滇重樓藥材及腐爛根莖中氨基酸和元素的測定△

蘇豹，楊志雷，楊永紅*，張銘，楊婉梅，韋建榮，尹品耀

(1.云南白藥集團文山七花有限責(zé)任公司，云南 文山 663000；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué) 植物保護學(xué)院，云南 昆明 650201)

滇重樓藥材及腐爛根莖中氨基酸和元素的測定△

蘇豹1，楊志雷2，楊永紅2*，張銘2，楊婉梅2，韋建榮1，尹品耀1

(1.云南白藥集團文山七花有限責(zé)任公司，云南 文山 663000；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué) 植物保護學(xué)院，云南 昆明 650201)

目的：測定比較稀缺名貴中藥材滇重樓ParispolyphyllaSmith var.yunnansensis(Franch.) Hand.-Mazz.藥材、健康根莖及腐爛根莖中氨基酸、元素和脂肪酸含量。方法：用氨基酸自動分析儀、等離子體發(fā)射光譜儀(ICP法)等測定滇重樓藥材、健康根莖及腐爛根莖中氨基酸、礦質(zhì)元素等成分。結(jié)果：滇重樓藥材、健康根莖及腐爛根莖中氨基酸和元素含量有明顯差異。結(jié)論：腐爛根莖與藥材和健康根莖相比，氨基酸含量都呈下降趨勢，脂肪酸含量介于兩者之間；腐爛根莖元素含量與藥材和健康根莖相比硫、鉀和粗纖維含量都有不同程度的下降；腐爛根莖與健康根莖磷含量相同，都為0.11%；鈣、銅、錳、灰粉和粗脂肪含量都呈增長趨勢；鎂、鋅、蛋白質(zhì)和粗纖維與藥材相比含量有所增加，與健康根莖相比含量有所下降。

滇重樓；藥材；健康根莖；腐爛根莖；氨基酸；元素；脂肪酸

滇重樓ParispolyphyllaSmith var.yunnansensis(Franch.)Hand.-Mazz.是延齡草科(Trilliaceae)重樓屬(ParisL.)植物，分布于云南、貴州和四川，生長在海拔1 400～3 100 m的常綠闊葉林、云南松林、竹林、灌叢或草坡中，根莖入藥，有清熱解毒，消腫止痛，涼肝定驚之功效，用于疔腫癰腫，咽喉腫痛，毒蛇咬傷，跌撲傷痛，驚風(fēng)抽搐等癥[1]。滇重樓作為中藥材，其藥用在我國有著悠久的歷史，自古以來就有許多關(guān)于它的記載，是云南白藥、宮血寧、奪命丹等一些重要中成藥和新藥的主要原料之一[2]。

滇重樓是云南省地道稀缺貴重藥材，隨著中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，以滇重樓為原料的生產(chǎn)企業(yè)用量大幅度增加，種植力度也在加大，據(jù)不完全統(tǒng)計，近10年來云南省重樓的馴化栽培面積累計達40～66.67 hm2。其中，云南白藥集團中藥材優(yōu)質(zhì)種源繁育有限責(zé)任公司種植面積占50%以上。人們對滇重樓栽培進行許多研究，主要集中在種子繁殖、組織培養(yǎng)、切塊繁殖等方面。由于滇重樓繁殖率低，其傳統(tǒng)藥用部位根莖的自然生長速度十分緩慢，從種子生長為藥用商品，一般需10～15年。近年來，由于對野生資源的過度采挖，滇重樓野生資源已漸趨瀕危，人工種植已成為解決市場需求，實現(xiàn)野生資源可持續(xù)利用的唯一途徑，但根腐病非常嚴重，從田間調(diào)查發(fā)現(xiàn)，滇重樓的根腐病發(fā)病率一般為50%，嚴重的可達到87.7%，也影響原料的質(zhì)量。重樓的主要活性成分是皂甙類，有關(guān)化學(xué)成分研究報道較多，本文涉及內(nèi)容鮮有[3-6]。本研究企望探明滇重樓藥材、健康根莖及腐爛根莖中氨基酸、礦質(zhì)元素等成分，為在人工繁殖過程中藥材的內(nèi)在質(zhì)量保證、外觀性狀、出現(xiàn)的根莖腐爛問題和病蟲害的防治提供一定的依據(jù)和措施。

