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    四種魔芋中神經(jīng)酰胺含量比較研究

    2013-10-15 10:14:26吳永堯
    化學(xué)與生物工程 2013年4期
    關(guān)鍵詞:神經(jīng)酰胺粗品魔芋

    周 浩,王 健,聶 旭,譚 軍,吳永堯

    (湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,湖南 長(zhǎng)沙410128)

    神經(jīng)酰胺(Ceramide),即N-脂酰神經(jīng)鞘胺醇,是細(xì)胞膜的組成成分鞘磷脂的基本單位,也是體內(nèi)一類(lèi)重要的生物活性物質(zhì),具有屏障[1]、粘合、保濕[2]、提高免疫和防癌抗癌的作用[3]。結(jié)合態(tài)的神經(jīng)酰胺即鞘磷脂也具有很高的利用價(jià)值,可通過(guò)磷脂酶C的定向酶解獲得。天然神經(jīng)酰胺的分子不含紫外和熒光發(fā)色團(tuán),而且難以衍生,導(dǎo)致神經(jīng)酰胺的分析比較困難[4]。目前,從天然生物原料中提取的神經(jīng)酰胺類(lèi)物質(zhì)主要有動(dòng)物源神經(jīng)酰胺和植物源神經(jīng)酰胺[5,6]。動(dòng)物源神經(jīng)酰胺因豬牛感染瘋牛病、口蹄疫等人畜共患病,其產(chǎn)品中殘留該類(lèi)病毒而引起消費(fèi)者普遍的憂(yōu)慮,使得動(dòng)物源神經(jīng)酰胺的應(yīng)用逐步萎縮。因此,較安全的植物源神經(jīng)酰胺成為研究熱點(diǎn)。

    神經(jīng)酰胺在生物試樣中的含量極低,但魔芋中神經(jīng)酰胺含量較高[7],是神經(jīng)酰胺的潛在重要來(lái)源。我國(guó)魔芋資源豐富,如果能將魔芋作為神經(jīng)酰胺的來(lái)源,將極大地提高魔芋的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

    作者在此利用HPLC-ELSD法測(cè)定了4種魔芋中的神經(jīng)酰胺含量,擬為魔芋神經(jīng)酰胺的綜合利用提供理論依據(jù)。

    1 實(shí)驗(yàn)

    1.1 材料、試劑與儀器

    魔芋:分類(lèi)學(xué)上屬于不同的種,品種待鑒定,分別編號(hào)M1~M4,M1葉柄無(wú)色、M2葉柄黃色、M3葉柄綠色、M4葉柄紅色。

    亞硫酸鈉、無(wú)水乙醇、石油醚均為分析純;甲醇為色譜純。

    超級(jí)恒溫水浴箱;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;水分測(cè)定儀;超聲波清洗器;低速離心機(jī);Agilent 1200型高效液相色譜儀(包括梯度泵G1311A、手動(dòng)進(jìn)樣器G1328B、柱恒溫系統(tǒng)G1316A、紫外檢測(cè)器和色譜工作站等),美國(guó)Agilent公司;Alltech ELSD 3300型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器,美國(guó)Alltech公司。

    1.2 方法

    1.2.1 魔芋粉的制備

    將新鮮魔芋日曬脫水,再將其切片并用亞硫酸鈉溶液護(hù)色,置于45℃的烘箱中烘干,粉碎,即得魔芋粉。

    1.2.2 魔芋神經(jīng)酰胺的提取及樣品溶液的制備

    稱(chēng)取25g魔芋粉于圓底燒瓶中,按料液比1∶10(g∶mL,下同)加入95%乙醇,在80℃下冷凝回流提取8h。離心(4000r·min-1,10min),濾紙過(guò)濾,并用50mL石油醚萃取3次。取石油醚層在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中蒸干后加入少量石油醚,在超聲波清洗器上超聲后倒入小燒杯,待溶劑揮發(fā)后,即得魔芋神經(jīng)酰胺粗品。

    準(zhǔn)確稱(chēng)取魔芋神經(jīng)酰胺粗品0.5g,置于50mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,搖勻,即得10 mg·mL-1樣品溶液。

    1.2.3 含量測(cè)定

    參照文獻(xiàn)[8],采用 HPLC-ELSD法測(cè)定魔芋中神經(jīng)酰胺的含量。

    色譜條件:色譜柱為 Agilent ZORBZX Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm,5μm);流動(dòng)相為甲醇-水;柱溫35℃;流速1mL·min-1;蒸發(fā)光散射檢測(cè)器漂移管的溫度40℃;氮?dú)饬魉?.5L·min-1;檢測(cè)靈敏度為2。

