細(xì)胞百分率＜10%為0分，10% ～25%為1分，25% ～50%為2分，＞50%為3分。結(jié)果取2項(xiàng)評(píng)分之和:0～1分為陰性，≥2分為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，采用χ2檢驗(yàn)和Spearman相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NF-κBp65和TFF3在胃潰瘍和胃癌中的表達(dá) GC中NF-κBp65和TFF3的陽性表達(dá)率均明顯高于GU(χ2為25.361，P ＜0.01;χ2為 11.475，P ＜0.01，見表1)。

表1 NF-κBp65和 TFF3在胃潰瘍和胃癌中的表達(dá)率[例(%)]Tab1 The expression of NF-κBp65 and TFF3 in gastric ulcer and gastric cancer[n(%)]

2.2 胃癌組織中NF-κBp65與TFF3表達(dá)的相關(guān)性70例胃癌組織中NF-κBp65與TFF3均呈陽性者34例，均呈陰性者13例。NF-κBp65呈陽性而TFF3呈陰性者19例，NF-κBp65呈陰性而TFF3呈陽性者4例。經(jīng)Spearman相關(guān)分析NF-κBp65與TFF3表達(dá)具有相關(guān)性并呈正相關(guān)(r=0.350，P=0.003，見表 2)。

2.3 NF-κBp65、TFF3 在不同病變中與 H.pylori感染的關(guān)系分析 GU中 H.pylori陽性病例中 NF-κBp65、TFF3表達(dá)顯著高于H.pylori陰性病例(P均＜0.05)，GC 中 H.pylori陽性和陰性病例 NF-κBp65、TFF3表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05，見表3)。H.pylori感染病例中，GC 組的 NF-κBp65、TFF3 表達(dá)水平均比GU組高(P均＜0.05);H.pylori陰性病例中，GC組的NF-κBp65、TFF3表達(dá)水平亦均比GU組高(P均 ＜0.01，見表4)。

表2 胃癌組織NF-κBp65與TFF3表達(dá)的關(guān)系Tab1 The relations of NF-κBp65 and TFF3 in gastric cancer

表3 根據(jù)病變分組H.pylori感染率及NF-κBp65和TFF3表達(dá)的關(guān)系Tab3 The relations of NF-κBp65，TFF3 and H.pylori in different lesions

表4 根據(jù)H.pylori感染情況分組NF-κBp65和TFF3的表達(dá)Tab4 The expression of NF-κBp65 and TFF3 in H.pylori positive and negative groups

3 討論

NF-κB是近年研究發(fā)現(xiàn)的一種核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，它廣泛存在于體內(nèi)多種細(xì)胞中，參與多種病理生理過程，其活化形式通常指NF-κBp65。越來越多資料表明，NF-κB在胃癌組織中異常表達(dá)，與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。Sasaki等[1]發(fā)現(xiàn)胃癌組織中NF-κB持續(xù)性活化，較癌旁組織中NF-κB的活性要高(P＜0.0001)。TFF3作為一種新的胃腸道特異性保護(hù)因子，與腫瘤的關(guān)系日益受到重視。在病理狀態(tài)下，TFF3會(huì)出現(xiàn)異常表達(dá)。Leung等[2]發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中TFF3的表達(dá)率較正常組織明顯升高。本研究結(jié)果顯示，GC中 NF-κBp65和TFF3的陽性表達(dá)率均明顯高于GU(P均＜0.01)，這說明 NF-κBp65和 TFF3表達(dá)量可能與胃癌的發(fā)生發(fā)展有著密切關(guān)系。這對(duì)于我們?cè)谖哥R下區(qū)別良惡性潰瘍的診斷提供理論依據(jù)。

目前研究發(fā)現(xiàn)TFF3的生理功能發(fā)揮與參與NF-κB通路調(diào)節(jié)密切相關(guān)。Chen等[3]研究發(fā)現(xiàn)TFF3能誘導(dǎo)激活NF-κB影響細(xì)胞凋亡過程。我們進(jìn)一步研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，GC中NF-κBp65的表達(dá)與TFF3的異常表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.350，P=0.003)，提示 NF-κB和TFF3在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能存在協(xié)同作用。機(jī)制可能是TFF3通過NF-κB途徑促進(jìn)相關(guān)細(xì)胞的抗凋亡作用。NF-κB和TFF3可能是潛在的臨床標(biāo)志物，及時(shí)降低或阻斷它們的過度表達(dá)可能成為胃癌防治的思路。

