HPLC法測定生姜配方顆粒中6-姜辣素的含量

周記磊, 韋紅言, 梁冰麗, 陸東, 鄭宇, 黃萍萍, 吳家彬, 溫慶偉

生姜來源于姜科植物姜Zingiberofficinale Rosc.的根莖[1]，系姜的新鮮根莖。味辛、性微溫，歸肺、脾、胃經(jīng)，具有解表散寒、溫中止嘔、化痰止咳的功 效[2]。主要用于治療風寒感冒、胃寒嘔吐、寒痰咳 嗽[3]。但因新鮮生姜儲存較困難，故很多藥房均無法向患者提供藥用生姜。中藥配方顆粒是指在中醫(yī)藥理論指導下，采用現(xiàn)代生產(chǎn)工藝，以水作為提取溶媒，對藥材飲片進行煎煮，過濾，濃縮，干燥，制粒等工序制備得到的提取物制劑[4]。生姜配方顆粒具有儲存方便，調(diào)劑精確，口感較好的特點，解決了醫(yī)院藥房無法長期儲備生姜的問題。生姜配方顆粒目前尚無其含量測定方法。為了控制藥品質(zhì)量，本文建立了生姜配方顆粒中6-姜辣素的高效液相色譜測定方法，該方法操作簡便，可用于生姜配方顆粒的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1260高效液相色譜儀（美國）：G1311C四元泵（內(nèi)置真空脫氣機）、G1315D DAD檢測器、G1329B自動進樣器、G1316A柱溫箱；OpenLAB CDS ChemStation數(shù)據(jù)處理工作站；Sartorius BP210S電子分析天平（德國）、GR-202電子分析天平；KQ-500DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

6-姜辣素對照品（批號：MUST-11030401，成都曼斯特生物科技有限公司提供）；生姜配方顆粒（批號：A101210、A100566、A110458、A100105），由培力（南寧）藥業(yè)有限公司提供。

甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其余均為分析純。

2 方法與結果

2 .1 色譜條件

色譜柱：Merck Lichrospher RP-18e（4.6×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈-甲醇-水（40:5:55）；檢測波長：280 nm；柱溫：25 ℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取6-姜辣素對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL含6-姜辣素0.1 mg的溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取生姜配方顆粒適量，研細，取約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇35 mL，稱定重量，超聲處理30 min，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 取生姜配方顆粒中所用輔料即藥用糊精適量，按“2.2.2”項下的供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。

圖1 生姜配方顆粒高效液相色譜圖

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性試驗 分別精密吸取上述6-姜辣素對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各20 μL，進樣分析。結果見圖1。

2.3.2 線性關系的考察 分別精密吸取“2.2.1”項下6-姜辣素對照品儲備液各2 μL，4 μL，6 μL，8 μL，10μL，12 μL，14 μL，16 μL按上述色譜條件注入液相色譜儀，以進樣量（μg）為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，得6-姜辣素回歸方程：Y=525.50X-1.51（r=1.0000，n=8）。結果表明：6-姜辣素進樣量在0.24 μg～1.90 μg范圍內(nèi)時，峰面積與進樣量呈良好的線性關系。

2.3.3 精密度試驗 精密吸取6-姜辣素對照品溶液8μL，重復進樣6次，測定峰面積，其RSD（%）為0.41%。結果表明，儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 取同一批供試品溶液，分別于0 h，2 h，4 h，8 h，12 h，24 h進樣20 μL，測定峰面積，其RSD（%）為1.71%，結果表明供試品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 重復性試驗 取同一批樣品，研細，取6份，每份約2 g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，精密吸取供試品溶液各20 μL進樣，測定峰面積，結果6-姜辣素含量的RSD（%）為1.6%，小于2.0%，說明本方法重復性較好。

2.3.6 加樣回收率試驗 取已知含量（0.916 mg﹒g-1）的本品5份，每份約1 g，精密稱定，分別精密加入適量的對照品，照“2.2.2”項下方法，制得供試品溶液，精密吸取供試品溶液20 μL進樣，采用上述色譜條件進行測定。結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

6-姜辣素平均回收率為96.03%，RSD（%）小于2.0%，說明本方法準確度較好，適用于定量分析。

2.3.7 樣品含量測定 取四批生姜配方顆粒（批號：A101210，A100566，A110458，A100105）各約2 g，精密稱定，照“2.2.2” 制得供試品溶液，按以上色譜條件，進樣測定。結果見表2。

表2 4批樣品含量測定結果

3 討論

3.1 提取方式及提取溶劑的選擇

6-姜辣素分子結構中含有10個碳的烷基側鏈，脂溶性較大，甲醇對其具有較好的溶解性能。樣品的制備方法考察時以甲醇、80%甲醇、乙醇、80%乙醇作為提取溶劑進行考察，結果也表明甲醇作為提取溶劑測得樣品的含量較高。另外，采用甲醇超聲方式，可避免高溫對6-姜辣素的影響。

3.2 檢測波長的選擇

6-姜辣素在230 nm和280 nm波長處有最大紫外吸收，盡管230 nm處的紫外吸收較大，但其處于吸收曲線的肩峰位置，容易受到溶劑峰的干擾，且儀器的細微偏差對測定結果的影響較大。所以，選擇280 nm為檢測波長可以滿足測定的需要，保證結果的準確性。

3.3 流動相的選擇

通過對流動相：乙腈-甲醇-水（40:5:55）[1]和乙腈-水（40:60）[5]進行實驗比較，結果乙腈-甲醇-水（40:5:55）溶劑系統(tǒng)分離效果好，故選擇本系統(tǒng)為流動相。

3.4 含量限度

以上四批生姜配方顆粒中6-姜辣素的含量為0.35~1.58mg﹒g-1，平均為0.995mg﹒g-1；不同批次之間的含量差異較大，主要是因為不同批次的生姜原藥材中6-姜辣素含量不穩(wěn)定的緣故。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010年版一部）[S]. 北京: 中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

[2] 王建,張冰.臨床中藥學[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2012.

[3] 高學敏.中藥學[M]. 北京: 中國中醫(yī)藥出版社,2012.

[4] 郭玫,余曉輝,邵晶.中藥配方顆粒研究概況[J].河南中醫(yī)學院學報, 2003, 18(107): 86.

[5] 閻東海. HPLC測定生姜精油中6-姜酚含量[J]. 藥物分析雜志, 2007, 27(5): 733.