轉(zhuǎn)錄活化因子和表皮生長因子受體在非小細(xì)胞肺癌中表達的相關(guān)性研究

許學(xué)亮，邵紅玲

（1.山東省臨沂市人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科 276000；2.山東省臨沂市交通醫(yī)院呼吸內(nèi)科 276000）

肺癌是全世界癌癥死亡的常見病因之一，非小細(xì)胞肺癌（non－small cell lung cancer，NSCLC）占原發(fā)性肺癌的80%，而其中55%的患者在診斷時就已經(jīng)是局部晚期或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移［1］。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子5（signal transducer and activator of transcription 5，STAT5）是STATs蛋白家族的重要成員，具有信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和激活轉(zhuǎn)錄雙重功能。該信號通路接受生長因子、細(xì)胞因子等細(xì)胞外信號刺激，作用于細(xì)胞核內(nèi)特異的DNA片段，調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄，影響細(xì)胞的增殖、分化和凋亡，參與腫瘤的發(fā)生和演進［2－4］。表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）是癌基因c－erbB－2產(chǎn)物的同源物，其基因突變或表達異常與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，在癌癥發(fā)展過程中（如血管生成及腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、黏附和凋亡抑制等）起重要作用［5－6］?，F(xiàn)將STAT5和EGFR在NSCLC中表達的相關(guān)性報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年1月至2011年9月本院手術(shù)后經(jīng)病理學(xué)檢查證實為NSCLC的患者68例為NSCLC組。其中，男43例，女25例，年齡45～78歲，平均56.33歲。按WHO組織學(xué)分類、分期，鱗癌36例，腺癌32例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例；Ⅰ～Ⅱ期者39例，Ⅲ～Ⅳ期者29例；高～中分化36例，低分化32例。同時選取癌旁正常肺組織26例作為對照組?；颊咝g(shù)前均未接受任何化療及其他治療。

1.2 實驗方法

1.2.1 主要試劑 STAT5兔抗人多克隆抗體和羊抗兔二抗、SABC試劑盒、Poly－L－Lysine及DAB顯色試劑盒購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。EGFR為鼠抗人單克隆抗體，購自福州邁新公司。

1.2.2 標(biāo)本及處理 所有標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，常規(guī)于60℃溫箱烘烤2～3h，撈片后置于60℃烤箱干燥24h，室溫下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 免疫組織化學(xué)SBC法 68例NSCLC和26例正常肺組織標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，切片常規(guī)脫蠟水化后，高溫抗原修復(fù)，3%H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，并應(yīng)用正常馬血清封閉交叉反應(yīng)。采用EnVision法行免疫組織化學(xué)染色，再用DAB顯色、蘇木素復(fù)染，檢測STAT5、EGFR的表達情況。

1.2.4 陽性表達的判斷標(biāo)準(zhǔn) 以腫瘤細(xì)胞和正常肺組織上皮細(xì)胞的胞質(zhì)或胞核內(nèi)出現(xiàn)明顯的棕黃色或黃褐色顆粒為陽性細(xì)胞，著色定位準(zhǔn)確視為陽性結(jié)果。三者均采用半定量積分法判斷結(jié)果，根據(jù)細(xì)胞染色強度和染色細(xì)胞所占比例分別計分，兩積分之和來判斷最后結(jié)果。按染色強度記為0～3分：不著色為0分，輕度著色為1分，中度著色為2分，強著色為3分。按陽性細(xì)胞數(shù)記為0～4分：無著色為0分，＜25%為l分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，＞75%為4分。以上兩個積分相加：0分為（－），1～2分為弱陽性，3～4分為（＋），5～6分為（＋＋）；7分為（＋＋＋）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。組間比較采用χ2檢驗和t檢驗，兩者采用Spearman進行相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

兩組STAT5、EGFR在NSCLC中的表達情況見表1。Spearman等級相關(guān)分析顯示，NSCLC組中STAT5與EGFR的表達呈明顯正相關(guān)（rs＝0.430，P＜0.05）。STAT5的陽性表達與NSCLC組織學(xué)類型有關(guān)，STAT5在腺癌組織中的表達明顯高于鱗癌（P＜0.05）。STAT5的陽性表達與NSCLC分化程度、有（無）淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期無關(guān)（P＞0.05）。EGFR的陽性表達與NSCLC有（無）淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)（P＜0.05）。伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC組EGFR的陽性表達率明顯高于不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC組；EGFR的陽性表達在NSCLC中隨TNM分期的增加而增加，其在Ⅲ＋Ⅳ期中的陽性表達率明顯高于Ⅰ＋Ⅱ期。EGFR的陽性表達與NSCLC的分化程度和組織學(xué)分型無關(guān)（P＞0.05）。