圖1 胃癌組織中表達(dá)的免疫組化檢測(SP 400×)A:NF-κBp65;B:TFF3Fig1 Immunohistochemical assay in gastric cancer tissues(SP 400 × )A:NF-κBp65;B:TFF3

在H.pylori相關(guān)性消化性潰瘍中，H.pylori感染通過激活NF-κB，調(diào)節(jié)許多化學(xué)趨化因子及炎癥因子基因的表達(dá)導(dǎo)致組織損傷[4]。本研究示GU組H.pylori陽性病例中NF-κBp65表達(dá)高于H.pylori陰性病例(P＜0.05)，進(jìn)一步證明 H.pylori感染對(duì) NF-κB 在胃黏膜上皮中表達(dá)水平的上調(diào)作用。TFF3主要由杯狀細(xì)胞分泌，生理狀態(tài)下在胃黏膜表達(dá)很少或不表達(dá)。TFF3通過與黏液糖蛋白相互作用或交聯(lián)，增強(qiáng)胃腸道黏膜防御屏障的保護(hù)作用，在應(yīng)用TFF3后明顯增加可溶性黏液的分泌量并增加黏度[5]。本研究顯示GU組H.pylori陽性病例中TFF3表達(dá)高于H.pylori陰性病例(P＜0.05)，提示 H.pylori感染可以促進(jìn)宿主胃黏膜TFF3表達(dá)水平的上調(diào)，進(jìn)一步說明幽門螺桿菌有可能為調(diào)節(jié)TFF3表達(dá)的因素之一。以上研究顯示H.pylori感染與NF-κB和TFF3均密切相關(guān)。也提示我們?cè)谙詽兗膊≈蟹e極治療H.pylori感染有重要的意義。

諸多研究闡明H.pylori與宿主間的相互作用是引起胃癌的主要原因。H.pylori感染內(nèi)皮細(xì)胞后能活化多種致癌通路，其中就包括 NF-κB。Hahm 等[6]研究發(fā)現(xiàn)幽門螺桿菌感染可以激活NF-κB。活化的NF-κB可調(diào)節(jié)一些因子的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞間黏附和遷移、抑制凋亡，誘導(dǎo)基因突變等進(jìn)而促進(jìn)胃癌發(fā)生。本研究中，H.pylori陽性病例中 GC 組 NF-κBp65、TFF3 表達(dá)與H.pylori感染狀態(tài)無關(guān)(P均 ＞0.05)。但 GC中 NF-κBp65和TFF3的陽性表達(dá)率均明顯高于 GU，提示H.pylori誘導(dǎo) NF-κB、TFF3 表達(dá)可能主要發(fā)生在癌前病變或胃癌形成的最早期階段，一旦進(jìn)入病變嚴(yán)重或不可逆階段，H.pylori將不再發(fā)揮重要作用。同時(shí)本研究結(jié)果顯示，H.pylori感染病例中，GC組的 NF-κBp65、TFF3表達(dá)水平均比GU組高(P均＜0.05)，說明H.pylori感染后引起 NF-κBp65和 TFF3上調(diào)的水平存在差異，表達(dá)水平較高的患者發(fā)生胃癌的可能性大，其機(jī)制可能與H.pylori菌株的個(gè)體差異及宿主遺傳因素有關(guān)。另外，H.pylori陰性病例中，GC組的NF-κBp65、TFF3表達(dá)水平均比GU組高(P均 ＜0.01)，說明在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中，除了與H.pylori感染相關(guān)外，還可能涉及其他因素影響NF-κBp65、TFF3表達(dá)水平，包括宿主體內(nèi)的一些細(xì)胞因子水平及環(huán)境因素等。

總之，本研究結(jié)果提示NF-κBp65和TFF3的高表達(dá)與胃癌的發(fā)生發(fā)展有著密切關(guān)系，二者可能存在協(xié)同作用。對(duì)于我們?cè)谖哥R下區(qū)別良惡性潰瘍的診斷及胃癌的防治提供理論依據(jù)。H.pylori感染可以上調(diào)宿主胃黏膜NF-κBp65和TFF3的表達(dá)，表達(dá)的差異與胃潰瘍與胃癌兩種不同疾病轉(zhuǎn)歸相關(guān)。同時(shí)NF-κB和TFF3可能是潛在的臨床標(biāo)志物，聯(lián)合檢測NF-κBp65、TFF3和H.pylori感染對(duì)胃癌預(yù)防及早期診斷有重要的提示作用。

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