毛節(jié)纈草揮發(fā)油成分分析及鎮(zhèn)靜作用實(shí)驗(yàn)研究

杜 娟，劉 娟，王麗紅，楊春榮，胡艷秋，王偉娥，彭惜媛，吳 嵐

（佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 佳木斯154007）

毛節(jié)纈草Valeriana alternifolia Bunge var.stoloniferaBar.et Skv.為敗醬科（Valerianaceae）纈草屬（Valeriana）多年生草本植物[1]，其根及根莖入藥。由于該屬植物的藥用價(jià)值具有鎮(zhèn)靜安神、解痙止痛的功效，已得到高度重視和廣泛的研究[2]，毛節(jié)纈草在東北地區(qū)分布較多，目前，對(duì)于毛節(jié)纈草的顯微鑒別研究已經(jīng)有報(bào)道[3]，本實(shí)驗(yàn)對(duì)黑龍江省分布小興安嶺的毛節(jié)纈草中揮發(fā)成分及其鎮(zhèn)靜作用進(jìn)行了分析研究，旨在為其開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 材料與試劑

毛節(jié)纈草采自黑龍江省伊春地區(qū)，經(jīng)本校生藥學(xué)教研室劉娟教授鑒定為敗醬科植物毛節(jié)纈草Valeriana alternifolia Bunge var.stolonifera Bar.et Skv.的根莖；乙醚（分析純）上海哈勃技術(shù)公司；無水碳酸鈉（分析純）：天津科茂化學(xué)試劑有限公司。昆明健康小鼠，清潔級(jí)，體重18～25g，由佳木斯大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 儀器

GC－17A型氣相色譜儀，日本島津公司；MSQP5050A質(zhì)譜儀，日本島津公司，電子恒溫電熱套，天津市泰斯特儀器有限公司；揮發(fā)油提取器，上海玻璃儀器廠（密度小于1）。ZZ－6小鼠自主活動(dòng)測(cè)試儀，成都泰盟科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 提取方法

毛節(jié)纈草揮發(fā)油提取采用水蒸氣蒸餾法：取粉碎后的藥材過篩，采用水蒸氣蒸餾裝置提取揮發(fā)油。

1.3.2 色譜條件

氣相色譜條件：檢測(cè)器FID；彈性石英毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）；進(jìn)樣口溫度280℃ ；流 速41.8 mL／min；爐初始溫度230℃；柱前壓40.00kPa；分流比50：1；進(jìn)樣量2μL；程序升溫：60℃（保持3 min）4℃／min80℃（保持2 min）4℃／min225℃（保持10 min）。

質(zhì)譜條件：EI離子源；電子能量70ev；掃描范圍40～500AMV；掃描速率1000amu／s；離子源溫度230℃；接口溫度280℃；倍增電壓1.30 KV；檢索譜庫 DATABASE／NIST98L[4]。

1.3.3 鎮(zhèn)靜作用實(shí)驗(yàn)

取小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組：生理鹽水對(duì)照組，揮發(fā)油低劑量組（0.03g／kg）、揮 發(fā) 油 中劑量組（0.06g／kg）、揮發(fā)油高劑量組（0.12g／kg），地西泮組（1 mg／kg），每組12只。對(duì)正常小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響，于末次給藥30 min后，置于自發(fā)活動(dòng)儀內(nèi)，先適應(yīng)環(huán)境5 min，再記錄10 min內(nèi)小鼠的自發(fā)活動(dòng)次數(shù)。試驗(yàn)要求在安靜、光線較暗的環(huán)境下進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間結(jié)果作t檢驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 揮發(fā)油含量測(cè)定

采用毛節(jié)纈草揮發(fā)油所含成分的含量為峰面積，利用歸一化的面積百分比計(jì)算總含量。從分離的額67個(gè)峰中，用質(zhì)譜鑒定出34個(gè)化合物，占總含量的91.12%。

