聚乳酸－聚乙二醇三嵌段共聚物包載紫杉醇納米膠束的制備及其體外藥物釋放行為

齊 旭，劉 佩，李速明，范仲勇

（復(fù)旦大學(xué) 材料科學(xué)系，上海200433）

紫杉醇是提取自紅豆杉科植物樹(shù)皮的一種植物抗癌藥物，廣泛應(yīng)用于多種腫瘤的治療，如卵巢癌、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、肝癌、腦瘤等[1－5].然而紫杉醇在水中的溶解度很低，為了更好地應(yīng)用，臨床上采用聚氧乙烯蓖麻油和無(wú)水乙醇體積比為1∶1的混合溶劑做助溶劑得到紫杉醇濃縮制劑，使用前以生理鹽水或5%葡萄糖進(jìn)行稀釋后靜脈滴注給藥.這種配方使用方便，但聚氧乙烯蓖麻油會(huì)引起過(guò)敏反應(yīng)、神經(jīng)毒性、心臟毒性[6]等不良反應(yīng)，增加了患者的痛苦.采用脂質(zhì)體、微球、膠束、前藥等方法進(jìn)行物理包埋或化學(xué)鍵合，能夠得到水溶藥物制劑，減輕副作用.兩親性聚合物自組裝形成的核殼結(jié)構(gòu)是藥物的良好載體，同時(shí)可依據(jù)豐富的合成方法對(duì)聚合物分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行調(diào)控，這些都使得聚合物納米膠束在藥物傳遞方面具有應(yīng)用前景.

生物可吸收聚乳酸聚乙二醇嵌段共聚物納米膠束，作為良好的藥物載體已經(jīng)得到了廣泛的研究及應(yīng)用[7－10].通過(guò)透析法、溶劑揮發(fā)／薄膜水化法、復(fù)乳法等可制備具有核殼結(jié)構(gòu)的載藥納米膠束.在水溶液中，聚乳酸鏈段聚集組成膠束的疏水內(nèi)核，聚乙二醇則形成膠束的外殼.聚乳酸在體內(nèi)可以代謝完全，具有很好的生物相容性.分子量在30 000以下的聚乙二醇能夠通過(guò)肝臟代謝出體外[11].另外，聚乙二醇鏈段作為載藥膠束外部殼結(jié)構(gòu)，具有控制蛋白調(diào)理素的作用，這使得載藥膠束免于被網(wǎng)狀內(nèi)皮組織非特異性吸收，具有被動(dòng)靶向的作用.現(xiàn)有文獻(xiàn)研究結(jié)果表明，共聚物嵌段序列比以及共聚物分子量對(duì)藥物包封率、釋放行為有影響.

在前期研究[12]中發(fā)現(xiàn)，立構(gòu)復(fù)合膠束的載藥量是單一膠束載藥量的1.6倍.另一方面，載藥膠束的制備方法對(duì)藥物釋放行為亦有影響，如在30d藥物釋放實(shí)驗(yàn)中，直接溶解法制備的載藥膠束藥物累積釋放率可達(dá)透析法的2倍等結(jié)果.在此基礎(chǔ)上，本文報(bào)道采用聚乙二醇引發(fā)丙交酯開(kāi)環(huán)聚合，合成了不同分子量的聚乳酸－聚乙二醇－聚乳酸（Polylactide－poly（ethylene glycol）－polylactide，PLA－PEG－PLA）嵌段共聚物，分別采用直接溶解法和溶劑揮發(fā)／薄膜水化法制備了載藥膠束，對(duì)其形態(tài)、釋放、對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制行為進(jìn)行了研究.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要試劑與儀器

左旋－乳酸（AR級(jí)），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；雙羥基聚乙二醇（PEG，數(shù)均分子量為2 000，6 000），德國(guó)Fluka公司；乳酸鋅（Zn（La）2），美國(guó)Sigma公司；紫杉醇（paclitaxel，PTX），西安昊軒生物科技有限公司；透析袋（MWCO＝1 000，3 500），上海綠鳥(niǎo)生物科技有限公司.乙酸乙酯、無(wú)水乙醚、二氯甲烷、吐溫80等，AR級(jí)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司.乙腈、四氫呋喃，HPLC級(jí)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司.磷酸氫二鈉，AR級(jí)，上海強(qiáng)順化學(xué)試劑有限公司.磷酸二氫鉀，AR，上海大合化學(xué)品有限公司.