1 材料與方法

1.1 樣品

滇重樓健康根莖、腐爛根莖及藥材：2009年10月分別采自云南白藥集團優(yōu)質(zhì)種源種植基地。

1.2 方法

1.2.1 氨基酸分析 儀器：HITACH830-50型氨基酸自動分析儀。分析方法：GB/T 5009.124-2003。樣品處理方法：精確稱取樣品30 mg，置于安瓿中，加6NHCl溶液10 mL，封口，于105 ℃水解23 h，用堿中和，并用緩沖液調(diào)節(jié)pH值為2.2。移入50 ml容量瓶中，用水定容至50 mL。過濾，初濾液。精密量取濾液0.1 mL，加入0.9 mL茚三酮溶液(20 g·L-1，pH5.2-5.5)，煮沸5～10 min，比色，調(diào)整到儀器所需濃度，上機測定。

1.2.2 元素分析 儀器：ICP-AES儀。分析方法：ICP(電感偶合等離子體發(fā)射光譜儀)直接測定法。樣品處理方法：取樣品粉末約1 g，精密稱量，置三角瓶中，加入10 mL HNO3和HCLO4混合酸，于電熱板上消化至干，加入6NHCl 5 mL，微熱定容至50 ml，用ICP法直接測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 氨基酸的含量

氨基酸含量測定結(jié)果見表1。藥材、健康根莖及腐爛根莖中都未檢測到胱氨酸；腐爛根莖中各種氨基酸含量較藥材和健康根莖都有不同程度下降，總氨基酸分別下降1.68%和2.24%；除藥材與健康根莖中天門冬氨酸、絲氨酸和丙氨酸含量相同；甘氨酸和纈氨酸分別高0.04%和0.02%，其余氨基酸都有不同程度的下降，下降最多的是賴氨酸0.22%，下降最少的是蘇氨酸和精氨酸，都是0.01%。

表1 滇重樓藥材、健康根莖及腐爛根莖中氨基酸含量的測定

注：“↑”表示含量升高；“↓”表示含量降低。

2.2 元素及蛋白質(zhì)等組分的含量

元素及蛋白質(zhì)等組分的含量測定結(jié)果見表2。腐爛根莖與藥材和健康根莖相比硫、鉀和粗纖維含量都有不同程度的下降；腐爛根莖與健康根莖磷含量相同，都為0.11%；鈣、銅、錳、灰粉和粗脂肪含量都呈增長趨勢；鎂、鋅、蛋白質(zhì)和粗纖維與藥材相比含量有所增加，與健康根莖相比含量有所下降；藥材與健康根莖相比含量相同。

表2 滇重樓藥材、健康根莖及腐爛根莖元素及蛋白質(zhì)等組分的含量測定結(jié)果

注：“↑”表示含量升高；“↓”表示含量降低。

表3 滇重樓藥材、健康根莖及腐爛根莖中脂肪酸含量的測定

注：(1)檢測依據(jù)：氣相色譜-甲酯化法，脂肪酸相對含量以%計；(2)表中“/” 為未檢出；(3)峰數(shù)以“個”表示。(4)“↑”表示含量升高；“↓”表示含量降低。

2.3 脂肪酸的含量

脂肪酸含量的測定結(jié)果見表3。從表3可以看出藥材、健康根莖及腐爛根莖都未檢出r-亞麻酸，藥材中未檢測出廿碳烯酸和芥酸，但其含量都是腐爛根莖比健康根莖含量高；腐爛根莖中棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、a-亞麻酸含量及其它脂肪酸(峰數(shù))都介于藥材和健康根莖之間。

3 討論

由于滇重樓繁殖率低，其傳統(tǒng)藥用部位根莖的自然生長速度十分緩慢，從種子生長為藥用商品，一般需10～15年。近年來，由于對野生資源的過度采挖，滇重樓野生資源已漸趨瀕危，人工種植已成為解決市場需求，實現(xiàn)野生資源可持續(xù)利用的唯一途徑。滇重樓是云南省地道稀缺貴重藥材，隨著中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，近10年來云南省重樓栽培面積不斷擴大，但根腐病非常嚴重，從田間調(diào)查發(fā)現(xiàn)，滇重樓的根腐病發(fā)病率一般為50%，嚴重的可達到87.7%，也影響原料的外觀性狀及內(nèi)在質(zhì)量[7-8]。

