苜蓿多糖在畜禽飼料中的應(yīng)用

陳元元 朱宇旌 張 勇

(沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，沈陽(yáng) 110866)

紫花苜蓿是世界上栽培面積最廣的豆科牧草之一，具有抗寒、抗旱、耐瘠薄、抗風(fēng)沙等特點(diǎn)。苜蓿干物質(zhì)含量可達(dá)10% ～15%，粗蛋白質(zhì)、維生素和礦物質(zhì)含量豐富，氨基酸平衡。苜蓿多糖(alfalfa polysaccharides，APS)是從紫花苜蓿中提取的具有生物活性的植物多糖，是苜蓿的重要營(yíng)養(yǎng)成分，無(wú)毒性，可提高畜禽免疫功能，應(yīng)用于畜禽飼料可避免抗生素帶來(lái)的耐藥性及藥物殘留等問(wèn)題，具有很好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益，因此，將APS開(kāi)發(fā)為飼料添加劑應(yīng)用于畜禽飼料具有重要意義。

1 APS的結(jié)構(gòu)

APS是由酸溶性碳水化合物構(gòu)成的酸性多糖，成分為葡萄糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸和另一種未知單糖，不含蛋白質(zhì)和淀粉。超濾法測(cè)得其分子質(zhì)量為 20 ～60 ku[1]。

2 APS的提取

APS為水溶性非淀粉多糖，難溶于乙醇，性質(zhì)穩(wěn)定，主要提取方法有醇提法和水煮法，考慮到操作簡(jiǎn)單和節(jié)約試劑成本，多選用水煮法提取。試驗(yàn)得出APS的最佳提取條件為:溫度100℃，料水比1∶40 ～1∶20，浸提時(shí)間 1 ～2 h，醇析時(shí)乙醇濃度為80% ～95%[2]，具體條件受苜蓿品種、茬次和試驗(yàn)條件等因素影響。超聲波輔助可使溫度降低到70～80℃，浸提時(shí)間縮短到20～30 min，并可提高提取率[3]。

3 APS的純化與純度鑒定

水煮法得到的APS含較多雜質(zhì)，其中蛋白質(zhì)成分居多，實(shí)驗(yàn)室中最常用的多糖脫蛋白質(zhì)方法是savage法，最常用的多糖分級(jí)與純化采用Sephadex凝膠柱層析法。Sephadex是一種葡萄糖凝膠，A系列Sephadex利用不同多糖分子與其吸附程度不同的原理，對(duì)樣品進(jìn)行分級(jí)和純化。G系列Sephadex依據(jù)各種多糖分子質(zhì)量的不同而將其分開(kāi)。APS分離出AP1、AP2、AP3和AP4 4個(gè)組分，其中AP2和AP3是主要成分，二者都為均一多糖。AP2-a和AP3-b 2種組分純度較高，不含蛋白質(zhì)、多肽、核酸、糖醛酸、淀粉等雜質(zhì)，不含還原糖、單糖和二糖，它們的物理性質(zhì)均為白色粉末，易溶于熱水，較難溶于冷水，不溶于乙醇、乙醚、丙酮、正丁醇等有機(jī)溶劑，黏度較大，氣味清香，平均分子質(zhì)量分別為15 019和20 739 u，活性范圍在10 000～2 000 000 U，均屬活性多糖。AP2-a中含有D-吡喃葡萄糖、D-果糖及吡喃環(huán)結(jié)構(gòu)，AP3-b中含有D-吡喃葡萄糖、D-果糖和D-鼠李糖及吡喃環(huán)結(jié)構(gòu)，其中D-吡喃葡萄糖是與免疫、抗氧化和抗腫瘤等生物活性相關(guān)的結(jié)構(gòu)。

