祛風(fēng)止痛丸藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究

萬宏

（湖北中醫(yī)藥大學(xué)附屬襄陽醫(yī)院，湖北 襄陽 441000）

祛風(fēng)止痛丸為我院協(xié)定處方制劑，具有疏風(fēng)通絡(luò)、清熱利濕、消腫止痛之功效，臨床應(yīng)用具有作用快速、療效肯定的特點(diǎn)。本文對(duì)其藥效學(xué)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與儀器

1.1 藥品與試劑

祛風(fēng)止痛丸，襄陽市中醫(yī)院制劑室生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào)：鄂藥制字 Z20112330，批號(hào)：20110212；痛風(fēng)定膠囊，成都中匯制藥有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字Z10970025，批號(hào)：030101；次黃嘌呤，上海試劑二廠生產(chǎn)，批號(hào)：851226；尿酸，Lancaster公司生產(chǎn)，批號(hào)：10057758；尿酸試劑盒，中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)，規(guī)格 5 mL×10支，批準(zhǔn)文號(hào)：（95）衛(wèi)藥準(zhǔn)字 D-19（1）號(hào)，批號(hào)：330091。

1.2 動(dòng)物

昆明種小鼠、Wistar大鼠、新西蘭大白兔均由新疆醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)分別為：SCXK（新）090001，SCXK（新）090014，SCXK（新）090003。

1.3 儀器設(shè)備

SABA-18型血生化自動(dòng)分析儀（意大利）；OLYMPUS 顯微鏡（日本），型號(hào)：379330；電子恒溫干燥箱，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械一廠，型號(hào)：GZXDH30X35。

2 方法

2.1 微晶尿酸鈉（MSU）的制備

取8 g尿酸置1 600 mL沸水中，調(diào)節(jié)pH至7.4，再加熱至95℃，室溫冷卻并輕輕攪拌，過濾，得MSU，高溫（200℃）滅菌。用前以無菌生理鹽水配成100 mg/mL的混懸液。

2.2 觀察祛風(fēng)止痛丸對(duì)MSU誘導(dǎo)的大鼠足跖腫脹的影響[1-2]

取 Wistar大鼠 50只，雄性，體質(zhì)量（163.0±33.0）g，隨機(jī)分為 5組，每組 10只，即模型組、陽性對(duì)照藥組及祛風(fēng)止痛丸3個(gè)劑量組。祛風(fēng)止痛丸劑量分別為：1.0，2.0，4.0 g/kg，分別用生理鹽水配制成濃度為 10%，20%，40%的溶液，按 1 mL/100 g灌胃，每日1次，連續(xù)10 d。給藥最后一天，無菌操作，于大鼠右后足跖皮下注射0.1 mL MSU混懸液（100 mg/mL）致炎。通過測(cè)量大鼠左后足跖周徑測(cè)定致炎前后左右后足跖周徑的變化，致炎前及致炎后 0.5，1，2，4，6 h 檢測(cè)足跖周徑，以致炎前后足跖周徑之差作為腫脹度。觀察祛風(fēng)止痛丸對(duì)MSU致大鼠足跖腫脹的影響。計(jì)算各組大鼠足跖腫脹度均值與標(biāo)準(zhǔn)差、各用藥組抑制率，并作t檢驗(yàn)。

2.3 觀察祛風(fēng)止痛丸對(duì)MSU誘導(dǎo)的兔急性關(guān)節(jié)炎模型的影響[3-4]

取家兔48只，隨機(jī)分組，每組8只，體質(zhì)量（2.64± 0.48）kg，雄性。設(shè)生理鹽水對(duì)照組、模型組、痛風(fēng)定膠囊組和祛風(fēng)止痛丸3個(gè)劑量組（分別為 0.5，1.0，2.0 g/kg），灌胃給藥，每天 1 次，連續(xù)10 d，末次給藥1 h后致炎。致炎時(shí)無菌操作，膝關(guān)節(jié)內(nèi)注射 0.3 mL MSU（100 mg/mL）混懸液致炎。致炎后5 h處死家兔，收集關(guān)節(jié)積液，進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)，并取滑液膜進(jìn)行組織學(xué)檢查。主要觀察滑膜組織、滑膜細(xì)胞腫脹、壞死、白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)等炎癥反應(yīng)的程度。比較用藥組和模型組關(guān)節(jié)液中白細(xì)胞和病理組織檢查的差異，并進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。

2.4 觀察祛風(fēng)止痛丸對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用[5-6]

取昆明種小鼠50只，雌雄兼用，體質(zhì)量（20.3±1.5）g。隨機(jī)分成5組。設(shè)生理鹽水對(duì)照組、痛風(fēng)定膠囊組及祛風(fēng)止痛丸3個(gè)劑量組 （1.5，3.0，4.5 g/kg），小鼠依體質(zhì)量灌胃給藥，每天1次，連續(xù)3 d。末次給藥后1.0 h，腹腔注射HAc，觀察各組小鼠每15 min內(nèi)扭體次數(shù)。作組間均數(shù)t檢驗(yàn)，計(jì)算抑制率。