2.2 揮發(fā)油成分測(cè)定

通過圖譜檢索鑒定化合物，毛節(jié)纈草揮發(fā)油成分中主要以烯、酯、醇 為主，其 中 乙 酸 龍腦 酯 （30.57%）、龍 腦（7.41% ）、石竹烯（3.98% ）、蒎 烯（3.12% ）、莰烯（2.23% ）、石竹烯（3.98%）、纈草酮（1.22%）等，另外還含有芳樟醇（0.26% ）、百里香甲醚（0.11% ）、α－松油醇（0.72% ）、α－古蕓烯（1.03%）、α－欖香烯（2.68%）、3－乙烯基甲醇（0.23% ）、大根香葉烯D（0.91% ）、鄰苯二酚（0.96% ）、紫羅蘭酮（0.95% ）、佛手柑油烯（1.86% ）、烯戊酸（1.06% ）、匙葉桉油烯醇（0.16%）、紫丁香酚（0.83%）、紅沒藥醇（0.08%）、α－杜松醇（0.34%）、十八烯酸（0.13%）、十八酸二烯酸甲酯（0.45% ）等。

2.3 鎮(zhèn)靜作用結(jié)果

與生理鹽水組比較，毛節(jié)纈草揮發(fā)油提取物的高、中、低劑量組能顯著抑制小鼠自主活動(dòng)次數(shù)，差異具有顯著性（P＜0.05）。提示毛節(jié)纈草揮發(fā)油成分具有鎮(zhèn)靜的藥理作用，結(jié)果見表1。

表1 毛節(jié)纈草揮發(fā)油成分對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)的影響（n＝12，次，±s）

表1 毛節(jié)纈草揮發(fā)油成分對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)的影響（n＝12，次，±s）

注：與生理鹽水對(duì)照組比較，＊P＜0.05，＊＊ P＜0.01。

組給藥前活動(dòng)次數(shù) 給藥后活動(dòng)次數(shù)生理鹽水對(duì)照組 142.3±26.0 17.6±26.別2揮發(fā)油低劑量組 140.1±34.2 164.6±29.5＊揮發(fā)油中劑量組 142.2±26.7 161.9±23.2＊＊揮發(fā)油高劑量組 141.8±34.2 157.6±32.2＊＊地西泮組 142.5±29.7 61.3±13.8＊＊

3 討論

本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)毛節(jié)纈草提取的揮發(fā)油進(jìn)行成分的分析，確立毛節(jié)纈草的GC－MS分析色譜條件，共鑒定出34種成分，以莰烯、蒎烯、檸檬烯、龍腦、乙酸龍腦酯等含量多占比例較多，鑒定的成分占揮發(fā)油總量的91.12%。在毛節(jié)纈草中發(fā)現(xiàn)纈草酮成分（1.22%），在陳虎彪報(bào)道的毛節(jié)纈草揮發(fā)油成分中未見有[5]。通過小鼠行為學(xué)觀察毛節(jié)纈草揮發(fā)油提取物的高、中、低劑量組均能顯著抑制小鼠活動(dòng)，說明提取物具有顯著的鎮(zhèn)靜活性，目前有關(guān)纈草屬的藥理研究中，均認(rèn)為是揮發(fā)油和纈草素共同發(fā)揮鎮(zhèn)靜安神作用作用，后續(xù)實(shí)驗(yàn)將從鎮(zhèn)靜安神機(jī)制進(jìn)行研究，這也為毛節(jié)纈草的開發(fā)利用提供了科學(xué)數(shù)據(jù)。

[1]傅沛云主編.東北植物檢索表[M].第2版，北京：科學(xué)出版社，1995，627－629

[2]朱有昌主編.東北藥用植物[M].哈爾濱：黑龍江科學(xué)出版社，1989，1073－1076

[3]楊春榮，單靜穎，劉莉，等.毛節(jié)纈草的解剖構(gòu)造觀察[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2003，26（6）：25－26

[4]杜娟，黃英，劉娟，等.栽培黑水纈草中揮發(fā)油成分分析[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2010，33（6）：32－33

[5]陳虎彪，徐學(xué)明，趙玉英.毛節(jié)纈草揮發(fā)油化學(xué)成分的研究[J].中國中藥雜志，1998，23（7）：418－419