    按下式計(jì)算魔芋神經(jīng)酰胺(本實(shí)驗(yàn)測(cè)定的是CerⅡ含量,由于神經(jīng)酰胺是結(jié)構(gòu)復(fù)雜的一類(lèi)物質(zhì),可能會(huì)有其它神經(jīng)酰胺類(lèi)物質(zhì)未被檢出)的含量:

    式中:x為峰面積的自然對(duì)數(shù);y為神經(jīng)酰胺質(zhì)量(μg)的自然對(duì)數(shù)。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 4種魔芋粉的含水量

    實(shí)驗(yàn)測(cè)定了4種魔芋粉的含水量,分別為M1 10.3%、M2 10.6%、M3 10.2%、M4 10.4%。

    2.2 4種魔芋中的神經(jīng)酰胺粗品含量

    在相同條件下,從4種不同種的魔芋中提取得到的魔芋神經(jīng)酰胺粗品的含量表現(xiàn)出差異,如表1 所示。

    表1 4種魔芋神經(jīng)酰胺粗品含量Tab.1 The contents of ceramide crude from 4kinds of konjac

    由表1 可知,M4魔芋中的神經(jīng)酰胺粗品含量最高,為3.288mg·g-1。

    2.3 4種魔芋神經(jīng)酰胺含量及比較

    采用HPLC-ELSD法測(cè)定4種魔芋M1、M2、M3、M4中的神經(jīng)酰胺含量,進(jìn)樣量為20μL,結(jié)果見(jiàn)圖1。

    圖1 4種魔芋神經(jīng)酰胺的HPLC-ELSD圖譜Fig.1 HPLC-ELSD Chromatograms of ceramide from 4kinds of konjac

    由圖1可知,4種魔芋中均含有神經(jīng)酰胺,出峰效果較好。但由于魔芋神經(jīng)酰胺的脂肪酸部分長(zhǎng)度不同,因而出峰的時(shí)間也略有差異。4種魔芋神經(jīng)酰胺的色譜峰面積分別為1457、1583、1612、1731,其中峰面積最大的是M4,為1731。

    由峰面積計(jì)算得到4種魔芋神經(jīng)酰胺含量見(jiàn)圖2。

    由圖2可知,M1魔芋中神經(jīng)酰胺含量為25.72 μg·g-1,M2魔芋中神經(jīng)酰胺含量為32.73μg·g-1,M3魔芋中神經(jīng)酰胺含量為25.44μg·g-1,M4魔芋中神經(jīng)酰胺含量為43.75μg·g-1,其中神經(jīng)酰胺含量最高的是M4。

    3 結(jié)論

    圖2 4種魔芋神經(jīng)酰胺的含量Fig.2 The contents of ceramide from 4kinds of konjac

    采用HPLC-ELSD法測(cè)定了4種魔芋中的神經(jīng)酰胺含量并進(jìn)行了比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn),4種魔芋中均含有神經(jīng)酰胺,其含量與種類(lèi)有較大的關(guān)系。其中M4中神經(jīng)酰胺含量最高,達(dá)到43.75μg·g-1。

    [1]Grubauer G,F(xiàn)eingold K R,Elias P M.Relationship of epidermal lipogenesis to cutaneous barrier function[J].J Lipid Res,1987,28(6):746-752.

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    [3]丁振華.神經(jīng)酰胺在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用[C].全軍第五屆生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文,1998.

    [4]謝建平,張敏蓮,劉錚.神經(jīng)酰胺及其分析與分離技術(shù)研究進(jìn)展[J].精細(xì)化工,2002,19(7):381-384.

    [5]龔蘇曉.五種蘑菇中的神經(jīng)酰胺類(lèi)成分[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊(cè),2003,25(4):240.

    [6]陳玉,楊光忠,李援朝.雷公藤中神經(jīng)酰胺類(lèi)化合物的分離與結(jié)構(gòu)鑒定[J].華中師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2005,39(2):225-227.

    [7]蒲云峰,張偉敏,鐘耕.神經(jīng)酰胺功能和應(yīng)用[J].糧食與油脂,2005,(7):14-16.

    [8]劉仁萍,楊建奎,詹逸舒,等.魔芋中神經(jīng)酰胺類(lèi)物質(zhì)的 HPLCELSD分析及其含量測(cè)定[J].中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào),2010,26(2):189-194.

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