1H核磁共振測(cè)試（1H NMR）在BRUKER液體核磁共振儀上進(jìn)行.共振頻率為500MHz，溶劑為氘代氯仿，化學(xué)位移以四甲基硅烷（TMS）作內(nèi)標(biāo).

差示掃描量熱分析（DSC）在 Perkin－Elmer DSC6儀器上完成，樣品質(zhì)量為 6±0.1mg，在30mL／min N2保護(hù)下以10℃／min升溫速度從室溫到150℃.

掃描電鏡測(cè)試（SEM）在S－4800高分辨場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡上完成，濃度為10mg／mL聚合物樣品滴在硅片上風(fēng)干后進(jìn)行觀察.

凝膠滲透色譜（GPC）測(cè)定聚合物分子量采用帶折光指數(shù)的 Water 410儀器測(cè)試得到.流動(dòng)相為四氫呋喃，流速1.0mL／min，以聚苯乙烯為標(biāo)樣.

高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）在日本島津公司LC－10A型液相色譜儀上完成，配以SPD－10A紫外UV檢測(cè)器和Dionex色譜柱（C18填料，5μm，4.6mm×250mm）.檢測(cè)波長(zhǎng)227nm流動(dòng)相為乙腈／水（55∶45，體積比），流速為1.0mL／min.

粒徑測(cè)試采用馬爾文Zetasizer Nano粒度電位分析儀，制備聚合物濃度為0.5mg／mL的樣品進(jìn)行測(cè)定.溶劑揮發(fā)／薄膜水化法制備膠束在EYELA N－100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上完成.

1.2 載藥膠束的制備及粒徑測(cè)定

直接溶解法采用磁力攪拌器，在轉(zhuǎn)速500r／min下，將50mg共聚物于溶解于5mL去離子水中，隨后在室溫下加入紫杉醇攪拌、分散24h后，離心去除不溶藥物，0.45μm濾膜過(guò)濾，于4℃保存.溶劑揮發(fā)／薄膜水化法首先需要配制共聚物和紫杉醇的乙腈溶液，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑乙腈，得到均勻透明聚合物膜.真空放置過(guò)夜，除去痕量溶劑.加入去離子水室溫溶解薄膜，離心去除不溶藥物，0.45μm濾膜過(guò)濾，于4℃保存.

采用馬爾文粒度電位分析儀，對(duì)聚合物濃度為0.5mg／mL的樣品進(jìn)行粒徑測(cè)定.將樣品滴加載硅片自然風(fēng)干后SEM觀察形貌.

1.3 載藥膠束的體外釋放和載藥量測(cè)定

轉(zhuǎn)移1mL載藥膠束至透析袋，浸沒(méi)在5mL釋放介質(zhì)磷酸鹽緩沖溶液（PBS，0.01mol／L，pH＝7.4，含有0.1%體積比吐溫80）中，37℃恒溫振蕩模擬體內(nèi)循環(huán)條件.于設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)點(diǎn)將釋放介質(zhì)全部取出，補(bǔ)充等體積新鮮緩沖介質(zhì).取出的釋放介質(zhì)，使用HPLC測(cè)試藥物濃度，繪制體外釋放紫杉醇累積釋放率－時(shí)間曲線.定體積的載藥膠束加入容量瓶中，甲醇定容超聲15min后使用HPLC測(cè)定紫杉醇濃度，確定載藥膠束的載藥量和包封率.

1.4 載藥膠束對(duì)大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的抑制

3－（4，5－二甲基噻唑－2）－2，5－二苯基四氮唑溴鹽（噻唑藍(lán)，MTT）能夠被活細(xì)胞線粒體中琥珀酸脫氫酶氧化，但同死細(xì)胞不發(fā)生反應(yīng)，利用MTT氧化后轉(zhuǎn)化為藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜對(duì)溶液的吸光度影響，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)測(cè)試游離紫杉醇蓖麻油乙醇制劑、兩種方法制備載紫杉醇的膠束對(duì)體外大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞（C6）存活率.C6由上海交通大學(xué)腫瘤研究所提供，以每孔5 000的密度接種在96孔板中，之后每孔中加入不同濃度的游離紫杉醇或載藥膠束溶液，每個(gè)濃度平行做三組.給藥48h后更換含MTT（5mg／mL）的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)，孵育3h.除去MTT溶液，每孔加入150μL DMSO溶解細(xì)胞.用酶標(biāo)儀讀數(shù)，測(cè)量495nm處的吸光度值.