4 APS的生物學(xué)功能

4.1 APS的免疫調(diào)節(jié)功能

植物多糖具有廣泛的生物活性，普遍具有免疫調(diào)節(jié)作用[4-5]。免疫器官的發(fā)育狀況可直接影響機(jī)體免疫應(yīng)答水平、抵抗外來(lái)微生物感染和侵入的能力[6]。試驗(yàn)證明，APS能不同程度地促進(jìn)畜禽免疫器官胸腺、法氏囊、脾臟、盲腸、扁桃體的發(fā)育，延緩胸腺的萎縮[7]，還能促進(jìn)肉雞腸道后段有益菌的生長(zhǎng)，特別是乳酸菌，抑制埃希大腸桿菌的增殖，增強(qiáng)機(jī)體的抵抗力[8]。APS還能促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化，增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能[9]。在體外APS能夠刺激植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)和PWM培養(yǎng)液誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，說(shuō)明APS有縮短細(xì)胞周期、顯著提高T細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的作用，它還能增強(qiáng)由T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫能力，對(duì)自然殺傷細(xì)胞(NK)的活化有影響[10]。另有試驗(yàn)證明，紅細(xì)胞通過(guò)其表面的C3b受體與抗原-抗體-補(bǔ)體免疫復(fù)合物(CIC)結(jié)合而發(fā)揮清除CIC和促進(jìn)吞噬的作用，增加紅細(xì)胞免疫功能，說(shuō)明APS對(duì)雞紅細(xì)胞免疫功能具有繼發(fā)增強(qiáng)作用。APS還能糾正環(huán)磷酰胺對(duì)抗體形成細(xì)胞的抑制作用，在增強(qiáng)機(jī)體防御能力的同時(shí)快速消滅病原體，清除機(jī)體內(nèi)的衰老死亡細(xì)胞[11]。研究表明，APS可能通過(guò)抗原遞呈細(xì)胞(APCs)對(duì)抗惡性細(xì)胞或惡性細(xì)胞碎片，抗原肽在APCs上結(jié)合到主要組織相容性復(fù)合體(MHC)Ⅰ或Ⅱ，MHCⅠ分子的抗原肽激活早期細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CD8+)，而MHCⅡ分子的抗原肽激活早期輔助性T細(xì)胞(CD4+)，T輔助細(xì)胞1(Th1)產(chǎn)生細(xì)胞因子，包括白介素2(IL-2)和干擾素 γ(IFN-γ)，這些細(xì)胞因子誘導(dǎo)細(xì)胞增殖和腫瘤抗原特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)的激活，激活NK和巨噬細(xì)胞，誘導(dǎo)淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAK)產(chǎn)生(圖1)[12]，所以 APS 可顯著促進(jìn)CD4+增殖和提高CD4+/CD8+，進(jìn)而起到免疫作用。APS還可提高機(jī)體的體液免疫功能，調(diào)節(jié)B細(xì)胞、CTL和M細(xì)胞等細(xì)胞功能，促進(jìn)免疫球蛋白(Ig)類抗體含量的提高，促進(jìn)IL-2的產(chǎn)生和白介素2受體(IL-2R)的基因表達(dá)，誘導(dǎo)白介素6(IL-6)和腫瘤壞死因子 α(TNF-α)的產(chǎn)生[13]。APS通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體的免疫力，減少應(yīng)激，把與病變相關(guān)的無(wú)效免疫應(yīng)答降到最低限度，從而使?fàn)I養(yǎng)成分被充分利用，這可能是APS改善動(dòng)物生長(zhǎng)性能的機(jī)制之一[14]。