楊永紅等[8-10]在進行《重樓規(guī)?；N植中關(guān)鍵技術(shù)研究》及承擔(dān)國家中藥材扶持項目《稀缺藥材滇重樓優(yōu)質(zhì)種苗基地建設(shè)及規(guī)范化種植關(guān)鍵技術(shù)示范推廣》項目研究中首次報道滇重樓根莖腐爛癥狀為根莖從尾部開始腐爛，根莖表皮顏色黑褐色，腐爛部位變綿軟，解剖根莖，腐爛部位為黃白色腐爛物，有惡臭，嚴重程度與小桿線蟲Rhabditissp.原始密度密切相關(guān)。在對不同種植年限的重樓病蟲害調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，所有地塊均有不同程度的發(fā)生根腐病，種植2年的地塊平均發(fā)病率達55.3%，病情指數(shù)達28.4%；種植3年的地塊平均發(fā)病率達67.7%，病情指數(shù)達23%；種植4年的地塊平均發(fā)病率達87.7%，病情指數(shù)達26.4%；隨著種植年限的增長，發(fā)病率越高，病情指數(shù)也越高，病蟲害越為嚴重，藥材腐爛程度越高。 其實在調(diào)查中我們發(fā)現(xiàn)即使完全健康的重樓在縱切時都會發(fā)現(xiàn)不規(guī)則褐色小點；在對藥材的生藥學(xué)研究中發(fā)現(xiàn)幾乎都存在一定程度的腐爛，我們在測定滇重樓健康、病健交界部分、完全腐爛部分、藥材及人工種植滇重樓1級到6級腐爛的樣品四種皂苷的含量時發(fā)現(xiàn)重樓皂苷VII、PA和H含量均呈如下趨勢：病健交界部分>藥材>健康>完全腐爛部分，此與我們的測定結(jié)果完全符合(另文報道)。由此得出結(jié)論：其實重樓的藥材中都存在一定程度的腐爛；多重研究表明：推斷此可能與重樓生長緩慢有一定關(guān)系，在生長過程中繁育生長消耗掉一部分營養(yǎng)，病蟲害發(fā)生也同時在消耗營養(yǎng)。

[1] 李恒.重樓屬植物[M].北京：科學(xué)出版社(第二次印刷),2008：1-7.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：962.

[3] 李運昌.重樓屬植物引種栽培的研究—Ⅰ.滇重樓的有性繁殖試驗初報. 云南植物研究[J].1982，4(4)：429-431.

[4] 李運昌. 重樓屬植物引種栽培的研究Ⅱ.滇重樓的育苗試驗. 云南植物研究[J].1986，8(2)：209-212.

[5] 武姍姍，高文遠，段宏泉，等. 重樓化學(xué)成分和藥理作用研究進展[J]. 中草藥，2004，35(3)：110-113.

[6] 吳珊，吳衛(wèi)，鄭有良. 反相高效液相色普法同時測定重樓藥材中4種皂苷的含量[J]. 時珍國醫(yī)國藥. 2007，18(8)：1896-1897.

[7] 方仲達. 植病研究法[M]，第三版. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1998：306-325.

[8] 楊永紅，陸峻波，王明輝，等. 從文獻分析看我國重樓研究進展[J]. 中藥材. 2008,31(1)：165-177.

[9] 楊永紅，劉君英，王明輝，等. 滇重樓根莖腐爛與小桿線蟲的關(guān)系[J]. 中藥材. 2008,31(10)：7-9.

[10] 楊永紅，嚴君，劉君英，等. 滇重樓根莖腐爛的調(diào)查及其主要害蟲研究[J]. 中藥材，2009，32(9)：1342-1346.

TheDeterminationofAminoAcidandElementsCompareAnalysisinScareMedicinalMaterial，Healthy，RottedRhizomesofP.polyphyllavar.yunnansensis

SU Bao1，YANY Zhi-lei2，YANG Yong-hong2*，ZHANG Ming2，YANG Wan-mei2，WEI Jian-rong1，YIN Ping-yue1

(1.YunnanBaiyaoGroupWenshanQihuaLimitedCompany，YunnanWenshan663000，China； 2.DepartmentofPlantProtection，YunnanAgricultureUniversity，Yunnan，Kunming650201，China)

Objective：To analysis the content of the amino acid，chemical elements and fatty acid from different materials ofP.polyphyllavar.yunnansensis.Methods：Automatic amino acid analyzer，plasma emission spectrometer(ICP)to determine amino acid，chemical elements and fatty acid of medicinal materials，healthy and rotted rhizomes.Results:The content of amino acid，elements and fatty acid of the medicinal materials，healthy and rotted rhizomes were different.Conclusion:Compared with medicinal material and the healthy rhizome，the content of the amino acid in rotted rhizome are lower.the content of sulfur，potassium and coarse fiber in rotted rhizome was lower than medicinal material and healthy rhizome.The content of phosphorus in rotted rhizome and healthy rhizome were 0.11%.

Parispolyphyllavar.yunnanensis(Fr.)Hand.-Mazz.;Medicine aterial;Healthy rhizome;Rotted rhizome;Amino acid;Element;Fatty acid

2013-05-16)

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工業(yè)和信息化部消費品工業(yè)司中藥材扶持項目(2008年度)

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楊永紅，教授，博士后，主要從事中藥資源及其相關(guān)研究；E-mail：yyh831994@163.com