2 結(jié)果與討論

2.1 PLA－PEG－PLA三嵌段共聚物的合成和表征

以乳酸鋅作為催化劑，PEG端羥基引發(fā)L型丙交酯開(kāi)環(huán)聚合[13]得到聚乳酸－聚乙二醇三嵌段共聚物（PLA－PEG－PLA），合成路線見(jiàn)圖1，共聚物中兩組分的摩爾比n（EO）∶n（LA）＝y(tǒng)∶2x.依據(jù)PEG分子量將共聚物命名為PEG2k／PLA和PEG6k／PLA.

圖1 雙羥基PEG引發(fā)L型丙交酯開(kāi)環(huán)聚合生成PLA－PEG－PLA三嵌段聚合物Fig.1 Ring－opening polymerization of L－lactide in the presence of dihydroxyl PEG using zinc lactate as catalyst

圖2為兩種三嵌段共聚物的1H NMR譜圖，特征質(zhì)子化學(xué)位移依圖所示.其中LA單元中次甲基上H原子的化學(xué)位移為5.2×10－6～5.3×10－6；EO單元中亞甲基上的 H 原子化學(xué)位移為3.6×10－6～3.7×10－6.依據(jù)2－H與1－H峰面積的比值可以計(jì)算三嵌段共聚物PEG2k／PLA和PEG6k／PLA的EO／LA值，分別為4.0和5.9.

由GPC測(cè)得嵌段共聚物的分子量，PEG2k／PLA與PEG6k／PLA 的Mn分別為2 760和6 740，這與1H NMR計(jì)算出的分子量2 790和7 660結(jié)果基本一致，分子量分布分別為1.06和1.13.

臨界膠束濃度（Critical Micellar Concentration，CMC）是評(píng)價(jià)膠束的重要參數(shù)，通過(guò)測(cè)定共聚物溶液的表面張力得到.圖3以表面張力對(duì)溶液對(duì)數(shù)濃度作圖，轉(zhuǎn)折點(diǎn)為膠束溶液的CMC.室溫下PEG2k／PLA和PEG6k／PLA在純水中的CMC分別為0.067，0.057g·L－1.CMC值越小，形成膠束越容易.在該條件下PEG6k／PLA分子更易于締合成膠束，膠束也更加穩(wěn)定.

圖2 PLA－PEG－PLA嵌段聚合物在CDCl3中的的1H核磁共振圖譜Fig.2 1H NMR spectra of PLA－PEG－PLA copolymers in CDCl3

2.2 載藥嵌段共聚物膠束的包封率和載藥量

使用HPLC測(cè)定紫杉醇濃度，得到載入膠束的紫杉醇質(zhì)量Mc.紫杉醇投藥質(zhì)量為Md，聚合物質(zhì)量為Mm.膠束體系的包封率和載藥量分別依據(jù)公式Mc／Md和Mc／（Mc＋Mm）計(jì)算得到.

兩種制備方法（直接溶解法和溶劑揮發(fā)／薄膜水化法）所得膠束的藥物包封結(jié)果如表1所示.采用Dx－y或Sx－y代表不同膠束體系:D和S指制備方法為直接溶解法 （direct dissolution）或 溶 劑 揮 發(fā)／薄 膜 水 化 法（solvent evaporation／membrane hydration），x代表聚合物為PEG2k／PLA或聚合物PEG6k／PLA，y代表投藥量百分比.比如D2－10指采用直接溶解法制備、聚合物為PEG2k／PLA、投藥量為10%的膠束體系.與之類似S6－5指采用溶劑揮發(fā)／薄膜水化法制備、聚合物為PEG6k／PLA、投藥量為5%的膠束體系.