4.2 APS的抗氧化功能

機(jī)體的代謝產(chǎn)生過(guò)多自由基會(huì)引起病變甚至死亡，但自身防護(hù)系統(tǒng)對(duì)自由基的清除能力有限[15]，現(xiàn)被廣泛應(yīng)用的合成抗氧化劑因其毒性而減少使用，植物多糖作為一種天然抗氧化生物活性化合物而備受關(guān)注。APS作為一種自由基清除劑，除了與其化學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)，它還可以通過(guò)激活內(nèi)源性抗氧化防御系統(tǒng)起到間接保護(hù)的作用，可能有2種作用機(jī)制:第一，APS可能與自由基直接反應(yīng)來(lái)提高抗氧化酶活性;第二，APS可能會(huì)影響抗氧化酶的基因表達(dá)，并調(diào)節(jié)特定酶的活動(dòng)[16]。1，1-二苯基 -2-苦基苯肼(1，1-dipheyl-2-picrylhydrazyl，DPPH)和羥自由基是2個(gè)最有代表性的自由基。DPPH是一種穩(wěn)定的自由基，抗氧化劑將電子或氫原子轉(zhuǎn)移到DPPH，從而消除了DPPH的自由基性質(zhì)，抗氧化劑的抗氧化活性可通過(guò)對(duì)DPPH的抑制率表示，通過(guò)測(cè)試DPPH可以反映出自由基的清除程度。羥自由基是破壞性最強(qiáng)的自由基，它能通過(guò)所有需氧有機(jī)體形成和分解[17]，會(huì)導(dǎo)致任何主要生物分子(如DNA、蛋白質(zhì)、脂類和小細(xì)胞)的氧化損傷，進(jìn)而導(dǎo)致心血管和神經(jīng)性疾病[18]。自由基生成引起老化是因?yàn)榛钚匝踝?reactive oxygen species，ROS)的增加和抗氧化防御的降低，前者主要是生物體正常細(xì)胞代謝的副產(chǎn)品，多產(chǎn)生于線粒體。ROS能引起脂質(zhì)過(guò)氧化、氨基酸殘基氧化、蛋白質(zhì)交聯(lián)形成DNA氧化損傷。正常生理?xiàng)l件下，ROS可以保護(hù)細(xì)胞的系統(tǒng)清除，但在某些病理?xiàng)l件下，ROS之間生成和消除動(dòng)態(tài)平衡可能被打破，導(dǎo)致細(xì)胞ROS水平增加，高水平的ROS可能在各種細(xì)胞成分中發(fā)生氧化損傷，并導(dǎo)致細(xì)胞死亡[19]。正常的生物體內(nèi)都有其抗氧化防御的清除氧化劑，來(lái)防止ROS對(duì)細(xì)胞的損傷。如超氧化物歧化酶(SOD)是一種在線粒體中含有的，對(duì)活性氧進(jìn)行有效防御的酶，它能通過(guò)超氧陰離子自由基加速過(guò)氧化氫的形成，清除氧自由基。谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)可將過(guò)氧化氫和過(guò)氧化物分解為無(wú)毒的產(chǎn)品，并通過(guò)細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化物終止脂質(zhì)過(guò)氧化的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。SOD和GSH-Px的內(nèi)源性抗氧化酶可以將ROS轉(zhuǎn)化成更少的有毒化合物，超氧化物先由SOD分解成過(guò)氧化氫，隨后通過(guò)一系列包括GSH-Px的活性酶催化和轉(zhuǎn)化變成水。丙二醛(MDA)可通過(guò)監(jiān)測(cè)機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化代謝產(chǎn)物反映自由基對(duì)組織細(xì)胞的損傷[20]。這些抗氧化酶能由脂質(zhì)過(guò)氧化物或自由基引起失活，從而導(dǎo)致其在氧化條件下通過(guò)各種條件誘導(dǎo)的毒性激活，ROS產(chǎn)量是評(píng)價(jià)活細(xì)胞的氧化損傷程度的直接指標(biāo)。研究表明，APS能清除ROS同時(shí)抑制自由基的產(chǎn)生[21]，還能夠提高SOD、GSH-Px活性，減少M(fèi)DA的生成，進(jìn)而提高機(jī)體抗氧化能力[22-24]，保護(hù)機(jī)體正常細(xì)胞免受自由基攻擊，說(shuō)明APS對(duì)機(jī)體有顯著的抗氧化作用，這也是它抗衰老、抗炎癥、降血脂、抗腫瘤等功效的藥理基礎(chǔ)[25]。在一定濃度下，APS清除DPPH及羥自由基的作用，隨濃度的增加而增強(qiáng)，存在劑量-效應(yīng)關(guān)系[26]，但因淋巴細(xì)胞中存在對(duì)多糖的反饋調(diào)節(jié)機(jī)制，所以并非其濃度越高抗氧化作用越好。另外，不同植物多糖的抗氧化效果不同，可能與其化學(xué)結(jié)構(gòu)和組成有關(guān)[27]。

圖1 苜蓿多糖的免疫應(yīng)答和作用方式流程圖Fig.1 Schematic representation of immune responses and actions of APS[12]