2.5 觀察祛風(fēng)止痛丸對(duì)小鼠高尿酸血癥的影響[7-8]

采用尿酸生成的前體物質(zhì)次黃嘌呤來建立高尿酸血癥動(dòng)物模型，并通過血中尿酸的含量來評(píng)價(jià)祛風(fēng)止痛丸的藥效。

2.5.1 建立高尿酸血癥動(dòng)物模型 取小鼠15只，單次腹腔注射次黃嘌呤1 000 mg/kg，形成高尿酸血癥模型，分別在造模前、造模后 0.5，1，2，4 h各處死3只，取血清測(cè)定尿酸濃度作曲線，觀察各時(shí)段模型小鼠血清尿酸值。

2.5.2 實(shí)驗(yàn)方法 取昆明種小鼠144只，體質(zhì)量（20.3± 1.5）g，雌雄兼用。依體質(zhì)量隨機(jī)分為6組，每組24只，設(shè)生理鹽水對(duì)照組、模型組、痛風(fēng)定組和祛風(fēng)止痛丸 3個(gè)劑量組（1.5，3.0，4.5 g/kg），灌胃給藥，每天1次，連續(xù)6 d。末次給藥后60 min造模，給小鼠腹腔注射次黃嘌呤1 000 mg/kg，造模后 0.5，1，2 h，分別處死小鼠，取血制備血清，依尿酸試劑盒方法測(cè)定各組血清尿酸值。作組間均數(shù)t檢驗(yàn)，評(píng)定祛風(fēng)止痛丸有無降低血清尿酸作用。

3 結(jié)果

3.1 祛風(fēng)止痛丸對(duì)MSU誘導(dǎo)的大鼠足跖腫脹的影響

痛風(fēng)定膠囊在致炎后2～6 h內(nèi)對(duì)大鼠MSU誘導(dǎo)的足跖腫脹有抑制作用，祛風(fēng)止痛丸3個(gè)劑量均有明顯抑制作用，中、大劑量可持續(xù)作用6 h以上。祛風(fēng)止痛丸對(duì)大鼠MSU誘導(dǎo)的足跖腫脹的抑制率為12.3% ～ 68.5%，結(jié)果見表1，2。

表1 祛風(fēng)止痛丸對(duì)MSU誘導(dǎo)的大鼠足跖腫脹的影響（n=10，±s）

表1 祛風(fēng)止痛丸對(duì)MSU誘導(dǎo)的大鼠足跖腫脹的影響（n=10，±s）

注：與模型組比較，**P＜0.05，***P＜0.01

組別 劑量（g/kg） 正常值（cm） MSU致炎后足跖腫脹度（cm）0.5 h 1 h 2 h 4 h 6 h模型組 - 2.99±0.09 0.34±0.12 0.15±0.08 0.63±0.07 0.71±0.08 0.91±0.15痛風(fēng)定膠囊組 0.5 2.93±0.09 0.24±0.10** 0.35±0.08** 0.45±0.10*** 0.81±0.18 1.00±0.16祛風(fēng)止痛丸組 1.0 2.94±0.14 0.22±0.12** 0.39±0.16** 0.49±0.16** 0.62±0.15 0.72±0.18**2.0 2.95±0.08 0.18±0.08** 0.29±0.10** 0.39±0.12*** 0.56±0.14*** 0.74±0.15**4.0 2.91±0.06 0.11±0.08** 0.18±0.11*** 0.24±0.13*** 0.35±0.14*** 0.40±0.14***

表2 祛風(fēng)止痛丸對(duì)MSU誘導(dǎo)的大鼠足跖腫脹的抑制率（n=10）

3.2 祛風(fēng)止痛丸對(duì)MSU誘導(dǎo)的兔急性關(guān)節(jié)炎模型的影響[3-4]

模型組與生理鹽水對(duì)照組比較WBC顯著增加，提示模型成立。祛風(fēng)止痛丸各劑量組與模型組比較WBC顯著減少，并呈現(xiàn)劑量依賴性（見表3）。病理檢查顯示祛風(fēng)止痛組炎癥表現(xiàn)明顯減輕。

表3 祛風(fēng)止痛丸對(duì)MSU誘導(dǎo)的兔急性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)液中WBC的影響（n=8，±s）

表3 祛風(fēng)止痛丸對(duì)MSU誘導(dǎo)的兔急性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)液中WBC的影響（n=8，±s）

注：***與模型組比較P＜0.01；+++與對(duì)照組比較P＜0.01

組別 劑量（g/kg） WBC（×109/L）生理鹽水對(duì)照組 2.0 0.5±0.2模型組 - 15.7±2.2+++痛風(fēng)定膠囊組 0.2 4.9±1.6***祛風(fēng)止痛丸組 0.5 13.2±1.4***1.0 8.5±3.3***2.0 2.6±1.0***

3.3 祛風(fēng)止痛丸對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用[5-6]

