連翹不同部位中連翹苷和連翹酯苷A的含量分析及其入藥探討△

王進(jìn)明，范圣此，李安平，陳婷婷，孫斌，楊霞

(山西振東道地藥材開(kāi)發(fā)有限公司，山西 長(zhǎng)治 047100)

連翹不同部位中連翹苷和連翹酯苷A的含量分析及其入藥探討△

王進(jìn)明，范圣此*，李安平，陳婷婷，孫斌，楊霞

(山西振東道地藥材開(kāi)發(fā)有限公司，山西 長(zhǎng)治 047100)

目的：通過(guò)連翹不同部位的連翹苷和連翹酯苷A的含量比較，為連翹資源的綜合開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。方法：采用HPLC測(cè)定連翹果實(shí)、葉、果梗、枝梗中連翹苷和連翹酯苷A的含量，以Luna5uC18(2)100A(250 mm×4.6 mm，5 μm)為色譜柱，連翹苷測(cè)定流動(dòng)相為乙腈-水(25∶75)，檢測(cè)波長(zhǎng)為277 nm，柱溫為室溫，流速為1.0 mL·min-1；連翹酯苷A測(cè)定流動(dòng)相為乙腈-0.4%冰醋酸溶液(15∶85)，檢測(cè)波長(zhǎng)為330 nm，柱溫為室溫，流速為1.0 mL·min-1。結(jié)果：連翹苷在3.33～13.32 μg線性關(guān)系良好(r=0.999 7)，平均回收率為99.30%，RSD=1.4%；連翹酯苷A在4.17～6.69 μg具有良好的線性關(guān)系(r=0.999 7)，平均回收率為98.26%，RSD=1.8%。結(jié)論：連翹苷含量在不同部位中葉子最高，其次為果實(shí)、枝梗、果梗；連翹酯苷A含量在不同部位中同樣葉子最高，其次為果實(shí)、果梗、枝梗。

連翹；連翹苷；連翹酯苷A；HPLC

連翹為木犀科植物連翹Forsythiasuspensa(Thunb.) Vahl的干燥果實(shí)。秋季果實(shí)初熟尚帶綠色時(shí)采收，除去雜質(zhì)，蒸熟，曬干，習(xí)稱“青翹”；果實(shí)熟透時(shí)采收，曬干，除去雜質(zhì)，習(xí)稱“老翹”[1]。在市場(chǎng)銷售的青翹中有水煮貨和生曬貨兩種，水煮即青翹經(jīng)水煮后曬干或烘干，生曬為直接將采收的青翹曬干或陰干。連翹具有消腫散結(jié)，清熱解毒，疏散風(fēng)熱之功效，還是預(yù)防和治療禽流感、SARS、甲型H1N1流感等流行性疾病的主要成分[1-4]。連翹除其果實(shí)有藥用價(jià)值以外，近些年也有研究報(bào)道連翹葉提取物有抑菌等藥理作用，同時(shí)連翹葉、花可作茶飲，在我國(guó)河北、河南、陜西、山西等地，均有將連翹葉作為茶飲用的習(xí)慣[5]。

由于近年來(lái)連翹價(jià)格的迅速上漲，使得產(chǎn)地百姓和商販在經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)動(dòng)下，造成青翹的“搶青”、摻入連翹葉、摻雜丁香果實(shí)等偽品、枝梗、沙土現(xiàn)象屢有發(fā)生；同時(shí)一些不法廠家以價(jià)格低廉的連翹葉提取物代替青翹果實(shí)提取物入藥，造成了較大的混亂；《中國(guó)藥典》2010版規(guī)定，青翹入藥部位是果實(shí)，但是在青翹炮制加工和提取過(guò)程中，由于青翹果梗、枝梗的比重和果實(shí)的比重非常接近，導(dǎo)致了連翹不同部位不能有效地分離，這些現(xiàn)象一方面造成青翹市場(chǎng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的層次不齊，市場(chǎng)混亂；其次以青翹為原料的中成藥質(zhì)量不穩(wěn)定，以致于影響其臨床療效，最終對(duì)連翹的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展造成一定程度的影響。

近年來(lái)國(guó)內(nèi)外的許多學(xué)者都集中于連翹果實(shí)、葉子、種子及花等不同部位的化學(xué)成分含量研究[6-9]，但是對(duì)于連翹的枝梗、果梗的藥用成分含量研究卻鮮有報(bào)道。作者通過(guò)測(cè)定適宜采收期內(nèi)連翹的果梗、枝梗、葉子、果實(shí)等不同部位藥用成分含量并對(duì)其綜合分析，來(lái)探討在連翹產(chǎn)業(yè)過(guò)程中連翹不同部位的入藥問(wèn)題，旨在為以后連翹資源的合理開(kāi)發(fā)利用提供一定的理論參考。