4.3 APS的抗腫瘤功能

惡性腫瘤已成為威脅人類生存的主要疾病之一，多糖可進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)，且無(wú)毒副作用。研究表明，多糖抗腫瘤的機(jī)制是通過(guò)刺激相關(guān)細(xì)胞發(fā)生免疫反應(yīng)，強(qiáng)化或活化相關(guān)免疫細(xì)胞，提高TNF-α、超氧化物離子和IL-2等細(xì)胞因子含量。多糖抗腫瘤是通過(guò)提高機(jī)體的特異性或非特異性免疫功能，增強(qiáng)寄主自身的免疫力而發(fā)揮作用的。由相關(guān)試驗(yàn)可知，APS抗腫瘤可能有3個(gè)主要作用機(jī)制(圖2):第一，通過(guò)抑制增加癌癥的免疫因子的產(chǎn)生或中和免疫因子提高宿主免疫力。第二，直接或通過(guò)調(diào)節(jié)各種細(xì)胞因子的產(chǎn)生來(lái)激活免疫細(xì)胞。第三，直接作用于癌細(xì)胞，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，MHCⅠ抗原的表達(dá)增強(qiáng)。這些機(jī)制是現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的多糖抑制癌癥復(fù)發(fā)的理論依據(jù)。張東杰等[28]的試驗(yàn)說(shuō)明APS在一定程度上抑制了荷瘤小鼠體重的增加，延長(zhǎng)了其生存期，對(duì)腫瘤的治療有幫助。

4.4 APS的抗感染功能

機(jī)體的宿主細(xì)胞抗菌防御系統(tǒng)遭到破壞時(shí)可能被細(xì)菌感染，另外細(xì)菌也能通過(guò)在宿主上皮黏膜表面定植來(lái)感染健康細(xì)胞。許多細(xì)菌可與宿主細(xì)胞表面的糖類結(jié)合，稱為黏附。細(xì)菌主要以長(zhǎng)絲狀菌毛結(jié)構(gòu)黏附宿主細(xì)胞，菌毛從細(xì)菌細(xì)胞表面呈輻射狀，許多細(xì)菌毒素也由單個(gè)蛋白質(zhì)亞基聚集而成，每個(gè)亞基包含1個(gè)或多個(gè)糖類結(jié)合位點(diǎn)(圖3)。與細(xì)菌結(jié)構(gòu)相似的糖類可通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)與宿主細(xì)胞結(jié)合而抑制細(xì)菌定植或黏膜上皮細(xì)胞中毒[29]。一般單個(gè)糖序列與蛋白質(zhì)結(jié)合能力很低，通過(guò)每個(gè)蛋白質(zhì)與糖的結(jié)合點(diǎn)組成多聚體，可使糖類與蛋白質(zhì)的結(jié)合能力顯著增加，這樣一種蛋白質(zhì)便可與同源寡聚多糖緊密結(jié)合。多糖抗感染就是通過(guò)多糖與宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)結(jié)合，從而使細(xì)菌失去與宿主細(xì)胞結(jié)合的親和力，無(wú)法結(jié)合宿主細(xì)胞受體上的糖序列而抑制細(xì)菌感染的。

圖2 腫瘤微環(huán)境和苜蓿多糖的作用過(guò)程Fig.2 Tumor microenvironment and actions of APS[12]

圖3 細(xì)菌與宿主細(xì)胞表面結(jié)合Fig.3 The binding of microbes to cell surfaces of the host[29]

4.5 APS的其他功能

APS在一定劑量范圍內(nèi)對(duì)畜禽有明顯的促進(jìn)生長(zhǎng)、增強(qiáng)免疫功能、抗氧化、抗感染的作用，對(duì)T細(xì)胞、B細(xì)胞活化有免疫增強(qiáng)作用，APS還有降血脂、降血糖、降血壓、解毒、抗血栓、鎮(zhèn)痛、消炎、抗菌、抗輻射、抗疲勞、抗衰老、抗蟲(chóng)、化感等作用[30]，另外APS還可治療高膽固醇，強(qiáng)化血管和預(yù)防動(dòng)脈硬化、心肌梗塞等。

5 APS在畜禽飼料中的應(yīng)用

5.1 APS在肉雞上的應(yīng)用

APS可以提高畜禽抗病能力。郝永清等[10]用APS做肉仔雞疫苗佐劑進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示肉仔雞體內(nèi)抗體免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)水平提高，說(shuō)明多糖可通過(guò)激活補(bǔ)體強(qiáng)化抗體作用，增強(qiáng)畜禽免疫功能，提高畜禽抗病能力。

