正交試驗(yàn)法優(yōu)選延胡索浸膏的噴霧干燥工藝

呂子明 陳 凱 雷 波 于向紅 劉曉燕 梁俊清▲

1.北京以嶺藥業(yè)有限公司，北京 100027；2.北京華眾思康醫(yī)藥技術(shù)有限公司，北京 102209

延胡索為罌粟科紫堇屬植物Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥塊莖，具有活血化瘀、理氣止痛之功效[1]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，延胡索具有鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜、抗?jié)?、抑制胃酸分泌、解痙及增加冠狀動(dòng)脈血流量、抗心律失常等作用[2]。延胡索甲素、乙素等叔胺生物堿和去氫紫堇堿、巴馬亭等季胺生物堿是其發(fā)揮藥效的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。本課題組在研究含延胡索新復(fù)方中藥的制備工藝中，發(fā)現(xiàn)延胡索浸膏中延胡索乙素等叔胺生物堿的含量受溫度、濕度、空氣等因素影響很大，會(huì)變成相應(yīng)的季胺生物堿和其他結(jié)構(gòu)的生物堿。文獻(xiàn)[3-4]也報(bào)道延胡索乙素等生物堿在高溫時(shí)發(fā)生熱降解反應(yīng)，含量會(huì)降低很多。延胡索浸膏的干燥工藝是含延胡索新復(fù)方中藥制備工藝中的一個(gè)環(huán)節(jié)。中藥浸膏干燥的方法有很多種，如真空干燥、冷凍干燥、流化床干燥、噴霧干燥等。其中，噴霧干燥具有干燥時(shí)間短、干燥面積大、有效成分破壞少等優(yōu)點(diǎn)，是用于中藥液態(tài)物料干燥的一種較為理想的方法。迄今，未見有延胡索浸膏的噴霧干燥工藝的報(bào)道。所以，本課題組對(duì)其進(jìn)行了研究。本文通過正交方法，以噴霧粉水分和延胡索乙素含量為考察指標(biāo)，對(duì)影響噴霧干燥的3個(gè)主要因素進(jìn)風(fēng)口溫度、出風(fēng)口溫度、浸膏相對(duì)密度進(jìn)行考察，以確定延胡索浸膏噴霧干燥的最佳工藝。現(xiàn)將試驗(yàn)報(bào)道如下：

1 儀器與材料

SODA-12型霧干燥機(jī)（上海大川原干燥設(shè)備有限公司）；98-1-B型電熱套（天津市泰斯特儀器有限公司））；PP-05衛(wèi)生級(jí)蠕動(dòng)泵（常州城合衛(wèi)生設(shè)備廠）；Agilent 1100 Series高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；Sartorious BP211電子天平（美國賽多利斯公司）；比重計(jì)（北京華科電子儀器開發(fā)中心）。

延胡索浸膏（石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：100604）；延胡索乙素對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：0726-200208）；95%乙醇（藥用規(guī)格）； 乙腈為色譜純；水為重蒸水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 延胡索提取工藝

延胡索提取工藝為60%乙醇，提取3次，每次1.5 h，溶劑用量8倍[5]。真空減壓濃縮，得延胡索浸膏。

2.2 延胡索含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)[5-7]Phenomenex C18柱（250 mm×4.6 mm，0.5 μm）； 流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào) pH 為 6.4）（52∶48）；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：280 nm；進(jìn)樣量：10 μL。 理論塔板數(shù)按延胡索乙素峰計(jì)算不低于3 000。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取延胡索乙素對(duì)照品適量，加甲醇超聲溶解，補(bǔ)足甲醇，制成1 mL含46.3 μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取正交試驗(yàn)樣品0.02 g，置于10 mL容量瓶中，加入乙醇溶解，上中性氧化鋁柱，30 mL乙醇洗脫，流出液及洗脫液收集至50 mL量瓶中，乙醇定容至刻度；精密吸取10 mL，加乙醇稀釋至50 mL，搖勻，測定。定容后，用0.45 μm微孔濾膜過濾溶液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取延胡索乙素對(duì)照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 μL，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，測定吸收峰面積。以延胡索乙素含量（X）為橫坐標(biāo)，吸收峰面積為縱坐標(biāo)（Y）做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=36.425X+0.28，r=0.999 4。由此可知，延胡索乙素的進(jìn)樣量在0.432 8～2.164 0 μg范圍內(nèi)，其峰面積與質(zhì)量呈良好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 取濃度為46.3 μg/mL的對(duì)照品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下條件操作，每次進(jìn)樣2.0 μL，測定峰面積，計(jì)算RSD=0.37%（n=7）。說明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取濃度為46.3 μg/mL的對(duì)照品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下條件操作，在 0，6，12，18，24 h 時(shí)分別進(jìn)樣，測定峰面積，結(jié)果RSD=2.3%，說明溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取延胡索浸膏粉6份，約0.02 g/份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測定，延胡索乙素含量0.37%，RSD=1.43%。表明方法重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收率考察 精密稱取已知延胡索乙素含量的延胡索浸膏粉末6份，約0.02 g，分別置于6個(gè)10 mL的容量瓶中，分別加入濃度為46.3 μg/mL延胡索乙素溶液1 mL，加甲醇搖勻定容，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，計(jì)算延胡索乙素回收率為102.1%，RSD=2.48%。結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確可靠。