比較表1數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)溶劑揮發(fā)／薄膜水化法的載藥量和包封率明顯高于直接溶解法.這種區(qū)別與膠束的制備過(guò)程有著很重要的聯(lián)系.直接溶解法在制備載藥膠束時(shí)，存在一個(gè)紫杉醇溶解－進(jìn)入膠束的平衡過(guò)程:首先聚合物形成膠束，加入紫杉醇后，溶于水中的少量紫杉醇因?yàn)橛H水－疏水作用，擴(kuò)散進(jìn)入膠束的疏水內(nèi)核中，因?yàn)樽仙即荚谒械娜芙舛群苄?，只?.5μg／mL，加入的紫杉醇是大大超過(guò)其在水中的飽和度的，所以游離的紫杉醇溶解至水相中，然后再進(jìn)入膠束，最后達(dá)到擴(kuò)散平衡.溶劑揮發(fā)／薄膜水化法在制備載藥膠束時(shí)，首先將紫杉醇和聚合物一起溶解在良溶劑乙腈中，之后經(jīng)過(guò)溶劑揮發(fā)后形成聚合物薄膜，其中聚合物分子鏈與藥物分子均勻分布.水化溶解的步驟給聚合物形成膠束提供了水相條件，聚合物自主形成膠束，形成膠束的過(guò)程中位于聚合物分子鏈附近的疏水紫杉醇藥物分子因?yàn)橥杷缘木廴樗徭湺蔚淖饔枚话策M(jìn)入到膠束核心.

圖3 三嵌段共聚物水溶液的表面張力－濃度變化曲線Fig.3 Surface tension changes of triblock copolymer solutions as a function of concentration

兩種制備方法在藥物包載過(guò)程中具有明顯的差別，直接溶解是逐步性地將藥物載入膠束內(nèi)部，溶劑揮發(fā)則是一次性地包載藥物至膠束核心.直接溶解法受限于紫杉醇在水中的擴(kuò)散，因此具有時(shí)間效應(yīng)，即隨著攪拌時(shí)間的增加膠束的載藥量逐步上升，是一個(gè)動(dòng)態(tài)增加的過(guò)程，這一點(diǎn)已經(jīng)在本組文章[12]中進(jìn)行了詳細(xì)的討論.溶劑揮發(fā)／薄膜水化法是一個(gè)靜態(tài)載藥的過(guò)程，因此在相同的投藥量的條件下，載藥量和包封率都高于直接溶解法.

觀察不同投藥量的對(duì)比數(shù)據(jù)，D6－10與D6－5相比，載藥量前者是后者的1.3倍，S6－10與S6－5相比，載藥量前者是后者的2倍.直接溶解法的制備過(guò)程基于動(dòng)態(tài)載藥過(guò)程，投藥量的增加對(duì)載藥量的影響不甚明顯.

表1 直接溶解法和溶劑揮發(fā)／薄膜水化法所得膠束的藥物包封結(jié)果Tab.1 Drug encapsulation data of PTX－loaded micelles prepared by direct dissolution and solvent evaporation／membrane hydration methods

2.3 膠束的粒徑研究

表2給出了膠束粒徑和粒徑強(qiáng)度分布數(shù)據(jù).疏水性藥物的包載會(huì)破壞單一膠束的穩(wěn)定性，造成粒徑值增大或影響粒徑的分布.對(duì)于聚合物PEG2k／PLA，D2－10與D2－0的粒徑差異不大，較低的載藥量對(duì)粒徑影響甚微.S2－10的粒徑高于S2－0，在高載藥量條件下藥物分子進(jìn)入膠束內(nèi)核，膠束粒徑增加.對(duì)于聚合物PEG6k／PLA，D6－10與 D6－0粒徑相比增加了200nm，S6－10大尺寸粒子峰強(qiáng)比S6－0增加了34.4%.

對(duì)比兩種制備方法可以發(fā)現(xiàn)，采用溶劑揮發(fā)／薄膜水化法制備的膠束尺寸較直接溶解法的小.S2－0膠束體系存在兩中尺寸的粒子，粒徑均小于D2－0，同時(shí)S6－0膠束小尺寸粒子峰強(qiáng)為46.7%，高出D6－0峰強(qiáng)20%，膠束體系中尺寸小的膠束比例較高.