APS可以促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)。夏素銀等[31]用肉仔雞進(jìn)行試驗(yàn)，分別在基礎(chǔ)飼糧中添加0、0.5%、1.0%和2.0%APS，結(jié)果顯示添加APS 1%組增重高于0組，而2%組低于0組，1%組效果最好。說(shuō)明添加APS能夠促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)但存在劑量效應(yīng)，適量添加APS可提高畜禽對(duì)飼糧的利用率，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成;江振瑩等[32]試驗(yàn)肉仔雞不同生長(zhǎng)階段的體重測(cè)定結(jié)果顯示，APS可以促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)，其中1%添加組效果最好。

APS可以促進(jìn)畜禽免疫器官的發(fā)育。郝永清等[33]分別將APS通過(guò)不同途徑對(duì)肉仔雞進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示APS可促進(jìn)肉仔雞胸腺、法氏囊、脾臟、盲腸和扁桃體發(fā)育，說(shuō)明APS能夠促進(jìn)畜禽免疫器官的發(fā)育。

APS可以促進(jìn)畜禽淋巴細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)化。劉晴雪等[34]分別將不同濃度的APS加入體外培養(yǎng)肉仔雞淋巴細(xì)胞，測(cè)定其增殖變化，結(jié)果顯示淋巴細(xì)胞的吸光度值(OD)隨APS濃度增加先增高后降低;同濃度APS對(duì)不同器官淋巴細(xì)胞刺激程度不同，外周血和脾臟淋巴細(xì)胞OD低于胸腺和法氏囊;APS對(duì)外周血、脾臟、法氏囊和胸腺的最佳刺激濃度分別為 20、8、15 和 15 μg/mL。說(shuō)明APS可通過(guò)刺激淋巴細(xì)胞的增殖提高畜禽的抗病能力。江振瑩等[32]分別添加0、1% 、8%APS 對(duì)肉仔雞進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示APS能使雞血清中雞新城疫抗體滴度提高，促進(jìn)細(xì)胞吞噬和轉(zhuǎn)化能力，8%添加組效果最好。郝永清等[33]將APS分別用肌注(2.5、5 和 10 mg/只)、加入疫苗(2.5、5 和10 mg/只)、飼料添加劑(0、10和80 mg/kg)3種不同方式對(duì)肉仔雞進(jìn)行試驗(yàn)，在不同生長(zhǎng)階段檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞的增殖，結(jié)果顯示APS可促進(jìn)肉仔雞淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和細(xì)胞吞噬功能，提高血清中雞新城疫的抗體滴度。APS肌注5 mg/只組與配伍疫苗10 mg/只組和8%飼糧中添加組促進(jìn)免疫器官發(fā)育效果最好。說(shuō)明APS能增強(qiáng)畜禽的細(xì)胞免疫功能，提高畜禽抗病能力。章世元等[35]分別用15、20和50 μg/mL APS對(duì)肉仔雞進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示適量APS可提高T細(xì)胞OD，促進(jìn)肉仔雞淋巴細(xì)胞增殖，20 μg/mL時(shí)效果最好，說(shuō)明APS可促進(jìn)畜禽淋巴細(xì)胞增殖，且存在劑量效應(yīng)(表 1)。

表1 APS在肉雞上的應(yīng)用效果Table1 Application effects of APS on broilers

5.2 APS在仔豬上的應(yīng)用

張世軍等[36]將APS加入豬瘟兔化弱毒疫苗對(duì)仔豬進(jìn)行免疫和攻毒試驗(yàn)，結(jié)果顯示試驗(yàn)組仔豬外周血液的B細(xì)胞含量和IgG水平提高，仔豬發(fā)熱比對(duì)照組晚，時(shí)間短，程度輕，對(duì)豬瘟強(qiáng)毒抵抗力增強(qiáng)，比單一疫苗預(yù)防豬瘟效果好。說(shuō)明APS可強(qiáng)化豬瘟疫苗免疫作用，且不會(huì)損害肝、心臟等臟器。

6 小結(jié)