表1 兩組STAT5、EGFR在NSCLC中的表達情況比較［n（%）］

3 討 論

STATs是影響細(xì)胞增殖、分化、凋亡的一類潛在的轉(zhuǎn)錄因子。迄今為止，在哺乳動物中發(fā)現(xiàn)STAT家族包括7個成員，其中STAT5和STAT3與腫瘤發(fā)生關(guān)系最為密切。STAT5是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子家族中的重要一員，被認(rèn)為是細(xì)胞增殖促進因子和凋亡抑制因子。它的異常激活和過度表達能誘發(fā)腫瘤的形成。在人類的多種惡性腫瘤中均發(fā)現(xiàn)了STAT5的異常激活，如乳腺癌、前列腺癌、鼻咽癌、白血病、肺癌等［7－9］。本實驗結(jié)果顯示，STAT5在NSCLC組織中的陽性表達率為91.2%，明顯高于正常癌旁肺組織7.69%的陽性表達率，提示STAT5的過表達促進了NSCLC的發(fā)生、發(fā)展。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，STAT5的陽性表達與組織學(xué)類型有關(guān)，在腺癌中的表達明顯高于鱗癌，而與分化程度、有（無）淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期無關(guān)。這可能與腺癌的惡性程度高有關(guān)。

EGFR是腫瘤細(xì)胞增殖、分化和抗凋亡過程中的重要調(diào)節(jié)因子，其高表達可以促進腫瘤細(xì)胞增殖、黏附、侵襲和轉(zhuǎn)移，誘導(dǎo)腫瘤新生血管形成［6］。EGFR與配體結(jié)合后，發(fā)生二聚化，激活了受體中的酪氨酸激酶活性，導(dǎo)致其胞質(zhì)區(qū)的酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化作用，并暴露了酪氨酸激酶作用靶蛋白的結(jié)合位點，進而激活下游的多條信號途徑，并上調(diào)VEGF和EGF表達，最終影響細(xì)胞的增殖和分化［10］。已發(fā)現(xiàn)EGFR在很多惡性腫瘤中過表達，如胃癌、結(jié)直腸癌、頭頸鱗癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、腎癌和腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤等［11－17］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，EGFR在NSCLC中的陽性表達率明顯高于正常癌旁肺組織，且EGFR的陽性表達與NSCLC的分化程度、有（無）轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)，說明EGFR是NSCLC發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中的一個重要因子。Berghmans等［18］的研究結(jié)果也支持這一觀點。

肺癌是典型的血管依賴性腫瘤，腫瘤的生長離不開新生血管的形成，而新血管的生成又增加了腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的機會。EGFR促進腫瘤的發(fā)展，加速腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移［19］。本研究結(jié)果顯示，STAT5與EGFR的表達呈明顯正相關(guān)（rs＝0.430，P＜0.05）。這說明STAT5與EGFR在NSCLC發(fā)生、發(fā)展中相互作用，共同促進NSCLC的侵襲和轉(zhuǎn)移，STAT5蛋白的激活雖然不會直接導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，但它卻是腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵因子。

腫瘤的發(fā)生是多種癌基因激活，抑癌基因缺失以及其他外在因素共同作用的結(jié)果，STAT5信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路過度激活后，上調(diào)EGFR表達，促進腫瘤細(xì)胞的增殖、血管形成、侵襲和轉(zhuǎn)移，抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生早期轉(zhuǎn)移，易引起腫瘤細(xì)胞耐藥等。隨著JAKs／STATs信號途徑、EGFR的深入研究，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中所起的作用越來越受到重視。雖然STAT5和EGFR導(dǎo)致腫瘤的研究已經(jīng)取得了很大的進展，但是深入探討STAT5和EGFR與各信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路間的相互作用機制及其與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系還需要進一步研究。

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