2.3 水分測定

按《中國藥典》2010年版附錄ⅨH水分測定法項(xiàng)下第一法測定。

2.4 噴霧干燥工藝參數(shù)的確定

在預(yù)試驗(yàn)和參考文獻(xiàn)[8-12]的基礎(chǔ)上，根據(jù)影響噴霧干燥的3個(gè)主要因素：進(jìn)風(fēng)口溫度（A）、出風(fēng)口溫度（B）、浸膏相對(duì)密度（C），分別選取以下3個(gè)水平進(jìn)行考察，以延胡索乙素含量和噴霧粉水分為指標(biāo)，采用L9（34）正交試驗(yàn)表進(jìn)行正交試驗(yàn)。因素水平見表1。取浸膏，等分成9份，用電熱套邊攪拌，邊濃縮成表1中的相對(duì)密度，然后每份再等分成2份，按表1進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，相同實(shí)驗(yàn)條件所得結(jié)果取平均值進(jìn)行計(jì)算。

2.4.1 延胡索乙素含量測定與結(jié)果 按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行操作，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 μL，進(jìn)樣，測定吸收峰面積并計(jì)算結(jié)果，見表2。

2.4.2 水分測定與結(jié)果 見表2。

表2 正交試驗(yàn)方案及結(jié)果

2.4.3 方差分析 分別對(duì)出粉量、延胡索乙素含量以及水分進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表3、4、5。由表3、4、5 可知，各因素對(duì)出粉量影響大小順序?yàn)镃＞A＞B，浸膏相對(duì)密度對(duì)出粉量有顯著性影響；各因素對(duì)延胡索乙素含量影響大小順序?yàn)镃＞B＞A，無顯著性影響；各因素對(duì)水分的影響依次為A＞B＞C，進(jìn)風(fēng)口溫度對(duì)水分有顯著性影響。綜合評(píng)價(jià)，優(yōu)選工藝為A3B2C3，即進(jìn)風(fēng)口溫度180℃，出風(fēng)口溫度80℃，浸膏相對(duì)密度1.15。

表3 方差分析（出粉量）

表4 方差分析（含量）

2.5 優(yōu)選工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

利用同一批浸膏按優(yōu)選工藝進(jìn)行3批驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見表6。由結(jié)果可以看出，該工藝比較穩(wěn)定，重現(xiàn)性比較好。

3 討論

試驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，延胡索浸膏在噴霧干燥進(jìn)料時(shí)選擇相對(duì)密度為1.05～1.15為宜，相對(duì)密度過高，黏稠度大，容易阻塞管路，藥粉易粘壁；如果相對(duì)密度過低，蒸發(fā)的水量增加，能耗大，效率低，藥粉顆粒太細(xì)。

表5 方差分析（水分）

表6 驗(yàn)證結(jié)果

延胡索浸膏噴霧干燥時(shí)進(jìn)風(fēng)口溫度以180℃為宜。溫度適中，可提高干燥效率，粉末含水量小。如果進(jìn)風(fēng)口溫度過高則藥粉末顏色會(huì)變得更深，化學(xué)成分含量也會(huì)降低；溫度過低則料液容易粘壁；干燥耗時(shí)長，效率低，成本高。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，以噴霧干燥方法制得的藥粉在外觀及有效成分含量上均優(yōu)于其他干燥方法，且噴霧干燥過程快，有效地減少了工序造成的損失。在設(shè)備投資與操作運(yùn)行費(fèi)方面更為經(jīng)濟(jì)，適合于大生產(chǎn)。

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