我國(guó)苜蓿資源豐富，APS的原料成本相對(duì)較低，無(wú)毒副作用，容易實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，因此倍受?chē)?guó)內(nèi)外市場(chǎng)青睞。APS具有增強(qiáng)免疫力、抗氧化、抗感染、抗腫瘤、降血脂、降血糖、解毒、抗菌、抗炎等作用，作為一種植物提取物，在一定劑量范圍內(nèi)增強(qiáng)畜禽免疫力，降低疾病死亡率，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，有利于提高動(dòng)物繁殖與機(jī)體性能，現(xiàn)已在畜禽養(yǎng)殖中大量應(yīng)用。近年來(lái)隨著人們對(duì)食品安全、動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)等各個(gè)領(lǐng)域重視度的不斷提高，APS在相關(guān)領(lǐng)域的作用日益凸顯。隨著多糖制備、結(jié)構(gòu)、合成研究的不斷深入，其應(yīng)用市場(chǎng)將更加廣闊。但是苜蓿產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)化仍然存在一定問(wèn)題:產(chǎn)業(yè)化投資需求大;市場(chǎng)對(duì)產(chǎn)品的數(shù)量要求大;科研投入不足等。另外APS分離提純的程序復(fù)雜，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不好控制，結(jié)構(gòu)測(cè)定也尚無(wú)一種有效方法，因此APS在畜禽飼料中的應(yīng)用還有待進(jìn)一步研究與探索。

[1]何云，劉圈煒，王成章，等.紫花苜蓿活性成分研究進(jìn)展[J].飼料工業(yè)，2005(17):52-53.

[2]王翀.苜蓿多糖的提取純化、結(jié)構(gòu)鑒定及活性功能研究[D].碩士學(xué)位論文.沈陽(yáng):沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011:3-10.

[3]CHEN Y G，SHEN Z J，CHEN X P.Ealuation of free radicals scavenging and immunity-modulatory activities of Purslane polysaccharides[J].International Journal ofBiologicalMacromolecules，2009，45:448-452.

[4]CHEUNG J K H，LI J，CHEUNG A W H，et al.Cordysinocan，a polysaccharide isolated from cultured Cordyceps，activates immune responses in cultured T-lymphocytes and macrophages:signaling cascade and induction of cytokines[J].Journal of Ethnopharmacology，2009，124(1):61-68.

[5]CHEN Z S，TAN B K H，CHAN S H.Activation of T-lymphocytes by polysaccharide-protein complex from Lycium barbarum L.[J].International Immunopharmacology，2008，8(12):1663-1671.

[6]劉晴雪，董曉芳，佟建明，等.水溶性苜蓿多糖對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)及免疫性能的影響[J].飼料研究，2010(7):1-8.

[7]CHEN H X，ZHANG M，XIE B J.Components and antioxidant activity of polysacchande conjugate from green tea[J].Food Chemistry，2005，90:17-21.

[8]劉明美，呂宗友.苜蓿在養(yǎng)雞業(yè)中的運(yùn)用進(jìn)展[J].中國(guó)牧業(yè)通訊，2011(5):66-67.

[9]ZHANG X，YU L，LI X H，et al.Total fractionation and characterization of the water-soluble polysaccharides isolated from Panax ginseng C.A.Meyer[J].Carbohydrate Polymers，2009，77(3):544-552.

[10]郝永清，玉蘭.苜蓿生物活性多糖促進(jìn)肉仔雞生長(zhǎng)的機(jī)理淺析[J].當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè)，1999(7):27-28.

[11]趙坤，李敬璽，張慧輝，等.苜蓿多糖對(duì)豬瘟兔化弱毒疫苗免疫效果的影響[J].河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005(4):425-429.

[12]MAEHARA Y，TSUJITANI S，SAEKI H，et al.Biological mechanism and clinical effect of protein-bound polysaccharide K(KRESTI):review of development and future perspectives[J].Surgery Today，2012，42:8-28.

[13]王彥華，王成章，史瑩華，等.苜蓿多糖的研究進(jìn)展[J].草業(yè)科學(xué)，2007(4):50-52.

[14]唐淑珍，孫國(guó)君，盛明明，等.水溶性苜蓿多糖對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能及免疫功能的影響[J].飼料博覽，2007(1):9-11.

[15]DIZDAROGLU M，JARUGA P，BIRINCIOGLU M，et al.Free radical-induced damage to DNA mechanisms and measurement[J].Free Radical Biology and Medicine，2002，32:1102-1115.

[16]LIU H W，DONG X F，TONG J M，et al.Alfalfa polysaccharides improve the growth performance and antioxidant status of heat-stressed rabbits[J].Livestock Science，2010，131:88-93.

