敏篩定量過(guò)敏原檢測(cè)系統(tǒng)和皮內(nèi)試驗(yàn)檢測(cè)過(guò)敏原的對(duì)比分析

劉春威，萬(wàn)京梅，玄春艷

（佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯154003）

過(guò)敏反應(yīng)即I型變態(tài)反應(yīng)，發(fā)生速度快，可在接觸抗原后數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)反應(yīng)，亦稱(chēng)速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。其主要特點(diǎn)：①發(fā)生快，幾秒鐘至幾十分鐘內(nèi)出現(xiàn)癥狀，消退亦快，為可逆性反應(yīng)；②由IgE抗體所介導(dǎo)；③主要表現(xiàn)為血管擴(kuò)張、通透性增加及平滑肌收縮；④有明顯個(gè)體差異和遺傳背景；⑤過(guò)敏反應(yīng)的免疫學(xué)機(jī)制復(fù)雜，涉及過(guò)敏原、IgE抗體[1]、因此明確過(guò)敏原是診斷與治療變應(yīng)性疾病的首要問(wèn)題，過(guò)敏性疾病的診斷流程是從一般檢查到過(guò)敏反應(yīng)學(xué)特殊檢查。一般檢查包括病史、體格檢查、實(shí)驗(yàn)室檢查、輔助檢查。特殊檢查包括體內(nèi)試驗(yàn)、體外試驗(yàn)。體內(nèi)試驗(yàn)包括皮膚試驗(yàn)和激發(fā)試驗(yàn)，是傳統(tǒng)的診斷方法。所謂體外特異性診斷法是指從受試者體內(nèi)采集血液或其他體液，在實(shí)驗(yàn)室里進(jìn)行實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的方法，患者只需提供檢測(cè)樣本，其他試驗(yàn)過(guò)程均在患者體外進(jìn)行。體外特異性診斷的目的是：明確患者是否是I型過(guò)敏體質(zhì)或I型變態(tài)反應(yīng)病，并找出患者的過(guò)敏原。本文主要介紹我科室新引進(jìn)德國(guó)Mediwiss公司敏篩定量過(guò)敏原檢測(cè)系統(tǒng)與傳統(tǒng)的皮試方法對(duì)常見(jiàn)過(guò)敏原作比較分析。

1 資料與方法

1.1 病例選擇

為我科2012年5～9月210例有較典型的病史及臨床表現(xiàn)的患者，（支氣管哮喘、變應(yīng)性鼻炎、蕁麻疹、濕疹、過(guò)敏性紫癜、食物過(guò)敏等）。其中男100例，女110例，年齡7～68歲。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 先進(jìn)行皮膚皮內(nèi)試驗(yàn)：消毒皮膚后，1mL注射用26或27號(hào)針頭將變應(yīng)原提取液分別注入皮內(nèi)，注入量為0.01～0.02mL或注入變應(yīng)原液使形成直徑約2～3mm的皮丘。兩種皮試間距為2.5～5cm，皮試后15～20min看結(jié)果，有無(wú)風(fēng)團(tuán)和紅暈反應(yīng)。

1.2.2 敏篩過(guò)敏原檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)：用促凝管靜脈采血2～3mL放置試管架上30min，然后上4000轉(zhuǎn)的離心機(jī)進(jìn)行離心15min。

1）試劑盒恢復(fù)到室溫（20～22℃）。2）用蒸餾水以1：25比例稀釋洗脫液。3）用清洗液濕潤(rùn)硝酸纖維素膜，在檢測(cè)板上加入200～250μL的血清標(biāo)本，在混勻器（120振／分）上室溫孵育45min。4）沖洗，手持反應(yīng)槽上下翻轉(zhuǎn)讓清洗液充分流過(guò)，輕晃增加效果。5）加入250μL抗抗體，在混勻器上室溫孵育45min。6）沖洗（同4）。7）加250μL鏈霉親和素標(biāo)記物，在混勻器上室溫孵育20min。8）沖洗（同4）。9）加入250μL底物，在混勻器上室溫孵育20min。10）流水沖洗終止底物酶反應(yīng)。11）完全干燥后，敏篩過(guò)敏原檢測(cè)儀讀數(shù)。

2 結(jié)果

皮試以其中一種過(guò)敏原風(fēng)團(tuán)直徑≥5mm，紅暈直徑≥10mm即為陽(yáng)性；敏篩法以結(jié)果≥0.35KU／L為陽(yáng)性。

在檢測(cè)的210例過(guò)敏性疾病的患者中，皮試陽(yáng)性186例，陽(yáng)性率為88.6%，與敏篩法進(jìn)行對(duì)比分析結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 敏篩定量過(guò)敏原檢測(cè)與皮膚皮內(nèi)試驗(yàn)診斷變應(yīng)性疾病患者的比較