祛風(fēng)止痛丸組與對(duì)照組比較，扭體次數(shù)明顯減少（見表 4）。

3.4 祛風(fēng)止痛丸對(duì)小鼠高尿酸血癥的影響[7-8]

3.4.1 觀察各時(shí)段模型小鼠血清尿酸值 見圖1。

由圖1可見，造模后血中尿酸含量在0.5 h達(dá)到高峰值，而后隨時(shí)間延長(zhǎng)而降低。

表4 祛風(fēng)止痛丸對(duì)HAc引起的小鼠扭體反應(yīng)的影響（n=10，±s）

表4 祛風(fēng)止痛丸對(duì)HAc引起的小鼠扭體反應(yīng)的影響（n=10，±s）

注：***與生理鹽水對(duì)照組比較，P＜0.01。

組別 劑量（g/kg） 扭體（次/15min） 抑制率（%）生理鹽水對(duì)照組 2.0 47.9±12.4 -痛風(fēng)定膠囊組 0.7 18.0± 9.9*** 62.4祛風(fēng)止痛丸組 1.5 18.7±14.1*** 61.0 3.0 19.1±12.4*** 60.1 4.5 7.6± 8.6*** 84.1

圖1 不同時(shí)間段模型組小鼠血清中尿酸值變化

3.4.2 依尿酸試劑盒方法測(cè)定各組鼠血清尿酸值模型組與對(duì)照組比較各時(shí)段血清尿酸值均顯著升高，表明模型成立。各給藥組與模型組比較，血清尿酸值隨著劑量增加而降低，見表5。

表5 祛風(fēng)止痛丸對(duì)各時(shí)段血清尿酸含量的影響（n=24，±s）

表5 祛風(fēng)止痛丸對(duì)各時(shí)段血清尿酸含量的影響（n=24，±s）

注：***與模型組比較，P＜0.01；+++與對(duì)照組比較，P＜0.01

不同時(shí)間段尿酸值的變化（u g/d L，×1 0 4）0.5 h 1 h 2 h生理鹽水對(duì)照組 2.0 0.3 2±0.0 9 0.2 9±0.0 4 0.3 1±0.0 6模型組 - 2.9 7±0.9 6+++ 3.6 0±0.8 9+++ 2.3 0±1.1 8+++痛風(fēng)定膠囊組 0.7 0.7 9±0.2 2*** 0.9 0±0.1 6*** 0.5 9±0.1 5***祛風(fēng)止痛丸組 1.5 0.9 5±0.0 5*** 0.9 0±0.1 3*** 0.3 3±0.0 8***3.0 0.7 8±0.1 5*** 0.6 9±0.1 6*** 0.3 8±0.1 4***4.5 0.5 3±0.1 6*** 0.5 0±0.2 0*** 0.2 3±0.1 1***組別 劑量（g/k g）

3 小結(jié)

痛風(fēng)又稱“高尿酸血癥”，中醫(yī)認(rèn)為屬于“熱痹”的范疇，是一種常見的疾病，發(fā)病率在0.35%左右[10]，相近于癌癥的發(fā)病率。本研究發(fā)現(xiàn)祛風(fēng)止痛丸對(duì)MSU誘導(dǎo)的大鼠足跖腫脹、兔急性關(guān)節(jié)炎模型有明顯的抑制作用；使腹腔注射HAc引起的小鼠扭體反應(yīng)明顯減少。祛風(fēng)止痛丸能明顯降低由次黃嘌呤引起的小鼠高尿酸血癥模型中血尿酸含量，對(duì)實(shí)驗(yàn)性痛風(fēng)模型有明顯的防治作用，且有劑量依賴性，為其用于臨床治療痛風(fēng)提供了藥理學(xué)依據(jù)。

[1] 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002.

[2] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006.

[3] 唐燦，楊奎.高尿酸血癥動(dòng)物模型初探[J].中藥新藥與臨床藥理，2000，11（5）：292-294.

[4] 多月英，王宇偉，申秀萍，等.風(fēng)濕1號(hào)顆粒的抗痛風(fēng)作用[J].中草藥，2001，32（4）：341-343.

[5] 趙軍寧，王曉東，彭曉華，等.秦皮總香豆素對(duì)實(shí)驗(yàn)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通訊，2003，20（2）：61.

[6]袁伯俊，顧長(zhǎng)虹.臨床藥理評(píng)價(jià)不可忽視的問題——比較藥理學(xué)研究[J].中藥新藥與臨床藥理，1996，7（1）：45-47.

[7] 盛國(guó)榮.復(fù)方利多卡因乳膏的處方優(yōu)選[J].中國(guó)藥房，2009，20（28）：2182-2184.

[8] 周秋雯，徐建國(guó)，謝蔚影.氫溴酸高烏甲素對(duì)神經(jīng)病理性疼痛大鼠的影響[J].臨床麻醉學(xué)雜志，2006，22（11）： 847-849.

[9] 董雯.痛風(fēng)病的中醫(yī)藥治療[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，24（1）：107-108.

[10] 曾學(xué)君.痛風(fēng)的治療進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)信息導(dǎo)報(bào)，2007，22（8）：20-21.