1 材料、儀器及試劑

1.1 材料

連翹于2012年8月30日采集自山西振東集團(tuán)園林綠化地的3株植株，經(jīng)山西大學(xué)張立偉教授鑒定為木犀科植物連翹Forsythiasuspensa(Thunb.) Vahl不同部位的樣品，然后將不同部位(連翹枝梗、連翹果實(shí)、連翹果梗、連翹葉)進(jìn)行陰干獲得。

1.2 儀器與試劑

Aglient1260高效液相色譜儀(四元泵，紫外檢測(cè)器，在線脫氣機(jī)，柱溫箱)；BSA124S電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器)；KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)。

試驗(yàn)用水為雙蒸水，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純；連翹苷對(duì)照品(批號(hào)：110821-201112，含量為96.8%)、連翹酯苷A對(duì)照品(批號(hào)：111810-201103，含量為92.9%)，供含量測(cè)定用，均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為L(zhǎng)una5uC18(2)100A(250 mm×4.6 mm，5 μm)，連翹苷測(cè)定流動(dòng)相為乙腈-水(25∶75)，檢測(cè)波長(zhǎng)為277 nm，柱溫為室溫，流速為1.0 mL·min-1；連翹酯苷A測(cè)定流動(dòng)相為乙腈-0.4%冰醋酸溶液(15∶85)，檢測(cè)波長(zhǎng)為330 nm，柱溫為室溫，流速為1.0 mL·min-1。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取連翹苷對(duì)照品11.47 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；精密稱取連翹酯苷A對(duì)照品14.97 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(臨用配制)。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 測(cè)定連翹苷的供試品溶液制備 取不同部位粉末(過(guò)三號(hào)篩)約1 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇15 mL，稱定重量,浸漬過(guò)夜,超聲處理(功率250 W,頻率40 kHz)25 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),精密量取續(xù)濾液5 mL，蒸至近干，加中性氧化鋁0.5 g拌勻，轉(zhuǎn)移至中性氧化鋁柱(100～120目，1 g，內(nèi)徑為1～1.5 cm)上，用70%乙醇80 mL洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)?0%甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.2 測(cè)定連翹酯苷A的供試品溶液制備 取不同部位粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇15 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取濃度為1.110 30 mg·mL-1的連翹苷、1.390 71 mg·mL-1連翹酯苷A對(duì)照品溶液3，5，8，10，12，15 μL進(jìn)樣分析，測(cè)定峰面積。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得連翹苷回歸方程為Y=2 219.4X+591.86，r=0.999 7，表明連翹苷進(jìn)樣量在3.33～13.32 μg具有良好的線性關(guān)系；連翹酯苷A回歸方程為Y=1 771X+599.59，r=0.999 7，表明連翹酯苷A在4.17～6.69 μg具有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，連翹苷峰面積的RSD=0.8%，連翹酯苷A峰面積的RSD=0.1%，表明該方法的精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取供試品(果實(shí))，按供試品溶液的制備方法制備6份供試液，分別進(jìn)樣10 μL，連翹苷的RSD=1.6%，連翹酯苷A的RSD=0.3%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取果實(shí)供試品溶液，在0，4，6，8，10，12 h內(nèi)重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，計(jì)算連翹苷峰面積的RSD=1.5%，連翹酯苷A峰面積的RSD=0.2%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已測(cè)含量的果實(shí)供試品溶液5份，分別精密加入定量的連翹苷、連翹酯苷A對(duì)照品，依法測(cè)定，結(jié)果測(cè)定見(jiàn)表1、表2。

2.9 樣品測(cè)定

取連翹枝梗、果實(shí)、葉子、果梗，照2.3方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算連翹苷、連翹酯苷A含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表1 連翹苷加樣回收率試驗(yàn)

表2 連翹酯苷A加樣回收率試驗(yàn)

表3 連翹不同部位中連翹酯苷和連翹酯苷A含量測(cè)定 /%

通過(guò)表3比較分析可知，連翹不同部位中連翹苷、連翹酯苷A的含量均超過(guò)了《中國(guó)藥典》2010版標(biāo)準(zhǔn)，其中葉子中連翹苷含量最高為1.517%，它是果實(shí)中連翹苷含量的4.7倍，枝梗的5.6倍，果梗的6倍，結(jié)果與李衛(wèi)建等[6]中連翹果實(shí)干物質(zhì)與有效成分積累規(guī)律研究中結(jié)果基本一致，即葉子>果實(shí)>果梗>枝梗；不同部位中連翹酯苷A含量最高的同樣為葉子，含量為4.537%，是果實(shí)中連翹酯苷A含量的1.1倍，枝梗的10.6倍、果梗中的2.4倍，不同部位中連翹酯苷A含量高低為葉子>果實(shí)>果梗>枝梗，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與靖會(huì)等[10]測(cè)定的不同部位中連翹酯苷A含量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，即連翹葉中連翹酯苷A含量最高，但與李衛(wèi)建等[6]研究的連翹果實(shí)干物質(zhì)與有效成分積累規(guī)律中連翹酯苷A在整個(gè)生長(zhǎng)期內(nèi)果實(shí)中高于葉子中含量結(jié)果不同。實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不同可能是由于他們的實(shí)驗(yàn)中將果殼和種子分開(kāi)的原因，具體原因有待于進(jìn)一步的研究證明。但就綜合連翹苷、連翹酯苷A的含量結(jié)果分析，連翹葉子在藥用新資源開(kāi)發(fā)方面具有重要的研究?jī)r(jià)值和意義。