[17]SAKANAKA S，TACHIBANA Y，OKADA Y.Preparation and antioxidant properties of extracts of Japanese persimmon leaf tea(kakinoha-cha)[J].Food Chemistry，2005，89:569-575.

[18]ESMAEILI M A，SONBOLI A.Antioxidant，free radical scavenging activities of Salvia brachyantha and its protective effect against oxidative cardiac cell injury[J].Food and Chemical Toxicology，2010(48):846-853.

[19]JIANG J，GUO Y J，NIU A J.Extraction，characterization of Angelica sinensis polysaccharides and modulatory effect of the polysaccharides and Tai Chi exercise on oxidative injury in middle-aged women subjects[J].Livestock Science，2009(77):384-388.

[20]徐春燕.苜蓿多糖和黃芪多糖對(duì)肉仔雞抗氧化性能影響的研究[D].碩士學(xué)位論文.揚(yáng)州:揚(yáng)州大學(xué)，2010:1-10.

[21]LIN C L，WANG C C，CHANG S C，et aL.Antioxidantive activity of polysaccharide fractions isolated from Lycium barbarum Linnaeus[J].International Journal of Biological Maeromoleculei，2009，45(2):146-151.

[22]YU Z H，JIN C，XIN M，et a1.Effect of Aloe vera polysaccharides on immunity and antioxidant activities in oral ulcer animal models[J].Carbohydrate Polymers，2009，75(2):307-311.

[23]ZHOU M，CHEN Y QUYANG Q，et a1.Reduction of the oxidative injury to the rabbits with established atherosclerosis by protein bound polysaccharide from corilous vesicolor[J].The American Journal of Chinese Medicine，2001，22(1):1-4.

[24]XUE S X，CHEN X M，LU J X，et a1.Protective effect of sulfated achyrranthes bidentata polysaccharides on streptozotocin-induced oxidative stress in rats[J].Carbohydrate Polymers，2009，75(3):415-419.

[25]王健，龔興國(guó).多糖的抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)生化藥物雜志，2001，22(1):52-54.

[26]劉華偉，董曉芳，佟建明.苜蓿、黃芪、地衣芽孢桿菌胞外多糖體外抗氧化活性研究[J].食品工業(yè)科學(xué)，2011(6):76-78.

[27]ZHA X Q，WANG J H，YANG X F，et al.Antioxidant properties of polysaccharide fractions with different molecular mass extracted with hot-water from rice bran[J].Carbohydrate Polymer，2009，78(3):570-575.

[28]張東杰，馮昆.苜蓿多糖抗腫瘤活性初探[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2006(6):41-43.

[29]MULVEYA G，KITOVB P Ⅰ，MARCATOA P，et al.Glycan mimicry as a basis for novel anti-infective drugs[J].Biochimie，2001，83:841-847.

[30]SANIEWSKA A，JURZYSTA M，BIAY Z，et al.Differential antifungal activity of alfalfa(Medicago sativa L.)saponins originated from roots and aerial parts for some ornamental plant pathogens[J].Acta Agrobotanica，2001，54:31-43.

[31]夏素銀，嚴(yán)學(xué)兵，王成章，等.紫花苜蓿生物活性成分在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用[J].草業(yè)科學(xué)，2010，27:137-138.

[32]江振瑩，玉蘭.水溶性苜蓿多糖對(duì)肉仔雞營(yíng)養(yǎng)免疫作用的研究[J].飼料工業(yè)，2005，26(21):15-16.

[33]郝永清，王麗榮，董永軍，等.水溶性苜蓿多糖對(duì)肉仔雞免疫器官發(fā)育影響的研究[J].內(nèi)蒙古畜牧科學(xué)，2003(2):10-11.

[34]劉晴雪，董曉芳，佟建明.水溶性苜蓿多糖對(duì)肉仔雞T、B淋巴細(xì)胞體外增殖的影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2010，41(9):1185-1190.

[35]章世元，徐春燕，董曉芳.苜蓿多糖和黃芪多糖對(duì)肉仔雞淋巴細(xì)胞增殖的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2010，22(3):670-674.

[36]張世軍，王三虎，趙坤.苜蓿多糖對(duì)豬瘟兔化弱毒疫苗免疫應(yīng)答強(qiáng)化作用的研究[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003(10):57-60.