表2 不同投藥量的D2，D6，S2，S6膠束粒徑和強(qiáng)度分布Tab.2 Size and intensity distributions of D2，D6，S2，S6micelles

納米膠束的結(jié)構(gòu)形態(tài)通過(guò)SEM觀察得到.圖4顯示了D6空白膠束和S6空白膠束的照片，可以估算出空白膠束的粒徑.圖4（a）中，通過(guò)直接溶解法制備的膠束的球體，粒徑均一在200nm左右.圖4（b）為采用溶劑揮發(fā)／薄膜水化法制備的膠束，可以明顯看到存在兩種尺寸的納米粒子，粒徑在50，150nm附近，膠束的邊緣不規(guī)則.SEM圖的粒徑結(jié)果與DLS結(jié)果一致.

圖4 用直接溶解法及薄膜水化法制備的空白膠束D6－0（a），S6－0（b）掃描電鏡圖Fig.4 SEM images of D6blank micelles prepared by direct dissolution method（a）and S6blank micelles prepared by solvent evaporation／membrane hydration.method（b）

2.4 載藥膠束的體外釋藥性質(zhì)

圖5（a）給出投藥量在10%的條件下選取的兩種聚合物通過(guò)兩種方法制備載藥膠束的體外釋放曲線，釋放時(shí)間為2d，各膠束體系都呈現(xiàn)出類拋物線的釋放趨勢(shì).聚合物PEG2k／PLA制備的載藥膠束無(wú)論是采用直接溶解法還是溶劑揮發(fā)／薄膜水化法，其累積釋放率均高于由PEG6k／PLA制備的載藥膠束.D2－10和S2－10在時(shí)間點(diǎn)2d均達(dá)到30%左右的累積釋放率，D6－10和S6－10在該時(shí)間點(diǎn)的累積釋放率在10%左右.圖5（b）列出了溶劑揮發(fā)／薄膜水化法制備的S2－5、S6－5的體外紫杉醇藥物釋放曲線，釋放時(shí)間為20d，S2－5一直保持著高于S6－5的釋放速率，這與圖5（a）呈現(xiàn)的規(guī)律一致.

釋放曲線體現(xiàn)出三種不同的體外釋放情況:S2－5、S2－10釋放的初始階段突釋明顯，釋放比例在20%左右，S6－10、D6－10突釋釋放比例在10%左右，很快在后續(xù)的時(shí)間點(diǎn)呈現(xiàn)出釋放放緩的平穩(wěn)階段；S6－5在釋放的初始階段突釋在1%以內(nèi)，后續(xù)呈線性增長(zhǎng)趨勢(shì)，繼而過(guò)度至放緩的平穩(wěn)階段；D2－10的釋放曲線最接近拋物線，釋放均勻且在2d的釋放時(shí)間內(nèi)沒(méi)有呈現(xiàn)出明顯的放緩狀態(tài).以共聚物PEG2k／PLA制備的載藥膠束釋放曲線均出現(xiàn)了較為明顯的突釋，與PEG6k／PLA相比其分子量更低，膠束外冠結(jié)構(gòu)疏松內(nèi)核分子鏈也較短，這使得藥物通過(guò)纏結(jié)分子鏈釋放到膠束外部更加容易，因此在釋放初期藥物以較快的速度釋放到外界形成突釋.

圖5 直接溶解法制備所得膠束D2－10，D6－10和溶劑揮發(fā)／薄膜水化法制備膠束S2－10，S6－10的體外紫杉醇藥物釋放曲線（a），溶劑揮發(fā)／薄膜水化法制備的S2－5、S6－5的體外紫杉醇藥物釋放曲線（b）Fig.5 In vitro release of PTX from D2－10，D6－10prepared by direct dissolution and S2－10，S6－10 prepared by solvent evaporation／membrane hydration.method（a），from S2－5and S6－5 micelles prepared by solvent evaporation／membrane hydration（b）

對(duì)藥物納米粒的釋放進(jìn)行公式[14－16]擬合，Ritger－Peppas與Weibull方程均可以很好地?cái)M合兩種方法的釋放曲線（R2＞0.9），表3中列出了依據(jù)Ritger－Peppas指數(shù)模型Mt／M∞＝ktn進(jìn)行曲線擬合，Mt／M∞為藥物在某一時(shí)刻的累積釋放分?jǐn)?shù)，t為釋放時(shí)間，k為常數(shù)是表征釋放速率的參數(shù)，n為特征參數(shù)，表示釋放機(jī)制.當(dāng)n＜0.45時(shí)，藥物的釋放符合Ficks擴(kuò)散機(jī)制，藥物釋放主要以擴(kuò)散為主；當(dāng)n＞0.9時(shí)，藥物釋放是由膠束溶蝕造成的；而當(dāng)n介于0.45和0.9之間時(shí)，藥物釋放則是二者共同作用下進(jìn)行的.對(duì)比釋放特征參數(shù)，D2－10的釋放過(guò)程是擴(kuò)散和膠束在釋放介質(zhì)中松弛變化共同作用的結(jié)果；S6－5的釋放過(guò)程主要是膠束的結(jié)構(gòu)變化引起的；而D6－10、S2－10、S6－10、S2－5主要是依賴藥物的擴(kuò)散作用將藥物釋放出來(lái).這同樣證明了PEG6k／PLA膠束結(jié)構(gòu)要更加穩(wěn)定.