3 討論

從入藥部位來(lái)看，最早使用的是金絲桃科湖南連翹的地上部分及根，至唐代，多用地上部分，也有只用果實(shí)的。至宋代開(kāi)始到明清以后則以木犀科的連翹果實(shí)為正品，且《中藥志》、《中國(guó)藥典》皆以木犀科連翹的果實(shí)為連翹正品的唯一來(lái)源[11]。單從連翹苷和連翹酯苷A這兩類藥用成分含量來(lái)看，這4種不同部位，都具有一定的藥用價(jià)值，因此在對(duì)不同入藥部位和藥用價(jià)值的研究中要加大力度進(jìn)行研究、開(kāi)發(fā)利用，才能保證連翹入藥的安全、穩(wěn)定、有效、可控。

連翹葉在中藥典籍中記載的藥物功效與連翹果實(shí)極為相似，化學(xué)組成上也有相似性[12]。相關(guān)研究表明，單純就抗菌效果而言，青翹優(yōu)于老翹，連翹葉優(yōu)于連翹果實(shí)[8，13]。按照中醫(yī)藥理論，不同的部位入藥的效果應(yīng)該是截然不同的，所以必須加強(qiáng)中藥的基礎(chǔ)研究；連翹葉茶在我國(guó)的部分地區(qū)雖有飲用的習(xí)慣，但依據(jù)2007年12月1日起施行的《新資源食品管理辦法》中的相關(guān)規(guī)定，它并不屬于新資源食品，而只能作為一種農(nóng)產(chǎn)品在旅游景點(diǎn)和連翹主產(chǎn)區(qū)的部分市場(chǎng)上進(jìn)行銷售。因此對(duì)連翹葉能否開(kāi)發(fā)為保健茶和能否入藥有待于更深入的研究。在連翹為原料的中成藥的生產(chǎn)中，往往是將連翹果梗、枝梗和果實(shí)一起提取，這就導(dǎo)致中成藥質(zhì)量不穩(wěn)定。如果解決連翹產(chǎn)業(yè)中的這些問(wèn)題，需要國(guó)家相關(guān)部門批準(zhǔn)連翹為新資源和藥食兩用品種，連翹資源的綜合開(kāi)發(fā)力度才會(huì)有更大的提高。

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AnalysisoftheContentsofForsythinandForsythiasideAinDifferentPartsofForsythiasuspensaandItsMedicinalUseDiscussion

WANG Jin-ming,FAN Sheng-ci*,LI An-ping,CHEN Ting-ting,SUN Bin,YANG Xia

(ShanxiZhendongGeoherbsDevelopmentCo,Ltd.,ChangzhiShanxi047100,China)

Objective： To provide theoretical basis for comprehensive development and utilization ofForsythiasuspensaresources by evaluating the contents of forsythin and forsythiaside A in different parts ofForsythiasuspense.Methods： HPLC method was used for analyzing the contents of forsythin and forsythiaside A for 4 samples of different parts ofForsythiasuspense. Luna5uC18(2) 100A (250 mm×4.6 mm,5 μm) Column was carried out,the mobile phrase of forsythin determination was acetonitrile-water(25∶75),the detection wavelength was 277 nm. The mobile phase of forsythiaside A determination was acetonitrile-0.4% acetic acid (15∶85) and the detection wavelength was 330 nm. The column temperature was room temperature. And the flow rate was 1.0 mL·min-1.Results： There was a good linear relationship(r=0.999 7) for forsythin at 3.33～13.32 μg,the average recovery rate was 99.30%,and RSD was 1.4%. The good linear relationship (r=0.999 7) for forsythiaside A was at 4.17～6.69 μg,the average recovery rate was 98.26%,and RSD was 1.8%.Conclusion： The highest content of forsythin was in leaves,followed by fruit and branches,the highest content of forsythiaside A was in leaves,and followed by fruits,stems and branches.

Forsythiasuspensa； Forsythin； Forsythoside A； HPLC

2013-01-21)

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國(guó)家“十二五”科技支撐項(xiàng)目(2011BA107B01)；山西省科技攻關(guān)項(xiàng)目(20120313015-9)；長(zhǎng)治市科技計(jì)劃項(xiàng)目(20118033-1)

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范圣此，E-mail：fanshengci2008@sina.com