敏篩定量過(guò)敏原檢測(cè)系統(tǒng)的各項(xiàng)診斷指標(biāo)較高，與確診標(biāo)準(zhǔn)和皮試的符合程度較好。

3 討論

在本研究中，以陽(yáng)性病史、癥狀、體征聯(lián)合皮內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果作為過(guò)敏性疾病診斷的參考標(biāo)準(zhǔn)，將敏篩試驗(yàn)與皮試進(jìn)行對(duì)比研究發(fā)現(xiàn)，兩種不同方法之間有著一定的符合性，它們之間各有優(yōu)缺點(diǎn)，皮膚試驗(yàn)是目前常見(jiàn)應(yīng)用的方法，優(yōu)點(diǎn)是易于操作，15min出結(jié)果，臨床相關(guān)性較好，而且成本較低，適合對(duì)可疑過(guò)敏原的檢測(cè)，對(duì)于藥物過(guò)敏，皮膚試驗(yàn)是首選的快速診斷方法。其缺點(diǎn)是每種過(guò)敏原都須做一個(gè)點(diǎn)刺，有疼痛感，有些患者尤其是兒童不愿接受。應(yīng)用組胺受體拮抗藥等藥物后可能掩蓋陽(yáng)性結(jié)果，因此試驗(yàn)前1周應(yīng)停用可能抑制皮膚試驗(yàn)反應(yīng)的藥物，如腎上腺糖皮質(zhì)激素和抗組胺藥物。

敏篩系統(tǒng)是指采集患者血液進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，主要是檢測(cè)血清中的特異性IgE（sIgE），特異性IgE是機(jī)體專(zhuān)一對(duì)某一種特定的變應(yīng)原發(fā)生反應(yīng)的抗體，是檢查變態(tài)反應(yīng)疾病體外試驗(yàn)最重要的方法。環(huán)境中能引起I型變態(tài)反應(yīng)的物質(zhì)即過(guò)敏原有很多種，每種過(guò)敏原都能使對(duì)其過(guò)敏者體內(nèi)產(chǎn)生過(guò)敏原特異性IgE。血清中特異性IgE的水平可反映個(gè)體對(duì)何種過(guò)敏原過(guò)敏及過(guò)敏的嚴(yán)重程度。由于血清特異性IgE水平比血清總IgE水平更低，需要應(yīng)用敏感性更高的專(zhuān)門(mén)儀器設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)，而我科室引進(jìn)的敏篩定量過(guò)敏原檢測(cè)系統(tǒng)可以進(jìn)行極微量的抗原檢測(cè)，靈敏快速，各項(xiàng)診斷指標(biāo)較高，與確診標(biāo)準(zhǔn)和皮試的符合程度較好。針對(duì)患者安全，特異性好，即來(lái)即查，無(wú)需停藥，且無(wú)任何危險(xiǎn)性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明敏篩系統(tǒng)與皮膚皮內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比較，性能良好，具有很好的應(yīng)用前景，由于所需標(biāo)本量少，在低IgE水平范圍時(shí)檢測(cè)性能好，對(duì)兒童尤為適用。皮膚試驗(yàn)是體內(nèi)試驗(yàn)，屬于生物測(cè)定的范疇，若體內(nèi)有致敏的肥大細(xì)胞，變應(yīng)原與細(xì)胞膜上的免疫球蛋白IgE結(jié)合后，激活肥大細(xì)胞釋放血管活性物質(zhì)，使皮膚出現(xiàn)風(fēng)團(tuán)和紅斑[2]皮膚試驗(yàn)的結(jié)果判定具有一定的主觀性，與施行者的經(jīng)驗(yàn)有關(guān)，介于陽(yáng)性和陰性之間的皮膚反應(yīng)難以判斷為弱陽(yáng)性還是陰性，某些嚴(yán)重過(guò)敏者還可能出現(xiàn)強(qiáng)烈過(guò)敏反應(yīng)甚至過(guò)敏性休克，具有一定風(fēng)險(xiǎn)，故皮膚試驗(yàn)應(yīng)在具備急救復(fù)蘇條件的醫(yī)療單位進(jìn)行。體外試驗(yàn)屬于免疫化學(xué)測(cè)定，是對(duì)SigE的直接測(cè)定。檢測(cè)過(guò)敏原特異性IgE只需要少量血清即可進(jìn)行多種過(guò)敏原檢查，結(jié)果準(zhǔn)確，不受患者服用藥物的影響，對(duì)患者幾乎沒(méi)有皮肉痛苦，患者樂(lè)于接受，尤其適合于兒童、有彌漫性皮疹和嚴(yán)重過(guò)敏反應(yīng)而藥物治療不能中斷者。因此敏篩系統(tǒng)不受藥物的影響，患者可在進(jìn)行正常治療的同時(shí)接受檢查，敏篩系統(tǒng)作為一種操作簡(jiǎn)單的方法，可對(duì)眾多變應(yīng)原進(jìn)行篩查檢測(cè)，消耗成本低，與皮內(nèi)試驗(yàn)有較好的一致性，特異度高，在過(guò)敏性疾病的診斷中，其作為一種較好的臨床血清學(xué)特異性IgE半定量篩查試驗(yàn)，能夠與皮膚皮內(nèi)試驗(yàn)互為補(bǔ)充，應(yīng)用于變應(yīng)原特異性IgE的血清學(xué)檢查中。針對(duì)脫敏患者，要結(jié)合體內(nèi)、體外試驗(yàn)共同評(píng)價(jià)、判定。

[1]魏慶宇，黃建林.過(guò)敏反應(yīng)門(mén)診手冊(cè)[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2009

[2]葉世泰.變態(tài)反應(yīng)學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，1998