表3 Ritger－Peppas模型計(jì)算 D2－10，D6－10，S2－10，S6－10，S2－5及S6－5體外釋放特征參數(shù)Tab.3 Release indicative of D2－10，D6－10，S2－10，S6－10，S2－5and S6－5micelles，calculated from Ritger－Peppas model

2.5 空白膠束及載藥膠束對(duì)C6細(xì)胞的存活率的影響

將兩種聚合物膠束以不同的濃度加入到C6細(xì)胞的培養(yǎng)基中，考察空白膠束的細(xì)胞毒性.從圖6（a）的柱狀圖中可以了解到，兩種制備方法均具有較好的細(xì)胞相容性，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率最高為20%，對(duì)細(xì)胞的正常生長(zhǎng)沒(méi)有影響.溶劑揮發(fā)／薄膜水化法盡管在制備過(guò)程中引入有機(jī)溶劑的乙腈，但細(xì)胞毒性仍舊很低.

游離紫杉醇溶液、D2－10，S2－10對(duì)C6活力抑制－濃度對(duì)數(shù)曲線見(jiàn)圖6.通過(guò)圖6計(jì)算得到游離紫杉醇溶液、D2－10，S2－10對(duì)C6細(xì)胞的IC50分別是0.6、0.7和21.6μg／ml.48h的長(zhǎng)周期孵育時(shí)間，D2－10與游離紫杉醇對(duì)C6細(xì)胞的毒性接近，可以在較低的藥物濃度下對(duì)細(xì)胞的活性予以抑制，S2－10的細(xì)胞抑制能力弱于其他兩組.這是因?yàn)?，D2－10的藥物膠束在孵育環(huán)境下，對(duì)于S2－10更易于逐步釋放至外界環(huán)境中，以實(shí)現(xiàn)持續(xù)的給藥.S2－10藥物在前期突釋后，隨著藥物釋放速度進(jìn)入平臺(tái)區(qū)，細(xì)胞的活力抑制也趨于穩(wěn)定.另外，這種釋放規(guī)律在24h短周期孵育實(shí)驗(yàn)中也有體現(xiàn)，24h內(nèi)同濃度的D2－10比S2－10對(duì)細(xì)胞的活力抑制弱.這也體現(xiàn)了二者釋放的不同，D2－10在24h內(nèi)釋放較為緩慢，48h可以實(shí)現(xiàn)有效的緩釋效果；S2－10在24h內(nèi)明顯突釋，后續(xù)藥物釋放速率減緩.

圖6 空白膠束D6－0和S6－0的C6細(xì)胞存活率－濃度柱狀圖（a），載藥膠束及游離紫杉醇的C6細(xì)胞存活率－對(duì)數(shù)濃度曲線（b）Fig.6 C6viability inhibition－concentration bars of blank micelles of D6－0and S6－0（a）C6viability inhibition－logarithmic concentration curve of PTX loaded micelles（b）

聚乳酸聚乙二醇三嵌段共聚物制備紫杉醇納米載藥膠束的制備技術(shù)對(duì)膠束的粒徑、藥物釋放行為、對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制效果有著顯著的影響.直接溶解法具有操作方便、經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)，所制備的膠束為200nm粒徑的球形結(jié)構(gòu).該膠束的體外釋放速率穩(wěn)定，對(duì)C6細(xì)胞的體外抑制結(jié)果可匹敵游離紫杉醇.然而，溶劑揮發(fā)／薄膜水化法制備的納米膠束具有較高的載藥量和包封率.與直接溶解法相比，其所制備的納米膠束粒徑較小，且存在50nm和150nm粒徑共存的現(xiàn)象，其中，50nm粒徑的納米球約占46.7%.實(shí)驗(yàn)證明，聚乳酸聚乙二醇三嵌段共聚物制備納米載藥膠束具有良好的相容性特點(diǎn).采用紫杉醇作為藥物模型綜合釋放行為和藥效評(píng)價(jià)對(duì)兩種納米載藥體系進(jìn)行篩選表明，直接溶解法具有制備的膠束穩(wěn)定、粒徑均一，可以實(shí)現(xiàn)藥物的穩(wěn)定釋放保證長(zhǎng)循環(huán)下的良好的藥效，具有更顯著的應(yīng)用前景.

