板翹解毒顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

葉偉兵 趙琦 陳健媚

（廣州市荔灣區(qū)第二人民醫(yī)院，廣東 廣州510160）

板翹解毒顆粒劑是由我院制劑板翹解毒口服液經(jīng)劑型改良后制成，由板藍(lán)根、石膏、連翹、知母等組方而成，主要用于風(fēng)熱感冒、溫病發(fā)熱、上呼吸道感染、腮腺炎及其他病毒感染。為提高制劑質(zhì)量，本研究采用薄層色譜法（TLC）對(duì)連翹、板藍(lán)根及知母進(jìn)行定性研究，并應(yīng)用高效液相色譜法（HPLC）建立制劑中連翹苷的含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（HP1100，安捷倫）；二極管陣列檢測(cè)器（安捷倫）；定量毛細(xì)管（日本）；硅膠G（青島海洋化工廠）；連翹苷對(duì)照品（批號(hào)：0821-9903，供含量測(cè)定用），連翹對(duì)照藥材（批號(hào)：908-9908），板藍(lán)根對(duì)照藥材（批號(hào)：177-200303），菝葜皂苷元（批號(hào)：744-9904，供鑒別用），均購(gòu)自原中國(guó)藥品生物制品檢定所；板翹解毒顆粒，自制，規(guī)格為10 g/袋，批號(hào)：111231、120101、120102；陰性樣品（按處方工藝制得缺味樣品）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 連翹的鑒別

取本品5 g，研細(xì)，加稀乙醇20 mL，超聲處理（300 w，35 kHz）20 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺連翹陰性對(duì)照樣品5 g，同法制成陰性對(duì)照溶液。再取連翹對(duì)照藥材0.5 g，加稀乙醇 20 mL，超聲處理20 min，同法制成對(duì)照藥材溶液。分別吸取供試品溶液、缺連翹陰性對(duì)照溶液及對(duì)照藥材溶液各10 μL分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以三氯甲烷-甲醇（7∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以香草醛硫酸溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾，結(jié)果見圖1。

圖1 連翹TLC圖

2.2 板藍(lán)根的鑒別

取缺板藍(lán)根陰性對(duì)照5 g，研細(xì)，按2.1項(xiàng)下同法制成陰性對(duì)照溶液；另取板藍(lán)根對(duì)照藥材1 g，按2.1項(xiàng)下同法制成對(duì)照藥材溶液。吸取2.1項(xiàng)下制備的供試品溶液、缺板藍(lán)根陰性對(duì)照溶液及對(duì)照藥材溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以正丁醇-無(wú)水乙酸-水（19∶5∶5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾，結(jié)果見圖2。

圖2 板藍(lán)根TLC圖

2.3 知母的鑒別

取本品10 g，加溫水 20 mL，攪拌使溶解完全，加乙酸乙酯振搖提取 3次，每次20 mL，取水層溶液，加鹽酸3 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過(guò)，濾液加三氯甲烷振搖提取3次，每次15 mL，合并三氯甲烷液，加氨試液洗滌2次，每次20 mL，再用水洗滌 3次，每次20 mL，取三氯甲烷液，水浴蒸干，殘?jiān)萌燃淄? mL溶解，作為供試品溶液。另取缺知母陰性對(duì)照10 g，同法制成陰性對(duì)照溶液，再取菝葜皂苷元對(duì)照品，加三氯甲烷制成每1 mL含3 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。分別吸取供試品溶液、缺知母陰性對(duì)照溶液及對(duì)照品溶液各 10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以苯-丙酮（9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以香草醛硫酸溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾，結(jié)果見圖3。

圖3 知母TLC圖

2.4 連翹苷的含量測(cè)定

2.4.1 色譜條件 色譜柱Kromasil 100-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-水（22∶78），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為277 nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為20 μL，理論板數(shù)按連翹苷計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.4.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取連翹苷適量，用70%甲醇溶解并配制成每1 mL含100 μg的對(duì)照品溶液。

2.4.3 供試品溶液的制備[1-2]取本品5 g，精密稱定，加熱水20 mL，攪拌使完全溶解，加乙酸乙酯振搖提取6次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解，置10 mL容量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，即得。取缺連翹陰性樣品，同法制備陰性對(duì)照溶液。按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明陰性無(wú)干擾。見圖4。

圖4 對(duì)照品、陰性對(duì)照和板翹解毒顆粒HPLC圖

2.4.4 線性關(guān)系 分別精密吸取對(duì)照品溶液1，2，5，10，20，30，40 μL 注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定，測(cè)定結(jié)果以進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：

Y=741.487X－9.228，r=0.999 9

線性范圍為 0.10～ 4.00 μg。

2.4.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液20 μL，重復(fù)進(jìn)樣 6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果連翹苷峰面積的RSD為0.69%，表示儀器精密度良好。

2.4.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液各20 μL，分別在 0，6，12，18，24 h 進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，結(jié)果連翹苷峰面積的RSD為1.39%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.4.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)顆粒6份，每份5 g，精密稱定，按2.4.3項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定峰面積并計(jì)算含量，結(jié)果連翹苷的平均含量為0.153 mg/g，RSD為1.82%，表明本法具有良好的重復(fù)性。

2.4.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的同一批號(hào)樣品（連翹苷含量 0.153 mg/g）6份，每份 2.5 g，精密稱定，再分別精密加入含連翹苷對(duì)照品水溶液（0.078 mg/mL）5 mL，按供試品溶液的制備及樣品的測(cè)定方法操作，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=2）

2.4.9 樣品的測(cè)定 取3批樣品，按供試品溶液制備方法制備溶液，進(jìn)樣測(cè)定含量。批號(hào)為111231，120101，120102的3批樣品中，連翹苷含量分別為0.153，0.143，0.144 mg/g。

3 討論

連翹TLC鑒別展開劑曾嘗試三氯甲烷-甲醇（8∶1）、三氯甲烷-甲醇（7∶1）[2]及三氯甲烷-甲醇-無(wú)水乙酸（17∶2∶1）[3]，最后確定采用三氯甲烷-甲醇（7∶1），并優(yōu)化了供試品溶液的制備方法。板藍(lán)根TLC鑒別展開劑采用文獻(xiàn)方法[2，4-5]，確定了正丁醇-無(wú)水乙酸-水（19∶5∶5）。 知母展開劑采用文獻(xiàn)方法[2，6]，確定了苯-丙酮（9∶1）。 結(jié)果顯示陰性對(duì)照均無(wú)干擾，專屬性較好。

連翹苷含量測(cè)定方法中，采用乙腈-水為流動(dòng)相，曾比較了多種比例的流動(dòng)相[1-2，7-8]，結(jié)果乙腈-水為22∶78時(shí)，連翹苷分離度較好，峰形尖銳且較對(duì)稱，不拖尾。該測(cè)定方法簡(jiǎn)便、快速、可靠，適用于板翹解毒顆粒的質(zhì)量控制。

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