[1]Bergmann T K， Green H，Brasch－Andersen C，etal.Retrospective study of the impact of pharmacogenetic variants on paclitaxel toxicity and survival in patients with ovarian cancer[J].European JournalofClinicalPharmacology，2011，67（1）:693－700.

[2]Chopra A，Kim T S I O S，Martinez D，etal.Combined therapy of an established，highly aggressive breast cancer in mice with paclitaxel and a unique DNA－based cell vaccine[J].IntJCancer，2006，118（11）:2888－2898.

[3]Stathopoulos G P，Katis C，Tsavdaridis D，etal.Front－line paclitaxel and topotecan chemotherapy in advanced or metastatic non－small－cell lung cancer:aphase II trial[J].CancerChemotherapyand Pharmacology，2006，58（11）:555－560.

[4]Iesalnieks I，Tange S，Scherer M N，etal.Paclitaxel promotes liver graft survival in rats and inhibits hepatocellular carcinoma growth in vitro and is a potentially useful drug for transplant patients with liver cancer[J].TransplantProc，2002，34（6）:2316－2317.

[5]Spencer C M，F(xiàn)aulds D.Paclitaxel－a review of its pharmacodynamic and pharmacokinetic properties and therapeutic potential in the treatment of cancer[J].Drug，1994，48（5）:794－847.

[6]Liggins R T，Burt H M.Polyether－polyester diblock copolymers for the preparation of paclitaxel loaded polymeric micelle formulations[J].AdvancedDrugDeliveryReviews，2002，54（2）:191－202.

[7]Zhang X C，Jackson J K，Burt H M.Development of amphiphilic diblock copolymers as micellar carriers of taxolOriginal Research Article[J].IntJPharm，1996，132（1－2）:195－206.

[8]Dong Y C，F(xiàn)eng S S.Methoxy poly（ethylene glycol）－poly（lactide）（MPEG－PLA）nanoparticles for controlled delivery of anticancer drugs[J].Biomaterials，2004，25（14）:2843－206.

[9]Lee S C，Huh K M，Lee J，etal.Hydrotropic polymeric micelles for enhanced paclitaxel solubility:In vitroandInvivocharacterization[J].Biomacromolecule，2007，8（1）:202－208.

[10]Ruan G，F(xiàn)eng S S.Preparation and characterization of poly（lactic acid）－poly（ethylene glycol）－poly（lactic acid）（PLA－PEG－PLA）microspheres for controlled release of paclitaxel[J].Biomaterials，2003，24（28）:5037－5044.

[11]Veronese F M，Pasut G.PEGylation，successful approach to drug delivery[J].DrugDiscoveryToday，2005，10（21）:1451－1458.

[12]Yang L，Wu X H，Liu F.Novel biodegradable polylactide／poly（ethylene glycol）micelles prepared by direct dissolution method for controlled delivery of anticancer drugs[J].PharmaceuticalResearch，2009，26（10）:2332－2342.

[13]Li S M，Vert M.Synthesis，characterization，and stereocomplex－induced gelation of block copolymers prepared by ring－opening polymerization of l（d）－Lactide in the presence of poly（ethylene glycol）[J].Macromolecules，2003，36（21）:2338－2342.

[14]Kim H，F(xiàn)assihi R.Application of a binary polymer system in drug release rate modulation.1.Characterization of release mechanism[J].JournalofPharmaceuticalSciences，1997，86（3）:316－322.

[15]Radwan M.Invitroevaluation of polyisobutylcyanoacrylate nanoparticles as a controlled drug carrier for theophylline[J].DrugDevelopmentandIndustrialPharmacy，1995，21（20）:2371－2375.